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对转基因香料烟PK-873几个重要质量性状的研究 被引量:1
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作者 朱玉贤 潘乃穟 +2 位作者 陈章良 孙宝俊 王永华 《应用基础与工程科学学报》 EI CSCD 1994年第1期46-51,共6页
通过对转基因香料烟PK-873自1989年进入大田试验以来,各种重要农业性状的系统化研究,发现该品种抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,简称TMV)性能突出,遗传稳定性好,且栽培管理和晾制过程简单易行,宜在我国东北、华北和黄淮平原种植... 通过对转基因香料烟PK-873自1989年进入大田试验以来,各种重要农业性状的系统化研究,发现该品种抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,简称TMV)性能突出,遗传稳定性好,且栽培管理和晾制过程简单易行,宜在我国东北、华北和黄淮平原种植。在辽宁丹东自然条件下该品种田间发病率一般低于千分之一。人工接种TMV(0.5μg/mL)40d后,发病率一般不足20%。烟草总公司组织的评吸试验证明PK-873的质地优于国内主要香料烟品种(沙姆逊和泰国一号)。 展开更多
关键词 基因工程 香料烟 抗病毒 质量
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植物基因工程的现状与展望 被引量:5
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作者 朱玉贤 《北京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期261-270,共10页
介绍了80年代以来植物基因工程的历史、现状和发展趋势,对利用转基因植物生产药用蛋白,用工程病毒为载体生产药用蛋白,改进植物品质及逆境适应性,提高光合作用和固氮效率,抗除草剂工程植物及工程微生物与生物医学的关系等作了可行性分... 介绍了80年代以来植物基因工程的历史、现状和发展趋势,对利用转基因植物生产药用蛋白,用工程病毒为载体生产药用蛋白,改进植物品质及逆境适应性,提高光合作用和固氮效率,抗除草剂工程植物及工程微生物与生物医学的关系等作了可行性分析和前景预测。 展开更多
关键词 基因工程 载休 品质改良 植物 组织培养
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植物基因的克隆与转化研究进展 被引量:3
3
作者 朱玉贤 《河北科技大学学报》 CAS 1999年第2期5-9,28,共6页
综述了近20a来植物基因工程、特别是DNA重组技术和基因遗传转化技术的发展历程,比较了各种分子克隆和转化方法的优劣。
关键词 基因 克隆 转化 筛选 植物
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大豆提取液对超结瘤现象的抑制 被引量:1
4
作者 朱玉贤 潘乃穟 陈章良 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1993年第9期716-721,共6页
将超结瘤大豆(Glycine max)突变体nts 382用一定数量的固氮菌接种后,这些植株上产生大大多于同样条件下生长的野生型亲本Bragg植株上所形成的根瘤。把nts 382幼苗地上部的抽提液加入培养基中,不能使Bragg的幼苗表现为超结瘤型,但若把Br... 将超结瘤大豆(Glycine max)突变体nts 382用一定数量的固氮菌接种后,这些植株上产生大大多于同样条件下生长的野生型亲本Bragg植株上所形成的根瘤。把nts 382幼苗地上部的抽提液加入培养基中,不能使Bragg的幼苗表现为超结瘤型,但若把Bragg幼苗抽提液加入nts 382培养基中,则超结瘤现象受到明显的限制。采用nts 382植株地上部做接穗嫁接到Bragg砧木上,这个嫁接体仍表现为超结瘤型,对换接穗和沾木位置后的嫁接体则表现为野生亲本型。Bragg抽提液对nts 382植株超结瘤的抑制性还随所用豆苗生长期延长而明显减弱,接种后60天的植株抽提液基本无效。未接种的Bragg豆苗抽提液不能抑制nts 382的超结瘤。与此相反的是在嫁接实验中不存在这个时间效应,无论用Bragg幼苗或较为成熟的植株做接穗,都能有效地抑制nts 382砧木上的超结瘤现象。 展开更多
