PRUNE2点突变影响前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移

背景与目的:PRUNE2是成神经细胞瘤的一个特异性预后相关基因,在调节成神经细胞瘤的细胞分化、增殖和侵袭方面发挥着重要作用。PRUNE2低表达与前列腺癌的不良预后密切相关。探讨PRUNE2点突变对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:通过构建PRUNE2基因野生型和突变型过表达的重组载体并将其转染到DU145细胞中构建相应稳转株。利用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验和克隆形成实验检测细胞恶性增殖能力,通过细胞凋亡实验检测细胞凋亡能力,采用transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白的表达水平,通过免疫荧光和免疫共沉淀实验检测蛋白之间的相互作用。结果:转染突变型PRUNE2 E370K基因的DU145细胞恶性增殖、侵袭和迁移能力均较对照组显著增强,细胞凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。PRUNE2与RhoA之间可以相互结合,但是PRUNE2 E370K突变体与RhoA之间的相关作用明显减弱。同时,PRUNE2 E370K突变体促进Rho通路下游ROCK蛋白和FAK蛋白的表达,促进与细胞增殖相关的Bcl-2和cyclin D1蛋白的表达,同时抑制与侵袭、迁移相关抑制蛋白E-cadherin的表达。结论:前列腺癌DU145细胞中PRUNE2基因点突变可以促进细胞增殖、侵袭和迁移,并抑制细胞凋亡。

心有多大,舞台就有多大

“心有多大,舞台就有多大”这是一句老生常谈的名言,在我看来,这句话说的是,人生就像一个大舞台,每个人都是自己人生的主角,你的人生舞台有多大,主要取决于你的理念和信念。只有树立远大的目标、坚定自己的理想信念,并不断为之奋斗,才能吸引更多的观众,人生的舞台也会变得无边无际。

F2RL3影响肾癌A498细胞增殖、侵袭、转移及糖酵解效应

背景与目的:F2R样凝血酶/胰蛋白酶受体3(F2R like thrombin or trypsin receptor 3,F2RL3)高表达与肾癌的不良预后密切相关,但其在肾癌发生、发展中的功能未见报道。本研究旨在探讨F2RL3与肾癌A498细胞恶性增殖、侵袭、转移和糖代谢的关系。方法:通过敲减肾癌A498细胞中F2RL3基因表达,检测细胞恶性增殖、侵袭、转移和吸收葡萄糖、产生乳酸能力的变化以及糖酵解通路中关键基因的表达。结果:F2RL3低表达可以抑制A498细胞的增殖、侵袭及转移能力,以及抑制葡萄糖的吸收和乳酸的生成,结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论:肾癌A498细胞中F2RL3可以正向调控细胞的增殖、侵袭、转移以及糖酵解效应。这些结果为研究肾癌细胞侵袭、转移与糖代谢之间的关系提供了重要的理论依据。

家蚕β-呋喃果糖苷酶基因BmSuc1的CRISPR敲除载体的构建与导入

【目的】CRISPR/Cas9是近些年报道较多的基因编辑新工具,具有简便高效、特异性强等优势。BmSuc1是从鳞翅目经济昆虫家蚕Bombyx mori体内发现的编码β-呋喃果糖苷酶(β-fructofuranosidase,β-FFase)的基因,也是首个被克隆和鉴定的动物型β-FFase编码基因。β-FFase是作用于果糖基的蔗糖水解酶,BmSUC1可能与家蚕防御桑叶生物碱的生理过程有关,但目前其发挥作用的分子机制尚不清晰。为了解析BmSuc1在蚕体的作用途径及其生理功能,本研究基于CRISPR/Cas9基因编辑系统构建表达双元sgRNA的CRISPR载体,用于敲除家蚕基因组中的BmSuc1基因。【方法】根据目的基因BmSuc1的ORF序列设计2条sgRNA,通过同源重组的方法分别插入CRISPR载体的Sal I和Nhe I酶切位点。进而利用转基因显微注射技术将该编辑载体注入G_0代蚕卵,经催青孵化饲养家蚕并自交制备G_1代蚕种。【结果】PCR验证及测序结果均表明CRISPR编辑载体构建成功。根据Ds Red2红色蛋白的荧光标记,从G_1代家蚕幼虫中成功筛选出阳性转基因个体。【结论】本文详细介绍了表达双元sgRNA的CRISPR载体的构建方法,所获得的阳性转基因家蚕对于下一步探讨BmSuc1在家蚕糖类营养的吸收与利用途径中的作用奠定了重要的实验基础,有助于阐明蚕-桑相互选择和适应的分子机制。