蛇床子素通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路的活化增强吡柔比星对骨肉瘤细胞143B的化疗作用

目的:探讨蛇床子素通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路的活化来增强吡柔比星对骨肉瘤细胞的化疗作用。方法:采用MTT法、Transwell实验分别检测蛇床子素、吡柔比星单独和联合对人骨肉瘤细胞143B增殖、迁移和侵袭能力的影响。westernBlotting方法检测PI3K、Akt、NF-κB蛋白表达水平,所有计量资料采用均数±标准差表示,采用SPSS 25.0软件进行统计学分析,各组间差异应用单因素方差分析统计,多组间两两比较采用LSD分析统计,P<0.05为有统计学意义。结果:蛇床子素和吡柔比星联合用药可显著抑制人骨肉瘤143B细胞的增殖、迁移和侵袭能力,显著下调PI3K、Akt、NF-κB蛋白表达水平。结论:蛇床子素可能通过调节PI3K/Akt/NF-κB信号通路来提高吡柔比星对人骨肉瘤143B细胞的杀伤活性。

Let-7a/g/i在骨肉瘤细胞中靶向调控Aurora-B表达

背景与目的:微小RNA(micro RNA,miRNA)是一类具有重要调控作用的非编码小分子RNA,在多种肿瘤的发生、发展中起重要作用。该研究探讨可能在骨肉瘤细胞中调控Aurora-B激酶表达的miRNA,并为进一步探讨Aurora-B在骨肉瘤细胞恶性表型中的作用及调控机制奠定基础。方法:采用生物信息学预测软件(http://www.targetscan.org)以及荧光海肾素实验探讨可能靶向调控Aurora-B的miRNA;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)进一步验证骨肉瘤细胞系U2-OS和HOS细胞中调控Aurora-B表达的mi RNA。结果:生物信息学预测和荧光海肾素实验显示,Aurora-B基因可能是let-7a/b/c/d/e/f/g/i的靶基因;RTFQ-PCR和Western blot检测结果显示,上调let-7a/g/i的U2-OS和HOS细胞中Aurora-B mRNA和蛋白的表达水平显著低于阴性对照组(阴性质粒转染细胞);但是上调let-7b/c/d/e/f的U2-OS和HOS细胞中Aurora-B mRNA和蛋白的表达水平和阴性质粒转染细胞比较差异无统计学意义。结论:Let-7a/g/i可能负向调控Aurora-B在骨肉瘤细胞中的表达。

LY294002抑制成骨肉瘤细胞U2-OS侵袭迁徙

目的探讨LY294002对成骨肉瘤细胞体外侵袭迁徙的影响。方法不同浓度的LY294002作用U2-OS细胞24 h,检测细胞增殖情况;Wound healing和Transwell invasion实验检测细胞迁徙和侵袭情况。结果 LY294002可抑制U2-OS细胞增殖并呈剂量依赖;LY294002(40μM)处理细胞组细胞迁徙率为(37.97±2.49)%,阴性对照组细胞迁徙率为(83.78±2.84)%,两组间具有显著的统计学差异(P<0.01);LY294002(40μM)处理细胞组穿膜细胞数显著低于阴性对照组穿膜细胞数〔分别为(36.1±5.0)个/视野和(89.1±6.4)个/视野〕(P<0.01)。结论 LY294002能有效抑制成骨肉瘤细胞U2-OS细胞体外迁徙,有望成为成骨肉瘤化学治疗药物。

下调HER2磷酸化水平对骨肉瘤细胞U2-OS体外增殖转移的抑制作用研究

目的探讨下调人类表皮生长因子受体2(HER2)磷酸化水平对骨肉瘤细胞U2-OS体外增殖、侵袭转移能力的影响。方法采用不同浓度(5、10、20、30、40μmol/L)的HER2磷酸化抑制剂二甲苯磺酸拉帕替尼作用骨肉瘤细胞U2-OS。四甲基偶氮唑盐(MTT)检测作用不同时间(24、48、72 h)细胞的增殖能力,并计算出24 h药物的半数抑制浓度(IC50)。10μmol/L二甲苯磺酸拉帕替尼作用U2-OS细胞,Western blot检测磷酸化HER2(p-HER2)蛋白表达水平;Wound healing和Transwell invasion实验检测细胞迁徙、侵袭能力。结果二甲苯磺酸拉帕替尼显著抑制U2-OS细胞的增殖,并且呈时间、剂量依赖性;二甲苯磺酸拉帕替尼作用24 h后,细胞中p-HER2蛋白表达水平显著低于阴性对照组(0.093±0.033 vs 0.306±0.033);细胞迁徙率低于阴性对照组(%:32.70±3.00 vs 94.52±4.76),穿膜细胞数低于阴性对照组(个/视野:37±5 vs 85±10)。结论体外下调U2-OS细胞中HER2磷酸化水平能显著抑制U2-OS细胞的增殖、迁徙和侵袭,HER2有望成为抗骨肉瘤侵袭转移的分子靶点。