关键词 共生固氮 超结瘤 大豆 生物固氮
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中国科学家解读水稻白叶枯病抗病机理 被引量:2
5
作者 朱玉贤 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第5期601-602,共2页
水稻白叶枯病是世界上最严重的细菌性病害之一。从20世纪初叶开始,科学家就对该病的发病机理产生了浓厚的兴趣,因此,水稻白叶枯病抗性机理研究一直处于植物抗病研究的最前沿。今年初,华中农业大学王石平教授领导的研究组发现了水稻抗白... 水稻白叶枯病是世界上最严重的细菌性病害之一。从20世纪初叶开始,科学家就对该病的发病机理产生了浓厚的兴趣,因此,水稻白叶枯病抗性机理研究一直处于植物抗病研究的最前沿。今年初,华中农业大学王石平教授领导的研究组发现了水稻抗白叶枯病基因xa13在其自身花粉育性和抗病性方面的杠杆作用,为人类认识植物抗病机理提供了新视角。中国农业科学院黎志康教授领导的研究组则分析了水稻对白叶枯病的抗性机制,阐述了抗白叶枯病的复杂的遗传网络系统,为水稻白叶枯病抗性的分子育种工作奠定了重要的理论基础。两篇论文已于2006年5月分别发表在国际著名的学术期刊《Genes&Development》和《Proc.Natl.Acad.Sci.USA》上。《Genes&Development》还在同期发表了专题评述,表明上述研究有可能成为世界植物抗病研究的一个新的里程碑。 展开更多
关键词 水稻 白叶枯病 抗病性 花粉育性
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核DNA相减与分子克隆 被引量:1
6
作者 朱玉贤 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1992年第8期38-42,共5页
核DNA的减法(Genomic Subtraction)或核DNA相减后聚合酶链式反应(Subtracting PCR)系国际分子生物学领域90年代初露头角的最新技术,深受科学界重视。应用这一技术可以在没有任何探针材料的情况下,由研究缺失突变体的表现型入手,从亲本... 核DNA的减法(Genomic Subtraction)或核DNA相减后聚合酶链式反应(Subtracting PCR)系国际分子生物学领域90年代初露头角的最新技术,深受科学界重视。应用这一技术可以在没有任何探针材料的情况下,由研究缺失突变体的表现型入手,从亲本材料中克隆与突变体缺失片段相对应的遗传性状,包括许多对高等动植物生长发育影响重大的基因或基因群。 展开更多
关键词 核DNA 减法 分子克隆
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《PCR传奇》:生物技术领域的科普佳作
7
作者 朱玉贤 《中国图书评论》 CSSCI 北大核心 2000年第7期23-24,共2页
关键词 《PCR传奇》 书评 科普读物 聚合酶链反应
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现代战争与分子生物学
8
作者 朱玉贤 《国防》 1992年第11期36-37,共2页
乍一看这题目,读者可能会认为这是两件风马牛不相及的事,毫无共同之处。其实不然。分子生物学和新兴的生物工程技术,虽然只有短短数十年的历史,却已经在包括军事科学在内的许多应用科学领域中崭露头角,日渐引人注目。在海湾战争中,以美... 乍一看这题目,读者可能会认为这是两件风马牛不相及的事,毫无共同之处。其实不然。分子生物学和新兴的生物工程技术,虽然只有短短数十年的历史,却已经在包括军事科学在内的许多应用科学领域中崭露头角,日渐引人注目。在海湾战争中,以美国为首的多国部队为了对付伊拉克可能使用的生物武器,投入了大量的人力物力。据美国国防部透露,在高达数百亿美元的战争开支中,有相当一部分用于购买化学防护装备和进行防护训练。不难想象,如果在两个或多个科学较为发达的国家之间爆发战争。 展开更多
关键词 防护训练 美国国防部 防护装备 多国部队 工程技术 化学防护 进攻性武器 美国海军 细菌降解 生物技术
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差异筛选与基因克隆
9
作者 朱玉贤 《科学中国人》 2003年第7期44-45,共2页
