他替瑞林通过抑制NF-κB磷酸化来减轻神经炎症的机制研究

目的探讨他替瑞林(Taltirelin,TAL)对帕金森病大鼠纹状体核因子-κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)表达与相关神经炎症的调控作用及其机制。方法通过立体定向手术构建偏侧帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠模型;采用阿扑吗啡诱导旋转试验、跨步试验、酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)免疫组化染色等方法评估模型;将成功模型大鼠随机分为TAL组和对照组,分别每日1次给予腹腔注射3 mg/kg的TAL或等剂量生理盐水,连续1周,从对照组未损毁侧[对照-完整(Control-intact,CTR-Int)组]、对照组损毁侧[对照-损毁(Control-lesion,CTR-Les)组]以及TAL组损毁侧(TAL-Les组)的纹状体中提取RNA进行转录组分析,提取蛋白质并通过免疫印迹等技术检测NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65以及神经炎症因子白介素-1β(Interleukin-1 beta,IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)的表达水平。结果相比于CTR-Int组,CTR-Les组的NF-κB信号通路中有19个基因表达上调,并且磷酸化NF-κB p65,IL-1β,MCP-1表达显著增多;相较于CTR-Les组,TAL-Les组的NF-κB信号通路中有21个基因表达下调,且磷酸化NF-κB p65,IL-1β,MCP-1表达显著减少。结论他替瑞林抑制了偏侧PD模型大鼠脑区NF-κB p65磷酸化与神经炎症的持续激活,这可能是TAL改善PD模型大鼠运动功能但未引起明显异动症等运动并发症的重要原因之一。

纤维蛋白原诱导SH-SY5Y细胞凋亡和损伤的机制研究

目的探讨纤维蛋白原(Fibrinogen,Fg)对人神经母细胞瘤细胞(Human neuroblastoma cells,SH-SY5Y)的影响及其机制。方法采用不同水平的纤维蛋白原(0、2、4、8 mg/mL)处理SH-SY5Y细胞,并使用了多种实验方法来评估其对细胞的影响:CCK8试剂盒(Cell counting kit-8 viability assay)检测细胞活力;Hoechst33342/碘化丙啶(Propidine iodide,PI)染色试剂盒观察细胞凋亡情况;细胞色素c氧化酶IV(Cytochrome C oxidase IV,COX IV)细胞免疫荧光染色检测线粒体功能损伤;蛋白免疫印迹法检测线粒体凋亡通路相关指标[B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl2关联X蛋白(Bcl2 associated X protein,Bax)、细胞色素C(Cytochrome C,Cyt-C)、活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3(Activated caspase-3)]的表达水平。结果SH-SY5Y细胞暴露于纤维蛋白原会显著降低细胞活力,触发神经元凋亡,诱导线粒体功能障碍。此外,Western blot分析发现纤维蛋白原处理也改变了SH-SY5Y细胞中线粒体通路凋亡相关指标(Bcl-2,Bax,Cytochrome C,Activated caspase-3)的表达水平。结论纤维蛋白原引起了SH-SY5Y细胞的损伤和凋亡,其作用机制可能涉及线粒体功能障碍。

聚苯乙烯纳米塑料对大鼠主动脉平滑肌细胞泡沫化的影响

目的探讨聚苯乙烯纳米塑料(Polystyrene nanoplastics,NPs)对大鼠主动脉平滑肌细胞(Rat aortic smooth muscle cells,RASMCs)泡沫化的影响。方法体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞,用不同水平的直径为80纳米的绿色荧光NPs(80 nm NPs)处理RASMCs 24小时;采用细胞计数试剂盒(Cell counting kit-8,CCK8)检测细胞活力,并检测细胞释放的乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)活性以评估细胞损伤程度;利用DiI荧光标记的氧化型低密度脂蛋白(Dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylin docarbocyanine-oxidized low density lipoprotein,DiI-oxLDL)诱导平滑肌细胞泡沫细胞形成,并行油红O染色显示脂滴;采用蛋白免疫印迹法检测自噬相关指标(Microtubule-associated protein 1 light chain 3B,MAP1LC3B)的表达水平。结果80 nm NPs可被RASMCs吞噬并产生细胞毒性,呈水平依赖性促进RASMCs摄取oxLDL,自噬相关指标(LC3B)表达水平降低。结论聚苯乙烯纳米塑料可被血管平滑肌细胞吞噬并促进泡沫细胞形成,其潜在机制可能是通过抑制RASMCs自噬来实现的。