基于Nrf2/HO-1信号通路探讨冠心通络方对大鼠冠脉微循环障碍的影响

目的:探索冠心通络方通过核因子E2相关因子(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路对冠脉微循环障碍(CMD)大鼠的保护作用及其可能机制。方法:将雄性SPF级SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、尼可地尔(1.56 mg/kg)阳性对照组及冠心通络方低(8.663 g/kg)、中(17.325 g/kg)、高(34.650 g/kg)剂量组,每组10只,除假手术组外,其余5组采用左心室注射月桂酸钠(1 mg/kg)制备CMD大鼠模型。造模成功后冠心通络方各组分别给与相应剂量冠心通络方煎液灌胃,尼可地尔组灌胃尼可地尔混悬液,其余2组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续灌胃28 d。超声心动图检测心功能后留取血清及心肌组织;Carstairs染色观察心肌组织微血栓形成情况,海登汉氏(Heidenhain)染色观察心肌组织微梗死情况;相应试剂盒检测血清NO、ET-1及心肌组织SOD、GSH-Px、MDA水平;Western Blot检测心肌组织Keap1、细胞质Nrf2及细胞核Nrf2、HO-1蛋白表达;免疫组化法检测心肌组织中Nrf2、Keap1、HO-1蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心功能及血清NO水平和心肌组织SOD、GSH-Px水平显著降低,心肌微梗死、心肌内微血栓阳性比例及血清ET-1水平和心肌组织MDA水平显著升高,心肌组织Keap1蛋白、细胞质Nrf2蛋白表达显著降低,细胞核HO-1、Nrf2蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,冠心通络方中、高剂量组大鼠心功能显著改善,心肌微梗死比例、微血栓阳性比例及血清ET-1和心肌组织MDA水平显著降低,血清NO水平及心肌组织SOD、GSH-Px水平显著升高,心肌组织Keap1蛋白、细胞质Nrf2蛋白表达显著降低,细胞核HO-1、Nrf2蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:冠心通络方能一定程度上改善CMD大鼠病理进程及心功能,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路表达,增加机体抗氧化能力有关。

月桂酸钠诱导建立三种冠状动脉微循环障碍大鼠模型的比较

目的比较利用月桂酸钠诱导建立的3种SD大鼠冠状动脉微循环障碍模型,评价出较优方案。方法50只6~8周龄雄性SD大鼠使用随机数字表法分为空白组、假手术组和模型组1~3,每组10只。空白组未行任何干预;模型组1采用扩张肋间后挤出心脏+心尖注入月桂酸钠(1 mg/kg)1次,模型组2采用扩张肋间后挤出心脏+心尖注入月桂酸钠(1 mg/kg)2次,模型组3采用扩张肋间后挤出心脏+夹闭主动脉根部+心尖注入月桂酸钠(1 mg/kg)1次;假手术组操作同模型组2,注入等量生理盐水。造模后持续饲养并于72 h后采用超声心动图评价心功能,HE、Heidenhain和Carstairs染色观察心肌组织病理变化。结果手术大鼠死亡率为17.5%(7/40)。假手术组与空白组左室射血分数(LVEF)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与假手术组比较,模型组1~3 LVEF均降低(P<0.05);与模型组2比较,模型组1、3 LVEF升高(P<0.05)。HE染色显示,模型组1~3均出现心肌细胞溶解、断裂及炎症细胞浸润,可见不同程度的冠状动脉微血管内血栓形成。Heidenhain染色显示,模型组1~3心肌纤维中均可见不同程度的点状、片状及团块状黑染缺血灶。Carstairs染色显示,模型组1~3冠状动脉微血管中均可见血小板与纤维蛋白重叠的紫色血栓。结论三种造模方法均可建立冠状动脉微循环障碍模型,其中以扩张肋间后挤出心脏+心尖注入月桂酸钠(1 mg/kg)2次的方法建立动物模型更稳定可靠。

中医药治疗冠脉微循环障碍用药规律的数据挖掘

目的探讨中医药治疗冠脉微循环障碍(CMD)的用药规律。方法检索中国知网、中国生物医学文献数据库、PubMed和Cochrane Library等数据库中有关中医药治疗CMD的文献。将筛选后获得的方药建立数据库,应用频数统计、关联规则和聚类分析等数据挖掘方法总结其用药规律。结果最终获得89篇文献,处方90首,涉及中药131味。使用频次较高的中药有丹参、黄芪、川芎、当归、甘草、三七等;应用较多的中药种类有补虚药、活血化瘀药、理气药;四气以温、寒、平为主,五味多用甘、辛、苦;药物归经频次较高的依次为肝、脾、心经。关联规则分析得到核心药对是"丹参-黄芪",核心组合为"黄芪-川芎-丹参"。聚类分析将高频药物分为7类,以血府逐瘀汤、逍遥散、瓜蒌薤白半夏汤的加减组方为主,以及单味中药水蛭和人参。结论治疗CMD的核心药物为丹参、黄芪、川芎、当归,以益气活血,理气止痛为基本治法,兼以疏肝健脾、化痰通络等进行配伍。临床上可应用血府逐瘀汤、逍遥散、瓜蒌薤白半夏汤等经典名方随证加减治疗CMD。