雄性生殖中热休克蛋白作用的研究进展

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是指所有生物细胞在应激原刺激后,发生热休克反应时产生的一类细胞伴侣蛋白的总称。该类蛋白在细胞生命过程中可参与蛋白的折叠、装配及运输等活动,对调控细胞的生长、存活及分化起着重要作用。在哺乳动物的雄性生殖领域,HSP家族参与精子发生、精卵结合、精子获能及受精等一系列活动,与雄性生殖过程密切相关。因此,研究HSP家族在雄性生殖中的生物学作用对进一步阐明男性不育的发病机制及后续男性生殖调节的研究都具有十分重要的意义。

大鼠ERp57基因的原核表达及在精卵中的鉴定和定位

目的克隆大鼠ERp57基因、原核表达蛋白并进行纯化,最终在大鼠精子和卵细胞中进行鉴定及定位。方法运用RT-PCR从SD大鼠睾丸组织的总RNA中克隆大鼠ERp57 cDNA,构建ERp57原核表达质粒[pET-28a(+)/ERp57]并转化E.coli的BL21菌株,IPTG诱导蛋白表达,经Ni-NTA树脂亲和层析得到纯化的ERp57蛋白。随后,通过SDS-PAGE、Western blot和酶联免疫吸附等实验对重组蛋白进行鉴定,并利用获得的蛋白免疫家兔制备多抗。最后,利用Western blot和间接免疫荧光定位的方法研究ERp57在精子和卵细胞中的定性和定位。结果成功获得纯化后重组的大鼠ERp57蛋白,并证实大鼠成熟精子和卵细胞都存在ERp57蛋白。ERp57主要定位于附睾尾部精子头的内侧,顶体反应后定位于精子头的赤道区;卵母细胞则定位在细胞表面。结论通过对大鼠ERp57基因的原核表达和抗体的制备可为后续进一步研究该蛋白在受精过程中作用奠定实验基础,而ERp57在精卵细胞中鉴定和定位的结果表明它可能与精卵融合过程相关。

ERp29蛋白在BALB/c小鼠附睾头部和尾部精子中的鉴定和定位

目的对在BALB/c小鼠附睾精子中内质网蛋白29(endoplasmic reticulum protein 29,ERp29)进行鉴定以及定位。方法应用免疫印迹方法鉴定BALB/c小鼠附睾头、尾部精子ERp29蛋白,同时利用激光共聚焦显微镜和间接免疫荧光定位的方法研究ERp29在附睾头、尾部精子上的定位。结果证实ERp29蛋白存在于BALB/c小鼠附睾头部和尾部精子中,且其在尾部精子中含量较头部明显增高。ERp29蛋白主要定位于BALB/c小鼠附睾头部精子的头部前端,而在附睾尾部精子则主要定位于头部和尾部主段。结论通过对ERp29蛋白在BALB/c小鼠附睾头部和尾部精子上的鉴定和定位,可以帮助进一步研究该蛋白对小鼠精子的作用。