薯蓣丸联合紫杉醇抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231上皮间质转化作用和机制研究

目的:探究薯蓣丸联合紫杉醇抑制人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化(EMT)的作用和机制。方法:运用血清药理学方法制备SD大鼠空白血清和薯蓣丸含药血清,体外培养MDA-MB-231细胞。实验将其分组为空白组、紫杉醇组、薯蓣丸联合紫杉醇组三组。运用CCK8实验检测MDA-MB-231细胞的增殖情况;Transwell小室实验法检测细胞的侵袭、迁移能力变化;Western blot检测上皮间质转化相关分子标志物E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、MMP2和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达;RT-qPCR检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、MMP2 mRNA的表达。结果:与空白组相比,紫杉醇组和薯蓣丸联合紫杉醇组可显著抑制细胞的增殖、侵袭和迁移(P<0.01);与紫杉醇组相比,薯蓣丸联合紫杉醇组对细胞增殖、侵袭和迁移的抑制能力增强(P<0.01)。与空白组相比,紫杉醇组和薯蓣丸联合紫杉醇组细胞中E-cadherin蛋白表达上调,PI3K、Akt、mTOR、N-cadherin、Vimentin蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01);与紫杉醇组相比,薯蓣丸联合紫杉醇组细胞中E-cadherin蛋白表达上调,Vimentin、MMP2、PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,紫杉醇组和薯蓣丸联合紫杉醇组均能上调E-cadherin,下调Vimentin、MMP2 mRNA的表达(P<0.01);与紫杉醇组比较,薯蓣丸联合紫杉醇组上调E-cadherin,下调N-cadherin、MMP2 mRNA表达能力增强(P<0.05,P<0.01)。结论:薯蓣丸联合紫杉醇可有效抑制三阴性乳腺癌细胞的侵袭、迁移和EMT进程,且效果优于紫杉醇单用,其机制可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路受抑制相关。

薯蓣丸联合紫杉醇抑制三阴性乳腺癌侵袭转移的作用机制

目的探究薯蓣丸联合紫杉醇在三阴性乳腺癌模型细胞及小鼠中抗三阴性乳腺癌侵袭转移的作用机制。方法分别制备大鼠空白血清和薯蓣丸含药血清,体外培养MDA-MB-231细胞,设置空白组,紫杉醇组,薯蓣丸低、中、高剂量联合紫杉醇组(10%、20%、30%含药血清),Transwell小室实验检测细胞侵袭及迁移能力。将4T1细胞荷瘤BALB/c小鼠随机分为模型组、薯蓣丸组(0.024 g/kg)、紫杉醇组(10 mg/kg)、薯蓣丸联合紫杉醇组,每组12只,治疗期间记录小鼠一般状况及肿瘤大小,4周后处死小鼠,获取肿瘤组织。Western blot法检测PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达,RT-qPCR、Western-blot、免疫组织化学染色法检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP2 mRNA及蛋白表达。结果与空白组比较,紫杉醇组与薯蓣丸各剂量联合紫杉醇组MDA-MB-231细胞的侵袭迁移能力降低,其中薯蓣丸各剂量联合紫杉醇组降低更明显(P<0.05)。荷瘤小鼠治疗4周后,与模型组比较,紫杉醇组、薯蓣丸联合紫杉醇组小鼠肿瘤体积减小(P<0.05,P<0.01),PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达降低(P<0.01);薯蓣丸组、紫杉醇组、薯蓣丸联合紫杉醇组荷瘤小鼠E-cadherin表达升高,Vimentin、N-cadherin、MMP2表达降低(P<0.05,P<0.01),其中薯蓣丸联合紫杉醇组效果最佳(P<0.05)。结论薯蓣丸联合紫杉醇能抑制在三阴性乳腺癌模型细胞及小鼠中三阴性乳腺癌的生长及侵袭转移,其机制可能与下调PI3K/Akt/mTOR信号通路,抑制上皮-间质转化有关。

鳖甲-莪术药对含药血清对MCF-7人乳腺癌细胞的影响

目的基于Wnt/β-catenin信号通路探讨鳖甲-莪术药对含药血清对乳腺癌细胞增殖的抑制作用。方法细胞悬液加入不同剂量的鳖甲含药血清、莪术含药血清、鳖甲-莪术药对含药血清孵育48、72 h后,用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测β-Catenin、c-Myc、cyclin D1蛋白表达。结果与空白血清组比较,各含药血清组处理48、72 h均可抑制细胞增殖(P<0.05,P<0.01);处理48 h后,其G0/G1期细胞比例增加(P<0.05,P<0.01)、S期细胞比例降低(P<0.05,P<0.01),β-Catenin、c-Myc、cyclin D1蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01)。结论各组含药血清对MCF-7细胞的增殖均有抑制作用。此外,鳖甲-莪术药对抑制作用高于单独用药,其抗乳腺癌的机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin的表达,下调β-catenin以及β-catenin下游靶基因cyclin D1,c-Myc蛋白表达有关。

鳖甲-莪术药对对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞侵袭转移能力及其上皮间质转化的作用及机制

目的探究鳖甲-莪术药对对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞侵袭转移能力的影响及细胞上皮间质转化(EMT)的作用及机制。方法将含药血清体外培养的MDA-MB-231细胞设空白组、单诱导组、鳖甲组、莪术组、鳖甲-莪术组以及紫杉醇组,采用CCK-8法、划痕实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot法和RT-qPCR法分别检测E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)蛋白及mRNA表达。结果与单诱导组相比,各实验组细胞增殖抑制率增加、细胞迁移率降低、细胞迁徙数目减少(P<0.05),提示各实验组细胞增殖、迁移以及侵袭能力均降低;组间比较,鳖甲-莪术组对MDA-MB-231细胞的增殖抑制率高于鳖甲组和莪术组(P<0.05);与单诱导组相比,各实验组的E-cadherin蛋白及mRNA表达均上升,Vimentin、N-cadherin、Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA表达均下降(P<0.05);组间比较,鳖甲-莪术组E-cadherin蛋白及mRNA表达最高,Vimentin、N-cadherin、Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA表达低于鳖甲组、莪术组(P<0.05)。结论鳖甲-莪术药对能抑制TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞侵袭转移能力及其EMT进程,其机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路中某些蛋白及基因水平有关。