1995年,科学家首次发表研究报告,证实受发育过程特异性诱导表达的启动子指导细菌异戊烯转移酶基因,导致转基因植物发育后期细胞分裂素含量显著提高,从而延缓植物叶片的衰老过程.1999年,又有人发表论文证实用上述启动子指导同源域转录调... 1995年,科学家首次发表研究报告,证实受发育过程特异性诱导表达的启动子指导细菌异戊烯转移酶基因,导致转基因植物发育后期细胞分裂素含量显著提高,从而延缓植物叶片的衰老过程.1999年,又有人发表论文证实用上述启动子指导同源域转录调控因子基因Knotted1表达,也能明显延缓烟草叶片的衰老.与此同时,有学者撰文称在番茄中过量表达拟南芥己糖酸化酶基因,导致转基因植物衰老进程加快.此后,不少作者相续报道了不同基因或不同成份对植物生长发育的调控作用. 展开更多
关键词 基因克隆 转基因植物 cDNA差示分析法 PPF1基因 细菌异戊烯转移酶基因 细胞分裂素 差异筛选 G2豌豆 生长发育
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农杆菌真空渗透法转化花粉获得棉花转acsB基因植株 被引量:15
10
作者 李晓 王学德 +2 位作者 朱玉贤 卢迎春 赵向前 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期709-712,共4页
关键词 农杆菌 真空渗透法 花粉 棉花 转acsB基因 植株
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利用Gateway克隆技术大规模克隆拟南芥转录因子 被引量:19
11
作者 梅文倩 宋文强 +2 位作者 潘怡 巩威 朱玉贤 《分子植物育种》 CAS CSCD 2004年第3期358-364,共7页
随着越来越多基因组全序列的测定完成,基因组的研究进入了功能研究阶段。功能基因组的研究需要把大量基因连入不同载体,传统的酶切连接构建载体的方法不能满足这种大规模克隆的需要。Gateway技术是一种高效的大规模克隆系统,而且对载体... 随着越来越多基因组全序列的测定完成,基因组的研究进入了功能研究阶段。功能基因组的研究需要把大量基因连入不同载体,传统的酶切连接构建载体的方法不能满足这种大规模克隆的需要。Gateway技术是一种高效的大规模克隆系统,而且对载体和宿主没有依赖性。本文利用Gateway大规模克隆技术将16个拟南芥转录因子的ORF克隆入植物表达载pPTV和酵母表达载体pYTV中,酵母融合表达实验和West-ern-blot检测证明了该克隆途径的可行性,并且得到的His-Tag融合蛋白,为拟南芥转录因子的大规模蛋白质组学研究奠定了良好的基础,同时基因序列的聚类分析为将来进一步的功能研究提供了有利信息。 展开更多
关键词 Gateway克隆技术 拟南芥 转录因子 聚类分析 功能基因组
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结核分枝杆菌三种分泌蛋白在原核表达载体中的克隆、表达与鉴定 被引量:7
12
作者 蔡宏 潘怡 +1 位作者 汪竟 朱玉贤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期325-330,共6页
对结核分枝杆菌的三种分泌蛋白Ag85B ,ESAT_6和MPT_6 4基因进行克隆、鉴定与表达 ,为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测打下基础。以结核杆菌H37RV 株基因组DNA为模板 ,用PCR法对基因Ag85B、ESAT_6、MPT_6 4进行扩增 ,产物与载体... 对结核分枝杆菌的三种分泌蛋白Ag85B ,ESAT_6和MPT_6 4基因进行克隆、鉴定与表达 ,为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测打下基础。以结核杆菌H37RV 株基因组DNA为模板 ,用PCR法对基因Ag85B、ESAT_6、MPT_6 4进行扩增 ,产物与载体质粒pET2 2b和pGEX_4T_1构建表达Ag85B、ESAT_6、MPT_6 4的重组质粒 ,将此重组质粒先转化到大肠杆菌DH5a内抽提质粒 ,酶切检验 ,再转化入表达宿主大肠杆菌BL2 1(DE3)PLysS菌株内 ,对转化菌株以IPTG进行诱导后 ,破菌 ,离心 ,上清进行SDS_PAGE电泳 ,电泳发现转化了重组质粒的菌株有表达蛋白 ,所表达的蛋白质相对分子质量为 30 0 0 0、6 0 0 0、5 0 0 0 0。结果表明 :目的基因克隆到菌株内 ,重组结核杆菌分泌蛋白Ag85B、ESAT_6、MPT_6 4的成功表达为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测以及上述三种抗原。 展开更多
