miR-424靶向PTEN基因调控IL-6/STAT3信号通路影响骨髓瘤细胞增殖和凋亡的机制

目的探究miR-424靶向张力蛋白同源第10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)调控白细胞介素(IL)-6/信号转导与转录因子(STAT)3信号通路影响骨髓瘤(MM)细胞增殖和凋亡的机制。方法靶基因预测、双荧光素酶报告实验验证miR-424对PTEN的靶向调控作用;采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测骨髓瘤患者骨髓标本及骨髓瘤细胞株中miR-424、PTEN的表达,并分析miR-424表达与患者临床病理参数的关系;采用脂质体瞬时转染法将mimic NC、miR-424 mimic、anti-miR-424 mimic、si-control、si-PTEN转染H929、U266细胞并分为对照组、miR-NC组、miR-424组、anti-miR-424组、anti-miR-424+si-NC组和anti-miR-424+si-PTEN组;噻唑蓝(MTT)法及单克隆染色检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,Western印迹检测PTEN、IL-6、STAT3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、原癌基因(c-Myc)水平。结果双荧光素酶实验及Western印迹验证了miR-424对PTEN的靶向调控作用。MM患者骨髓标本及MM细胞株中miR-424水平明显高于正常骨髓标本及浆细胞,PTEN水平明显低于正常骨髓标本及浆细胞,且miR-424水平与PTEN水平呈负相关,与ISS分期、危险分层、轻链类型呈正相关关系。与miR-NC组相比,miR-424组细胞增殖能力、IL-6、STAT3、Bcl-2、c-Myc水平明显升高,凋亡率、PTEN、Bax水平明显降低;anti-miR-424组细胞增殖能力、IL-6、STAT3、Bcl-2、c-Myc水平明显降低,凋亡率、PTEN、Bax水平明显升高(P<0.05)。与anti-miR-424+si-NC组相比,anti-miR+424-si-PTEN组细胞增殖能力、IL-6、STAT3、Bcl-2、c-Myc水平明显升高,凋亡能力、PTEN、Bax水平明显降低(P<0.05)。结论MM细胞的增殖、凋亡受miR-424及PTEN的双重调控,miR-424可靶向PTEN调控IL-6/STAT3信号通路影响MM细胞的增殖和凋亡。

慢性髓系白血病急变期分子遗传学研究进展

9号和22号染色体相互易位产生Ph染色体及BCR-ABL融合基因,几乎在所有慢性髓系白血病(CML)出现,BCR-ABL编码的蛋白具有持续增高的酪氨酸激酶活性,使白血病细胞异常增殖。急变期是CML的晚期,在此期间常常出现其它附加染色体和分子的改变。大量研究表明,BCR-ABL基因与其他失调的基因共同作用并异常激活下游的信号传导通路,促进了疾病的进展。酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼对大多数慢性期CML患者治疗效果显著。IRIS5年的临床试验显示:用伊马替尼治疗的98%患者达血液学完全缓解,92%患者达主要细胞遗传学缓解,87%患者达完全细胞遗传学缓解。然而,仍有少数慢性期和大多数进展期患者用伊马替尼治疗疗效欠佳。在耐药机制的研究中发现ABL激酶区点突变与临床耐药关系密切。第二代酪氨酸激酶抑制剂可改善伊马替尼耐药,本文就急性变的分子机制、伊马替尼耐药等做一综述。

FISH与RQ-PCR监测慢性髓系白血病患者造血干细胞移植后微小残留病

背景与目的:监测慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)的微小残留病(minimal residual disease,MRD)的常用方法有间期荧光原位杂交(interphase fluorescence in situ hybridization,FISH)和实时定量逆转录-聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription PCR,RQ-PCR)。本研究分析用FISH和RQ-PCR两种方法在CML造血干细胞移植后不同时间点监测MRD的意义。方法:采用间期FISH和RQ-PCR技术,对31例异基因造血干细胞移植前后的CML患者骨髓细胞进行BCR-ABL融合基因定期监测,随访时间3～48个月。结果:31例患者移植后,前30个月各时间点FISH检测的阳性细胞数及RQ-PCR检测的BCR-ABL/ABL比值均较移植前明显下降,下降>2个对数值(P<0.05);移植30个月后FISH检测结果为0时,RQ-PCR仍然能检测出BCR-ABL/ABL的表达水平,与移植前相比,30个月后各时间点BCR-ABL/ABL比值下降>3个对数值(P<0.05)。结论:FISH和RQ-PCR方法检测BCR-ABL融合基因有较好的一致性。RQ-PCR连续监测MRD的敏感性更高,MDR的定量分析有利于评估疗效和指导个体化治疗。

原发性巨球蛋白血症1例报告并文献复习

目的探讨原发性巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia,WM)的临床特点、免疫表型、遗传学改变及诊疗措施。方法回顾分析一例原发性巨球蛋白血症患者的临床资料。结果本病例经血清固定电泳、骨髓形态学、细胞免疫分型等检测结果证实为原发性巨球蛋白血症,患者经过8个疗程的化疗后,恢复良好,目前仍在定期随访之中。结论 WM有特殊的免疫表型及细胞遗传学的改变,在临床工作中如果遇到单克隆IgM增高的病例,建议要考虑到WM的可能性,进一步完善免疫表型和细胞遗传学检测。

