miR-31通过激活NF-κB信号通路而促进结肠癌细胞增殖

微小RNA(microRNA)在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。有研究表明,在结肠癌患者肿瘤组织中,miR-31表达水平增高。然而,定量PCR只能检测所在组织miR-31的整体表达水平,而无法观察miR-31在特定组织与特定细胞中的表达分布。目前,尚未见关于miR-31在结肠癌中原位表达的报道。本文从研究miR-31在结肠癌中的原位表达入手,进一步探究miR-31在结肠癌细胞中的功能及作用机制。原位杂交实验结果显示,miR-31在结肠癌肿瘤细胞中的原位表达明显升高;体外过表达或敲减miR-31证实,其可以促进结肠癌细胞增殖和集落形成;荧光定量PCR与Western印迹和双荧光素酶报告基因实验证实,在结肠癌细胞中,NF-κB通路的抑制因子丝氨酸/苏氨酸激酶40(STK40)是miR-31下游靶基因,miR-31靶向作用于STK40而激活NF-κB通路;反之,抑制NF-κB通路,miR-31的促增殖能力明显下降。上述结果提示,miR-31可能通过激活NF-κB信号通路而促进结肠癌的细胞增殖。

一种新型SUMO E3连接酶CBX4的化学修饰作用

多梳蛋白家族(polycomb group proteins,Pc G)是一类在染色质水平上通过表观遗传修饰抑制靶基因转录的调节因子,它在调节细胞周期、DNA修复、细胞分化、衰老和死亡中起到重要作用。CBX4作为Pc G家族中唯一具有SUMO E3连接酶活性的成员,可以作用于多种底物,包括HIPK2、SIP1、Ct BP、CTCF、Dnmt3a和HIF-1α等。底物的SUMO化修饰依赖于特定的结构基础,而且SUMO化的底物功能也会相应发生改变。同时,CBX4还可以被其它分子,如HIPK2,SENP2等进行磷酸化以及去SUMO化等修饰。本篇综述详细阐述了CBX4对底物的SUMO化修饰、自身被修饰及其生物学功能的变化。

静磁场对体外三维培养小鼠腔前卵泡发育成熟的影响

目的:用三维小鼠腔前卵泡体外培养成熟体系检测静磁场对生殖细胞发育成熟的影响。方法:从12日龄昆明小鼠的卵巢中,机械分离出直径为(130±10)μm的腔前卵泡,用海藻酸钠凝胶将单个卵泡包埋后,放入预平衡的培养液滴中培养,并随机分成对照组、5和450 mT暴磁组,隔天半量换液,在倒置显微镜下测量其直径,连续培养8 d,对成腔的卵泡进行体外人绒毛膜促性腺激素(HCG)刺激16～18 h后,检测卵母细胞成熟情况。结果:各组卵泡形态学发育均良好,随着体外培养时间的延长,卵泡逐渐增大,在第4天450 mT暴磁组卵泡直径与对照组相比增大显著(<0.05),第6天5和450 mT暴磁组均明显高于对照组(P<0.05)。随着磁场强度增强,卵泡成腔率亦比对照组显著提高(P<0.05)。而5 mT暴磁组成熟率与对照组相比无明显变化(P>0.05),但450mT组与对照组相比显著降低(P<0.05)。结论:海藻酸盐凝胶可维持昆明小鼠腔前卵泡体外正常生长发育。随着磁场强度增强,卵泡的成腔率显著性提高,成腔卵泡直径显著增大,但高强度的静磁场可能会影响卵母细胞的成熟过程。

小鼠腔前卵泡三维培养成熟后受精体系的建立及优化

目的:建立小鼠腔前卵泡体外海藻酸盐包埋培养的三维培养(3-dimensions in vitro growth,3D-IVG)方法以及成熟卵母细胞体外受精体系。方法:采用机械法分离12日龄雌性昆明小鼠卵巢,获取结构完整的腔前卵泡,腔前卵泡经过包埋后体外立体化培养,激素超排,收集黏液化的卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte-complex,COCs),分别计数发泡期(germinal vesicle,GV)卵母细胞、生发泡破裂期(germinal vesicle breakdown,GVBD)卵母细胞和含有第一极体(first polar body,PB)卵母细胞,制备卵母细胞染色体并进行C带染色分析。同时设小鼠体内超排卵母细胞(in vivo convention,IVC)作为对照。再将体外培养成熟的卵母细胞与获能后的小鼠精子受精,观察受精情况。结果:经过3D-IVG,卵泡存活率为82.5%,卵泡发育过程维持完整的三维结构,卵泡直径增长迅速,培养6d后,有91.7%成腔;在激素超排后,有82.6%COCs黏液化。GV、GVBD和含有PB的成熟卵母细胞分别为6.1%,45.4%和48.5%。3D-IVG获得的成熟卵母细胞百分率(48.5%)明显低于体内超排成熟卵母细胞百分率(82.9%),差异有统计学意义(P<0.05)。但3D-IVG所获得的卵母细胞染色体C带分析表明染色体数目为20条,结构未见异常,与体内超排卵母细胞一致。并观察到3D-IVG培养成熟的卵母细胞可以受精成功。结论:建立并完善了小鼠腔前卵泡的三维体外培养体系,为生殖毒性实验研究和胚胎工程研究提供了新的方法。

MicroRNAs与结直肠癌辐射敏感性的关系及作用机制

结直肠癌目前是世界第三大肿瘤,手术治疗后约50％的患者会复发和转移,目前美国国立综合癌症网络（NCCN）肿瘤学临床实践指南推荐常规接受适型外照射治疗.由于放疗将显著增加不良反应,如何最大程度减小辐射剂量,提高辐射敏感性至关重要.近年来人们不仅发现了microRNAs参与了结直肠癌的发病和演进,而且越来越多的证据表明,microRNAs在结直肠癌的辐射敏感性中发挥了重要的作用.辐射引起的DNA损伤反应包括ATM的激活,组蛋白修饰和染色质重塑,细胞周期停滞,损伤修复和凋亡等系列过程,microRNAs可以通过作用于任何一个环节调节DNA损伤修复过程,从而调控肿瘤的辐射敏感性.本综述重点阐述microRNAs影响DNA损伤修复的作用机制,并展望了microRNAs通过影响肿瘤辐射敏感性在临床上的应用.