人乳头瘤病毒与结直肠癌相关性的研究

结直肠癌病因及发生机制目前并不十分清楚。许多证据表明,人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)与人类肿瘤关系密切,因此HPV与结直肠癌的关系目前也越来越受到关注。为了解结直肠疾病中HPV感染情况,以明确HPV与结直肠癌的关系,我们对112例结肠镜活检标本进行了HPV检测,结果报道如下。 1 材料和方法 1.1 PCR模板DNA制备通过结肠镜检查,活检获取112例标本,用福尔马林固定,石蜡包埋保存。所有标本同时行病理检查确定诊断,其中结直肠腺癌46例,结肠腺瘤18例,溃疡性结肠炎12例,对照组为“正常”结直肠组织,共36例。

病毒治愈的荷瘤鼠对再次植入S_（180）细胞的实验研究

给病毒治愈的Ｓ１８０荷瘤小鼠腹腔内植入不同剂量的Ｓ１８０细胞和ＥｈｒＬｉｃｈ细胞，随着Ｓ１８０细胞的植入量的增加，其存活率从９０％下降至１５％，与植入的Ｓ１８０细胞量成反比。而用ＥｈｒＬｉｃｈ腹水瘤细胞植入病毒治愈的Ｓ１８０小鼠，５００００／只和１０００００／只两组各存活１０％，其它组１００％死亡。Ｓ１８０细胞加环磷酰胺植入病毒治愈的Ｓ１８０荷瘤鼠，存活率９０％以上，植入正常小鼠存活率０％。

用免疫蚀斑方法筛选重组痘苗病毒疫苗株

用间接免疫酶方法在硝酸纤维膜上检查、筛选和回收重组痘苗病毒。作为人用疫苗株的筛选，此法较核酸杂交方法更简便、直观和准确，在筛选重组病毒的同时确定了病毒在感染细胞上的表达。构建了含痘苗病毒７．５ｋ启动子和ＥＢ病毒膜抗原基因的转移载体，从转染细胞的病毒混合液中用特异性ＭｃＡｂ和间接免疫酶方法直接筛选表达ＥＢ病毒膜抗原的重组痘苗病毒，并从阳性酶斑中回收具感染性病毒。

流感病毒治疗小鼠腹水瘤的实验研究

甲型流感病毒７５－３９株鼠肺适应型经鼻腔感染小鼠，可使小鼠致病并发生死亡，ＬＤ５０为３．６７。而经皮下和腹腔感染无致病性，存活率１００％。基于经腹腔注射无致病性的实验结果，进而用此病毒治疗Ｓ＿（３７）腹水瘤小鼠，存活率达９３．３％。体外流感病毒感染Ｓ＿（３７）肿瘤细胞，经不同时间观测，至第３天时Ｓ＿（３７）细胞经台盼蓝染色，发现细胞１００％死亡，而对照组Ｓ＿（３７）细胞死亡率为１０％左右（Ｐ＜０．０１）。进一步研究病毒免疫治疗Ｓ＿（３７）腹水瘤小鼠的机理，发现经病毒感染后小鼠ＮＫ细胞杀伤活性升高达５８％，正常小鼠ＮＫ活性为２２％，两者有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。同时，检测注射病毒后小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性也随之升高。

乙型肝炎病毒e抗原的纯化及其在人血清抗体检测中的应用

目的方法利用ＺｈｏｕＪｉａｎ教授提供的重组质粒ＤＮＡｐＢＶ２２０／ｅＡｇ，转染ＤＨ５α细胞，经３０℃培养３小时，４２℃培养６小时温度诱导后，提取乙型肝炎病毒ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）。经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ层折纯化后免疫打点分析，收集阳性蛋白。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，考马斯亮蓝Ｇ２５０染色，显示为单一的蛋白带，用免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）和免疫打点（ｌｍｍｕｎｏｄｏｔ）法，确定表达产物的特异性。将纯化的ＨＧｅＡｇ用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和免疫条。方法基检测人血清中的相关抗体。结果经４９例乙型肝炎病毒ｅ抗体（ＨＢｅＡｂ）阳性病人血清检验证实了其特异性。结论免疫条方法较ＥＬＩＳＡ方法更敏感、特异。

