重组ZEN降解酶Oxa的纯化及特性研究

以表达可高效降解玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN,ZEA)的氧化酶Oxa的毕赤酵母工程菌GS115/p PIC9K-Oxa为研究对象,将发酵液经乙醇沉淀、阴离子交换色谱和超滤纯化后,检测重组Oxa酶降解ZEN的活力,分析其二级结构,并对相关酶学特性进行研究。结果表明,氧化酶Oxa的纯化倍数达到20倍以上,纯化后的Oxa针对ZEN的降解率达到80%以上,其二级结构主要由无规卷曲和β-折叠组成,辅以少量的β-转角和α-螺旋,该酶的最适作用温度和pH分别为60℃和9.0,并且在50~70℃和pH9.0~11.0时保持60%以上的ZEN降解率,具有典型的耐高温碱性酶的特征,反应体系中适量的Cu^2+、Fe^2+和Fe^3+的加入能提高其降解活力。本论文为进一步研究氧化酶Oxa的分子结构及作用方式奠定了基础,对ZEN的生物降解具有显著的实际意义。