不同温度对三年生三七各部位皂苷含量的影响

【目的】研究低温对三七皂苷含量的影响,为三七的引种种植提供理论依据。【方法】本研究分析了在10、15、20℃下处理30 d的3年生三七,以及在种植基地生长正常、长势一致的3年生三七(对照组)的主根、剪口、茎和叶的4种单体皂苷及其总皂苷含量。【结果】4种不同温度下,三七主根中的总皂苷含量差异显著,以20℃处理的含量最高,对照组含量为最低。三七叶中皂苷含量具有显著差异,以15℃处理的含量最高,20℃处理最低。剪口中总皂苷含量差异不显著,以15℃处理的含量最高。三七茎中总皂苷含量差异不显著,以对照组的含量最高。但是,不同处理的三七根部总皂苷含量均高于2015年版《中华人民共和国药典》标准。【结论】一定的低温(15~20℃)有利于三七根部的皂苷积累。

参与植物三萜生物合成的细胞色素P450酶研究进展

三萜是许多药用植物的活性成分,目前已对其生物合成途径进行了大量研究并取得了重大进展。细胞色素P450(CYP450)主要参与三萜的后修饰过程,对三萜的多样性起着关键作用。目前,已从多种植物中克隆得到与三萜生物合成相关的CYP450基因。对参与三萜生物合成的CYP450的功能研究进行综述,为三萜生物合成途径的解析及CYP450的功能研究提供借鉴。

越南参变种实时荧光定量PCR内参基因的筛选和验证

实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术被广泛用于基因表达分析,筛选适宜的内参基因是运用这项技术的前提。本研究采用q RT-PCR筛选适用于越南参变种(Panax vietnamensis var.fuscidiscus)不同组织器官(根、根茎、茎和叶)的内参基因。基于越南参变种转录组数据,筛选出13个候选基因(ACT1、ACT2、bTUB1、bTUB2、aTUB、GADPH、UBQ、elF、EF-1a、F-box、CYP、QCR、TCTP)。利用qRT-PCR技术检测候选内参基因在越南参变种四个组织部位中的表达情况,并用geNorm、NormFinder和BestKeeper综合分析候选基因的表达稳定性,发现ACT1和aTUB在越南参变种不同组织部位中表达稳定性最好。用内参基因ACT1和aTUB分析PvfDS在越南参变种不同组织部位的表达,发现二者表达规律一致。结果表明,越南参变种不同组织部位适宜的内参基因为ACT1和aTUB。

野三七鲨烯环氧酶基因的克隆及原核表达

目的:对野三七中可能参与三萜皂苷合成的关键酶鲨烯环氧酶基因(Pvf SE)进行克隆,并对其进行生物信息学分析和原核表达。方法:采用Trizol法提取野三七根的总RNA并反转录为c DNA第一链,基于野三七的转录组数据,设计Pvf SE基因序列特异性引物,克隆基因全长,利用相关软件对该基因进行生物信息学分析,构建p Mal-c2X-Pvf SE原核表达载体,在大肠埃希菌中诱导表达重组蛋白。结果:Pvf SE开放阅读框为1 887 bp,编码628个氨基酸,蛋白相对分子质量为68. 8 k Da,理论等电点为9. 28,脂肪系数为95. 18,亲水性系数为-0. 060,不稳定指数为40. 36,属于不稳定蛋白。生物信息学分析表明,Pvf SE具有2个跨膜结构域,无信号肽,可能定位在叶绿体或细胞质膜上,具有FAD/NAD(P)结合域和鲨烯环氧酶结构域,属于混合型蛋白。Pvf SE与西葫芦和芒柄花中参与三萜皂苷合成的鲨烯环化酶(Cp SE1,Cp SE3,Os SE1,Os SE2)亲缘关系较近。此外,在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功表达Pvf SE的重组蛋白。结论:克隆得到Pvf SE基因,并在大肠埃希菌中成功表达其重组蛋白,为进一步研究Pvf SE的功能和解析野三七中三萜皂苷生物合成途径奠定了基础。

黄草乌实时荧光定量PCR内参基因的筛选

筛选合适的内参基因是应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析基因表达的前提。为黄草乌Aconitum vilmori-nianum中基因表达分析研究提供可靠的内参基因,基于黄草乌转录组数据,筛选出19个候选内参基因(ACT1、ACT2、ACT3、aTUB1、aTUB2、bTUB、18S rRNA、UBQ、eIF2、eIF3、eIF4、eIF5、CYP、GAPDH1、GAPDH2、PP2A1、PP2A2、ACP、EF1α),用qRT-PCR技术检测各候选内参基因在黄草乌根、茎、叶和花4个器官中的表达情况,Ct值分析结果表明,18S rRNA在各器官中表达丰度过高,GAPDH2的波动范围较大,二者均不宜作为黄草乌的内参基因。对其他候选基因的表达稳定性进行分析,geNorm和NormFinder分析结果基本一致,稳定性排名前三的内参基因均为PP2A1、EF1α和CYP,BestKeeper分析结果表明,稳定性排名前三的内参基因为EF1α、ACT3和PP2A1。不同软件分析得出的候选内参基因表达稳定性排名存在差异,因此,采用几何平均值法综合分析黄草乌各候选内参基因的表达稳定性,结果表明,PP2A1、EF1α和ACT3的稳定性最佳。基于geNorm、NormFin-der、BestKeeper和几何平均值法综合分析结果,PP2A1和EF1α在黄草乌不同器官中的表达最稳定,是黄草乌不同器官基因表达分析的最佳内参基因。