用聚合酶链反应检测结肠癌人乳头状瘤病毒基因

目的 应用聚合酶链反应,检测人乳头状瘤病毒(Humanpapillomavirus,HPV)基因与结肠癌及癌区周边组织的相关性。方法 将结肠镜检获取的72例活检标本进行病理检测,其中结肠癌46例,非癌26例(结肠癌周边组织标本10例),标本用蜡块包埋与固定液两种方法固定,用聚合酶链反应(PCR)特定DNA片段体外扩增法。结果 结、直肠癌人乳头状瘤毒基因检测阳性率434%,结、直肠癌周边组织阳性率10%,非癌组织阳性率为0%。结论 癌区组织基因(HPVs)检测率较高,与非癌对照组相比,差异有显著性(P<0.05),癌组织中HPVs主要以HPV1633型和HPV18型为主,统计学分析表明结、直肠癌的发生、发展与HPV感染有一定的相关性,尤以HPV16型关系更为密切。

人乳头瘤病毒与大肠癌的发生及病理组织学相关性的研究

目的 了解人乳头瘤病毒 (HPV)与大肠癌的发生及病理组织学的关系。方法 用多重引物PCR方法检测了 46例大肠癌标本和 36例对照组织的HPVDNA ,并与病理组织学结果进行比较。结果 大肠癌总HPV阳性率为 41.3% ,其中HPV16为 2 3 .9% ,与对照组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。总HPV和HPV16的阳性率 ,高分化腺癌组为 38.9%和 16 .7% ,中分化组为 38.5 %和 2 3 .1% ,低分化组为 46 .7%和 33 .3 % ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,HPV6 / 11及HPV18型阳性率各组比较 ,差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。总HPV阳性率 ,印戒细胞癌组 (5 0 % )略高于管状腺癌、黏液腺癌和乳头状腺癌组 (P >0 .0 5 ) ;HPV6 / 11阳性仅见于管状腺癌组 (12 .5 % ,P >0 .0 5 )。HPV16型感染则存在于各型癌细胞中 (均超过 2 0 % ) ,恶性程度较高的黏液腺癌和印戒细胞癌中阳性率分别达 33 .3 %和 5 0 % ,其中印戒细胞癌显著高于管状腺癌和乳头状腺癌 (P <0 .0 5 )。结论 HPV感染 ,尤其是HPV16 ,与大肠癌有较密切的关系 ;其中HPV与癌组织细胞分类可能有一定的相关性 。

EB病毒壳抗原gp125的表达和初步应用

以痘苗病毒为载体克隆了 Epstein-Barr 病毒(EBV)壳抗原(VCA)的基因,重组痘苗病毒在感染细胞表达蛋白产物。用间接免疫荧光、免疫印迹技术和免疫电镜确定反应的特异性,表达产物位于细胞浆内和核内,胞浆内大量集聚,致使核偏向一侧,分子量约为100000。重组痘苗病毒免疫血清能特异性地与 B95-8细胞浆内的抗原反应。用重组病毒感染的细胞为靶细胞,并以 B95-8细胞和天坛株痘苗病毒感染的细胞分别为阳性和阴性对照,用免疫荧光方法平行检查不同人群血清中的VCA/IgG 和 VCA/IgA 抗体。结果表明,基因工程表达产物的特异性和在检查人血清抗体中的意义,为 ELISA 的建立和应用提供可靠的依据和抗原来源。

Epstein-Barr病毒基因工程亚单位疫苗膜抗原gp340/220的纯化及其免疫学特性

利用病毒学研究所免疫研究室重组的表达Epstein-Barr病毒膜抗原(MA)gp340/220重组痘苗病毒感染143细胞,24小时后裂解细胞,获得的上清液经DEAE-Sepharose FF及Sephadex G200层析纯化,经免疫打点分析后收集阳性蛋白,经SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝R-250染色,显示为单一的蛋白带,从而获得纯化的亚单位疫苗MA gp340/220。将纯化的MA与A1(OH)_3佐剂或rIL-2+完全福氏佐剂免疫小鼠,对其免疫学特性进行测定。结果表明,MA免疫的小鼠能产生较高滴度的特异性抗体和中和抗体,诱导产生抗体依赖细胞介导的细胞毒反应(ADCC),并能刺激特异性T淋巴细胞的增殖,但未发现对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤作用有何影响。