提取与分离方法影响海兔口腔神经节蛋白质组的分离效果

选用丙酮沉淀法和直接裂解法分别提取离蓝斑背肛海兔（Notarcus leachii cinvsus Stimpson，NLCS）口腔神经节（Buccal Ganglion，BG）全蛋白质，发现采用直接裂解法所获得BG蛋白质种类多于丙酮沉淀法．在第一向等电聚焦电泳（IEF）中，分别选用pH为3．0—9．0，4．0～6．0和5．0～8．0的载体两性电解质，发现载体两性电解质pH范围为5．0—8．0时分离效果最好．使用Melanie 4 Trial软件统计BG蛋白质斑点数目约为290点，适于开展BG蛋白质组学研究．

用MALDI-TOF质谱和电子光谱研究纳米胰岛素核-铁蛋白的构建技术和特性

小批量制备了电泳纯鲨鱼肝铁蛋白(Liver ferritin of Sphyma zygaena,SZLF).用透射电子显微镜技术研究SZLF的铁核和蛋白壳亚基解离和重组过程.用盐酸解离(pH=1.5)和分离膜透析技术制备铁蛋白亚基,并用酸碱中和方法重组亚基成为脱铁核铁蛋白(apoSZLF),同时将胰岛素(Insulin,INS)包裹于apoSZLF蛋白壳内,构建纳米INS核-SZLF.用电子光谱、MALDI-TOF质谱和SDS-PAGE技术分别揭示了纳米INS核-SZLF分子结构的真实性,提出铁蛋白亚基包裹INS构建为纳米INS核-铁蛋白的途径.

三种樟科植物的细胞总DNA提取

为了从富含次生代谢物的樟科植物肉桂、锡兰肉桂、阴香中获得高质量DNA ,研究和改进了CTAB法、高盐低pH法和尿素法。改进方法包括 :1)在裂解液中加入 2 % β -巯基乙醇和 5 %PVP ,以防止氧化褐变的发生 ;2 )在酚 :氯仿抽提前加入 1 5mol L醋酸铵冰浴处理 ,能降低DNA的黏性。所得DNA的质量和产量经电泳、紫外吸收A2 60 A2 80 、PCR扩增和限制性内切酶酶切检测 ,结果表明改进法提取的DNA质量要比常规法的好。其中改进的CTAB法获得的DNA纯度最高 ,能用于PCR扩增和限制性内切酶酶切 ,是提取这 3种樟科植物总DNA的最佳方法。

MALDI-TOF MS和电子光谱技术研究海兔肝铁蛋白亚基电离和释放铁动力学特性

选用肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint,PMF)技术鉴定质谱纯海兔肝铁蛋白(liver ferritin ofAplysia,ALF)。来源于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)仪中的激光和基质芥子酸协同解吸海兔肝铁蛋白(ALF)为带双电荷、单电荷[M+H]+和二聚体的亚基离子,并可供质谱分析。ALF亚基的质荷比m/z分别为9784.03[M+2H]2+、19678.42[M+H]+和39387.80[2M+H]+,其中亚基分子量[M+H]+略小于鲨鱼肝铁蛋白(liver ferritin of shark,SLF)。在弱碱介质(pH8.0)条件下,电子光谱技术研究指出,抗坏血酸以1/2级反应方式参与ALF释放铁全过程,同时又使ALF以一级反应动力学方式释放铁,呈现两种不同的速率。推测这一异常现象可能与ALF含低铁量、亚基调节能力和海兔的进化地位有关。

鱼肝铁蛋白铁核表层接受电子能力的研究

采用直接电化学技术研究鱼肝铁蛋白 (LiverFerritinofDasyatisakajei,DALF)铁核表层接受还原电子的快慢速率和释放铁的动力学级数及规律。实验结果表明,在有氧环境下,DALF铁核表层以两相行为的方式快速地从铂金电极上获得还原电子且用于释放铁反应,其释放铁的还原电位分别为 -125mV和 -375mV(vs.NHE,下同 )。在控制还原电位为 -200mV和 -500mV的条件下,DALF铁核表层释放铁的速率分别为11.1Fe3 +/(DALF·min)和33.3Fe3 +/(DALF·min),因而认为DALF从铂金电极接受电子和释放铁的速率快慢与还原电位高低有关。血红素不仅能络合于DALF蛋白壳 (DALFh)上,而且还能加速DALFh 释放铁的速率,但无法增加DALFh 释放铁的总量。DALF铁核结构中的磷铁组成存在着非均匀性。

利用酵母双杂交研究铜绿微囊藻生物钟蛋白KaiB的自身相互作用

从铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)PCC7820中克隆了生物钟基因kaiB,并将其克隆入酵母双杂交系统的两个质粒pGADT7和pGBKT7中。经测序验证后,将重组质粒pGADT7-kaiB和pGBKT7-kaiB转化酵母菌AH109进行自激活性和自身相互作用的检测和验证。结果表明,铜绿微囊藻生物钟蛋白KaiB无自激活性,KaiB蛋白自身能发生相互作用。因此,可用KaiB蛋白为诱饵利用酵母双杂交系统筛选文库钓取与KaiB发生相互作用的蛋白。

3，4-二羟基氰苯对蘑菇酪氨酸酶的抑酶和抑菌作用

研究3,4-二羟基氰苯对酪氨酸酶的抑制作用和对几种微生物的效应.结果表明:3,4-二羟基氰苯对蘑菇酪氨酸酶活力有明显的抑制作用,其效应除了对稳态酶活力有较强的的抑制作用外,对酶促反应的迟滞时间也有延长作用.10.0μmol/L的3,4-二羟基氰苯可使稳态酶活力下降53.5%,并使迟滞时间从18 s延长到225 s.3,4-二羟基氰苯对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌3种细菌和真菌白色假丝酵母均有明显的抑制作用,其对细菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)均分别为500和1000μg/mL,对白色假丝酵母的MIC和MFC分别为1000和2000μg/mL.本研究为3,4-二羟基氰苯在酪氨酸酶抑制剂中的应用提供实验理论依据.