关键词 基因表达 人畜共患病 结核分枝杆菌 分泌蛋白 原核 表达载体 克隆
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Ag85B核酸疫苗的免疫原性和保护性研究 被引量:7
13
作者 呼西旦 蔡宏 +2 位作者 李淑霞 田霞 朱玉贤 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第5期365-368,共4页
扩增结核分枝杆菌的Ag85B基因并克隆于真核表达载体 pJW4 30 4 ,转染COS - 7细胞后 ,Westernblot检测表明该基因在细胞内得到了正确表达。用该质粒免疫C5 7BL/ 6小鼠 ,免疫三次后 ,用纯化的重组蛋白Ag85B检测小鼠血清中的抗体 ,抗体滴... 扩增结核分枝杆菌的Ag85B基因并克隆于真核表达载体 pJW4 30 4 ,转染COS - 7细胞后 ,Westernblot检测表明该基因在细胞内得到了正确表达。用该质粒免疫C5 7BL/ 6小鼠 ,免疫三次后 ,用纯化的重组蛋白Ag85B检测小鼠血清中的抗体 ,抗体滴度达到 1:10 2 4 0 0 ,(γ -干扰素测定表明 ,免疫动物的干扰素含量达到 116 0 3± 10 4 pg /ml。实验结果说明Ag85B核酸疫苗在实验动物体内引起了较强的免疫应答。三次免疫后经静脉强毒攻击 ,免疫组小鼠肺脏和脾脏的细菌数比对照空载体组分别减少了 1 5和 15倍以上。本研究表明 ,该核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞和体液免疫应答并获得较高的保护效率。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌病 Ag85B分泌蛋白抗原 核酸疫苗 免疫原性 保护效率
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结核分枝杆菌四价DNA疫苗免疫原性和保护效率研究 被引量:6
14
作者 顾田园 蔡宏 +2 位作者 田霞 余大海 朱玉贤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第4期347-352,共6页
对结核杆菌四价DNA疫苗的免疫应答和保护效果进行了评价.用编码结核分枝杆菌Ag85B、MPT64、MPT70和PstS-3等4种抗原蛋白的基因分别构建的单价DNA疫苗混合成四价苗免疫小鼠.3次免疫后21天,四种抗原特异性抗体滴度分别达到1:6 400、1:51 ... 对结核杆菌四价DNA疫苗的免疫应答和保护效果进行了评价.用编码结核分枝杆菌Ag85B、MPT64、MPT70和PstS-3等4种抗原蛋白的基因分别构建的单价DNA疫苗混合成四价苗免疫小鼠.3次免疫后21天,四种抗原特异性抗体滴度分别达到1:6 400、1:51 200、1:6 400、1:6 400.四种蛋白质均能诱导脾脏细胞产生较高水平的抗原特异性IFN-γ,浓度分别为10 582.14 ng/L、13 635.97 ng/L、14 213.15 ng/L和9 657.35 ng/L.三次免疫后经静脉强毒攻击,四价苗组小鼠肺脏和脾脏的载菌数分别减少到阴性组的1/650和1/130.对肺组织的病理形态特征观察表明,空载体免疫的小鼠肺部严重损伤,肺实质干酪样坏死,坏死结节占肺实质的70%~80%,而四价苗免疫的小鼠,肺组织结构正常,肺泡轮廓清晰.研究首次证实,Ag85B、MPT64、MPT70和PstS-3 4种结核杆菌抗原蛋白编码基因组成的四价DNA疫苗,具有很高的免疫应答水平和保护效率. 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 抗原蛋白 四价DNA疫苗 免疫原性 保护效率
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牛结核病鉴别诊断的方法研究 被引量:11
15
作者 余大海 韦一然 +1 位作者 蔡宏 朱玉贤 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期932-935,共4页
