芦荟苷对金黄色葡萄球菌生长抑制作用及对溶血毒素表达的影响

目的研究芦荟苷体外对金黄色葡萄球菌生长抑制作用以及对溶血素表达的影响。方法采用肉汤倍比稀释法检测芦荟苷水溶物对金黄色葡萄球菌最低抑菌浓度(MIC);琼脂打孔法观察芦荟苷对金黄色葡萄球菌的抑菌圈大小;试管法检测芦荟苷作用下金黄色葡萄球菌凝固酶的产生变化;检测芦荟苷作用下金黄色葡萄球菌溶血素活性变化;采用实时荧光定量PCR检测芦荟苷水溶物作用于金黄色葡萄球菌后对hla和agr A基因表达的影响。结果芦荟苷水溶物可抑制金黄色葡萄球菌生长并呈现浓度依赖性,作用于ATCC 25923和临床菌株SA1.5后的抑菌圈直径和MIC分别为21.5 mm、12.5 mg/m L和17mm、15 mg/m L;与对照组凝固酶效价32比较,1/2MIC组、MIC和2MIC组芦荟苷作用ATCC 25923后的凝固酶效价分别降为16、4和2;与对照组相比,1/2MIC组、MIC组及2MIC组芦荟苷水溶物降低ATCC 25923溶血活性,溶血率分别为(77.4±3.41)%、(42.2±2.4)%和(38.7±2.4)%;1/2MIC组、MIC组和2MIC组芦荟苷作用ATCC 25923后hla表达量分别为0.020 3(0.019 6,0.028 8)、0.011 6(0.010 6,0.013 1)和0.033 7(0.020 2,0.042 9),3组间差异有统计学意义(H=16.807,P<0.05);agr A表达量分别为0.074 6(0.066 2,0.098 2)、0.020 8(0.012 2,0.032 6)和0.021 3(0.010 2,0.029 6),3组间差异有统计学意义(H=16.320,P<0.05)。结论芦荟苷可抑制金黄色葡萄球菌生长,并对α-溶血素表达有抑制作用。

大蒜素对金黄色葡萄球菌毒力因子分泌的抑制作用

目的:研究大蒜素在体外对金黄色葡萄球菌的增殖以及毒力因子的分泌是否存在抑制作用。方法:将大蒜素稀释至不同浓度后,分别作用于处于生长对数前期的金黄色葡萄球菌,采用试管法测定大蒜素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);采用生长曲线测定法分析大蒜素对金黄色葡萄球菌的生长抑制作用;采用凝固酶,a-溶血素实验测定大蒜素对金黄色葡萄球菌毒力因子分泌的影响,采用测序技术以及Blast比对的方法测定大蒜素作用下a-溶血素基因的变化。结果:大蒜素对金黄色葡萄球的MIC为15.625 μg/mL,MBC为62.5 μg/mL;大蒜素可以抑制金黄色葡萄球菌的生长,并呈浓度依赖性;凝固酶的效价和a-溶血素的活性明显降低(P < 0.01);a-溶血素的DNA序列无明显改变。结论:大蒜素对金黄色葡萄球菌的增殖和毒力因子分泌具有明显的抑制作用。

环状RNA hsa_circ_0009735对胃癌细胞上皮间质转化、细胞周期和自噬的影响

目的:探讨环状RNA hsa_circ_0009735在胃癌组织和细胞中的表达,阐明其对胃癌细胞上皮间质转化(EMT)、迁移、细胞周期和自噬的影响。方法:取正常胃黏膜GES-1细胞、胃癌MGC-803细胞、MKN-45细胞和HGC-27细胞。将hsa_circ_0009735小干扰RNA和阴性对照转染MGC-803细胞,将胃癌MGC-803细胞分为si-hsa_circ_0009735组和阴性对照组;将对照质粒和hsa_circ_0009735过表达质粒转染入HGC-27细胞,将胃癌HGC-27细胞分为OE-hsa_circ_0009735组和对照质粒组;MGC-803细胞转染细胞自噬质粒pcDNA-eGFP-LC3后分为空白组和不同浓度(0.25、0.50、1.00和2.00 mg·L^(-1))雷帕霉素组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测胃癌组织和细胞中hsa_circ_0009735表达水平,激光共聚焦显微镜观察各组MGC-803细胞形态表现和细胞中自噬小体数,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数,流式细胞术检测不同细胞周期各组细胞百分率,Western blotting法检测各组细胞中微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、E-钙黏蛋白、Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平。结果:PCR产物经测序发现存在环化位点,与hsa_circ_0009735序列匹配。与癌旁组织比较,胃癌组织中hsa_circ_0009735表达水平升高(P<0.05);与GES-1细胞比较,MGC-803细胞中hsa_circ_0009735表达水平升高(P<0.05)。与空白组比较,0.25和0.50 mg·L^(-1)雷帕霉素组MGC-803细胞形态无明显改变,1.00 mg·L^(-1)雷帕霉素组MGC-803细胞中颗粒增多,边界不清;2.00 mg·L^(-1)雷帕霉素组死亡MGC-803细胞较多。激光共聚焦显微镜下1.00 mg·L^(-1)雷帕霉素组MGC-803细胞中自噬小体数与2.00 mg·L^(-1)雷帕霉素组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,不同浓度雷帕霉素组MGC-803细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),hsa_circ_0009735表达水平降低(P<0.01)。与阴性对照组比较,si-hsa_circ_0009735组MGC-803细胞中hsa_circ_0009735表达水平降低(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.01),迁移细胞数减少(P<0.01),G1期细胞百分率升高(P<0.05),S期细胞百分率降低(P<0.01),G2期细胞百分率降低(P<0.05),细胞中Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平均降低(P<0.05);与对照质粒组比较,OE-hsa_circ-0009735组HGC-27细胞中hsa_circ_0009735表达水平明显升高(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.01),迁移细胞数减少(P<0.01),G1期细胞百分率降低(P<0.01),S期细胞百分率升高(P<0.05),G2期细胞百分率升高(P<0.05),E-钙黏蛋白表达水平降低(P<0.05),Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论:胃癌细胞中高表达hsa_circ_0009735可能促进EMT进程,影响细胞迁移和细胞周期,并抑制细胞自噬过程。