Pseudom onas sp.101甲酸脱氢酶基因的合成、表达及定点饱和突变

甲酸脱氢酶(FDH)是氧化还原酶辅酶NAD+和NADH再生循环体系中的关键酶,具有重要的应用价值和产业化应用前景。通过采用重叠延伸PCR技术,人工合成编码FDH的基因fdh,构建原核表达载体pET30a-fdh,以E.coliBL21(DE3)为表达宿主,获得了能可溶性表达的甲酸脱氢酶的重组菌;经16℃IPTG诱导表达,重组酶的比活力为8.7 U/mgPro;为了提高FDH的稳定性,采用融合PCR方法对fdh基因进行了定点饱和突变,经筛选,获得了酶活未变但稳定性有所提高的突变酶Cys146AlaCys354Ala,其稳定性比野生酶提高了2.5倍。

微生物法从头合成2-苯乙醇的研究进展

2-苯乙醇具有令人愉悦的玫瑰花香气和良好的理化性质,是一种被广泛应用于食品、医药与日用化工行业的芳香醇。由于市场前景良好,高品质2-苯乙醇产品的需求量逐年上升,绿色高效的微生物发酵制备策略成为近年来的研究热点。该文对微生物中2-苯乙醇的从头合成途径进行了综述,分析了相关的调控机理,并对多种代谢策略进行了评价和展望。

酿酒酵母PDC5基因的缺失对2-苯乙醇合成的影响及相关代谢改造

该文研究了酿酒酵母中编码丙酮酸脱羧酶的基因PDC5的缺失对2-苯乙醇合成的影响,并将其应用于2-苯乙醇高产菌株的代谢改造策略。首先利用CRISPR/Cas9双质粒敲除体系构建pdc5△突变株,通过优化过的培养条件进行摇瓶发酵,发现基因PDC5的缺失能够促进酵母合成2-苯乙醇。分别表达芳香族转氨酶Aro8p和Aro9p,发现在缺失Aro9p的突变株中过表达Aro8p能够促进2-苯乙醇的合成。由此构建了重组菌株RM59-810(pdc5△aro9△P_(TPI)-ARO8-T_(TT) P_(TPI)-ARO10-T_(TT)),在6.7 g/L L-苯丙氨酸培养基中培养120 h后2-苯乙醇的产量为3.85 g/L,摩尔转化率为0.67 mol/mol,是对照菌株的1.33倍,得率为0.5 g/g L-苯丙氨酸。该文为加强酿酒酵母合成2-苯乙醇的能力提供了一种新的代谢工程改造策略,为研究丙酮酸脱羧酶Pdc5p可能存在的调控作用提供了依据。