目的构建含结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)tb10.4基因片断的原核表达载体,在E.coli中诱导表达带组氨酸标记的该融合蛋白。分别以TB10.4蛋白,PPD蛋白以及TB10.4与MPT83混合蛋白为抗原,用间接ELISA法鉴别牛结核病。方法PCR法扩... 目的构建含结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)tb10.4基因片断的原核表达载体,在E.coli中诱导表达带组氨酸标记的该融合蛋白。分别以TB10.4蛋白,PPD蛋白以及TB10.4与MPT83混合蛋白为抗原,用间接ELISA法鉴别牛结核病。方法PCR法扩增tb10.4基因片段,连接到pET-22b(+)原核表达载体中,将重组子转化到大肠杆菌蛋白酶缺陷型菌株BL21(DE3)/PolysS,用IPTG诱导,进行蛋白表达、纯化。之后将TB10.4,PPD,TB10.4及MPT83混合蛋白作为抗原用间接ELISA法检测牛结核病。结果使用结核杆菌早期分泌蛋白TB10.4作为抗原用间接ELISA方法快速检测牛结核病,并区分BCG免疫的健康牛和感染牛的结果显示灵敏度为23%,没有假阳性反应。结论用PPD作为抗原进行检测灵敏度达到48%,但假阳性率达到21%;用TB10.4与MPT83混合抗原检测时灵敏度下降到6%,假阳性率1%。 展开更多
关键词 牛结核病 TB10.4蛋白 间接ELISA法
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蜘蛛杀虫肽基因的合成及其在植物中表达质粒的构建 被引量:17
16
作者 蒋红 朱玉贤 +2 位作者 王雅平 王泽平 陈章良 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1995年第4期321-325,共5页
According to amino acid sequence of the insecticidal peptide found in venom of Australia spider, the gene was constructed in four sections by annealing partially complementary single stranded oligos using code preferr... According to amino acid sequence of the insecticidal peptide found in venom of Australia spider, the gene was constructed in four sections by annealing partially complementary single stranded oligos using code preferred in plant. After having been sequenced, this gene was constructed into the plasmid expressing in plant. 展开更多
关键词 杀虫基因 合成 植物 表达质粒 基因工程
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番茄ACC合成酶反义cDNA转化及转基因番茄果实贮藏生理特性研究 被引量:6
17
作者 陆春贵 徐鹤林 +4 位作者 余文贵 杨荣昌 曹晓凤 朱玉贤 陈章良 《江苏农业学报》 CSCD 1996年第1期41-47,共7页
ACC 合成酶 cDNA 被反向插入载体 PMON316,通过三亲交配,将表达质粒转移到农杆菌中,采用叶盘法转化番茄子叶。经卡那霉素筛选及分子杂交检测,表明,反义 ACC 合成酶基因已在 mRNA 水平表达。对转基因番茄果实的成熟生理指标测定结果说明... ACC 合成酶 cDNA 被反向插入载体 PMON316,通过三亲交配,将表达质粒转移到农杆菌中,采用叶盘法转化番茄子叶。经卡那霉素筛选及分子杂交检测,表明,反义 ACC 合成酶基因已在 mRNA 水平表达。对转基因番茄果实的成熟生理指标测定结果说明,转基因番茄果实成熟受到严重抑制,乙烯的峰值仅为正常番茄的25%~30%,PG 活性有所下降,果实在室温下可贮藏1个多月,品质和其他性状与正常番茄相近。 展开更多
关键词 乙烯 转基因 番茄 果实 贮藏 生理特性
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MPT63核酸疫苗的制备及其免疫原性 被引量:4
18
作者 潘怡 蔡宏 +2 位作者 李淑霞 李唐 朱玉贤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期205-209,共5页
扩增结核分枝杆菌分泌蛋白MPT63编码序列 ,克隆于真核表达载体pJW 4 30 3中 .转染COS 7细胞 ,用Western印迹检测表明该基因在细胞内得到正确表达 .用该质粒连续免疫C5 7BL 6小鼠 3次后 ,用纯化的重组蛋白MPT63检测小鼠血清中的抗体 ,发... 扩增结核分枝杆菌分泌蛋白MPT63编码序列 ,克隆于真核表达载体pJW 4 30 3中 .转染COS 7细胞 ,用Western印迹检测表明该基因在细胞内得到正确表达 .用该质粒连续免疫C5 7BL 6小鼠 3次后 ,用纯化的重组蛋白MPT63检测小鼠血清中的抗体 ,发现抗体滴度达到 10 5,免疫动物中γ干扰素的含量达到 2 5 8± 0 2U ml ,为空载体DNA免疫对照组的 2 0倍以上 。 展开更多
关键词 MPT63 核酸疫苗 制备 免疫原性 结核病 结核分枝杆菌 分泌蛋白
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北非蝎昆虫毒素AaHIT1基因的原核表达和转基因分析 被引量:9
19
作者 苏力坦·阿巴白克力 姬生健 朱玉贤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期182-185,共4页
将北非蝎昆虫毒素 (AndroctonusaustralisHectorinsecttoxin ,AaHIT1)基因克隆入温度诱导表达载体pBV2 2 0 ,并在宿主菌E .coliDH5α中进行诱导表达 .表达定位分析发现 ,AaHIT1大部分存在于包涵体中 .蛋白质N 端测序证实了体外表达的AaH... 将北非蝎昆虫毒素 (AndroctonusaustralisHectorinsecttoxin ,AaHIT1)基因克隆入温度诱导表达载体pBV2 2 0 ,并在宿主菌E .coliDH5α中进行诱导表达 .表达定位分析发现 ,AaHIT1大部分存在于包涵体中 .蛋白质N 端测序证实了体外表达的AaHIT1蛋白的正确性 .将AaHIT1基因转化入烟草中并获得了转基因植株 ,基因组PCR、RT PCR及Northern印迹分别证实AaHIT1基因已正确地插入到烟草基因组中并已得到表达 .抗虫实验表明 ,该转基因烟草对白粉虱有明显的抗性 . 展开更多
关键词 北非蝎昆虫毒素 基因表达 原核表达 温度诱导表达载体 包涵体 AaHIT1 抗虫基因 转基因作物
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佐剂DDA和MPL对提高结核杆菌组合DNA疫苗免疫效果的比较研究 被引量:7
20
作者 余大海 蔡宏 朱玉贤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第8期765-770,共6页
编码结核杆菌3种抗原Ag85B,MPT64,MPT83的基因片段插入真核表达载体作为组合疫苗免疫小鼠,DDA和MPL作为佐剂分别提高了此三价苗的免疫原性和免疫保护效果,且相比之下DDA优于MPL.添加DDA后,Ag85B,MPT64,MPT83抗原特异的IFN-γ含量分别为(... 编码结核杆菌3种抗原Ag85B,MPT64,MPT83的基因片段插入真核表达载体作为组合疫苗免疫小鼠,DDA和MPL作为佐剂分别提高了此三价苗的免疫原性和免疫保护效果,且相比之下DDA优于MPL.添加DDA后,Ag85B,MPT64,MPT83抗原特异的IFN-γ含量分别为(265.37±79.2)U/ml,(185.31±58.3)U/ml,(108.13±54.4)U/ml,分别比非佐剂组的高16U/ml,45U/ml和2U/ml,与MPL组3种抗原特异性IFN-γ的含量无显著差异.IL-4的含量在各组中无显著差异.攻毒后细菌计数结果显示,添加佐剂的三价苗组小鼠的肺脏和脾脏的载菌量分别比空载体组降低了2 ̄3个数量级,且佐剂DDA组显著优于佐剂MPL组和未加佐剂组.病理切片结果与载菌量数据相一致,添加佐剂组,特别是DDA组小鼠肺部淋巴细胞相对减少,巨噬细胞增多.因此,DDA作为佐剂能显著提高核酸疫苗的免疫效率,佐剂MPL不能提高结核杆菌多价核酸疫苗的免疫效率. 展开更多
关键词 结核分支杆菌 组合疫苗 佐剂 DDA MPL 免疫效果
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