银屑病患者血浆PAF、PAF-AH的变化及意义

目的 探讨银屑病患者血浆血小板活化因子 (platelet activatingfactor,PAF)的含量、血小板活化因子 乙酰水解酶 (PAF acetylhydrolase ,PAF AH)活性的变化及意义。方法 采用生物法检测 2 0例银屑病患者和 2 0例正常献血者血浆中的PAF含量 ,同时采用酶水解底物显色法测定二者血浆中的PAF AH活性。结果 银屑病患者血浆中PAF含量为 (13.5 6± 4 .32 )ng/ml、PAF AH活性为 (16 .6 8± 1.4 2 )nmol/min/ml;正常献血者血浆中PAF含量为 (6 .72± 2 .4 6 )ng/ml、PAF AH活性为 (2 9.84± 1.86 )nmol/min/ml,两组比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 银屑病患者血浆中PAF含量增高 ,同时伴有血浆PAF AH活性的降低。二者在银屑病发生和发展中起重要作用。

46例慢性粒细胞白血病遗传学与分子生物学分析及其临床意义

目的探讨在慢性粒细胞白血病（CML）诊断和微小残留病（MRD）监测中，染色体核型分析、荧光原位杂交（FISH）和实时荧光定量PCR（RQ-PCR）的应用价值及其临床意义。方法采用染色体G显带、FISH和RQ-PCR技术对46例CML初发慢性期（CP）患者进行核型分析、BCR／ABL融合基因检测，并对伊马替尼、羟基脲和干扰素治疗后进行追踪观察。结果①46例CML初发患者Ph染色体均为阳性，其中1例伴有附加染色体异常；FISH检测BCR／ABL融合基因均阳性，阳性细胞平均数为（92．20±7．80）％；RQ-PCR检测BCR-ABL／ABL的平均值（68．18±26．67）％。②46例患者随访时间6～24个月，其中17例采用伊马替尼治疗，27例羟基脲治疗，2例干扰素治疗。随访期间，7例出现附加染色体异常，同时FISH检测BCR-ABL融合基因均为阳性（82％～1.0％），RQ-PCR检测BCR-ABL／ABL值为（51．10±16．30）％，并于0～12个月内进入加速期或急变期。其余39例患者（包括伊马替尼治疗组16例，羟基脲和干扰素治疗组29例），伊马替尼治疗组FISH检测仅4例为阳性（1．0％～5．0％），RQ-PCR检测BCR-ABL／ABL转录本相对平均值（0．10±0．08）％，与治疗前相比明显下降；羟基脲和干扰素治疗组FISH检测均阳性（79％～100％），BCR-ABL／ABL转录本相对平均值（53．65±12．60）％，与治疗前相比无明显改善。结论染色体核型分析、FISH、RQ-PCR能够有效提高CML患者的诊断和治疗后MRD的监测水平。

hnRNPK在慢性粒细胞白血病急变前后的表达及意义

目的探讨不均一性核内核糖蛋白K(hnRNPK)与慢性粒细胞白血病(CML)进展的关系。方法用Western blot和RT-PCR方法检测CML患者慢性期和急变期骨髓细胞hnRNPK在蛋白和转录水平的表达。结果hnRNPK蛋白表达慢性期患者明显低于急变期,其mRNA水平在两时期无统计学差异。结论hnRNPK蛋白在CML骨髓细胞中表达,其蛋白表达量与CML病情进展有关。

用流式细胞仪对多毛细胞白血病作细胞免疫分型(附3例报告)

多毛细胞白血病(Hairy Cell Leukemia,HCL)少见,目前国内报道仅数十例.其诊断、分型除依据临床表现、血液和细胞形态学检查外,尚需进行细胞免疫分型,但目前国内这方面资料很少.我们采用三色流式细胞仪(FCM)对3例HCL作免疫分型,报道如下.

再生障碍性贫血患者血清Epo、Tpo水平及其临床意义

目的 :探讨再生障碍性贫血患者血清红细胞生成素 (Epo)、血小板生成素 (Tpo)的含量及其意义。方法 :采用夹心酶联免疫法测定 14例再生障碍性贫血患者及 18例健康人血清Epo、Tpo ,同时检测红细胞数 ,血红蛋白、血小板数。结果 :重型再生障碍性贫血 (SAA)和慢性再生障碍性贫血 (CAA)的血清Epo、Tpo水平明显高于对照组 (P <0 .0 1) ,其血红蛋白 (Hb)、红细胞数 (RBC)、血小板数 (PLT)则明显低于对照组(P <0 .0 1)。结论 :SAA和CAA血清Epo、Tpo水平较对照组明显升高 ,且Epo与Hb及阻RBC ,Tpo与PLT均呈负相关 ,应用rhEpo、rhTpo治疗再生障碍性贫血可能是有益的。

采用荧光定量PCR溶解曲线法监测人TCR alpha链CDR3谱系漂移技术的初步探讨

目的:初步探讨荧光定量PCR溶解曲线分析技术监测人外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法:提取4例正常人、2例淋巴瘤型白血病患者PBMC中的总RNA,逆转录成cDNA,以32个人TCRalpha链胚系可变区基因家族(TRAV)设计上游引物,共同的TCRalpha胚系链恒定区基因家族(TRAC)设计下游引物,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增32个TRAV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的单/寡/多克隆增生。结果:正常人外周血T细胞TCRalpha链32个家族CDR3表达频率不一致,各家族PCR产物的溶解曲线谱型图(melting curve spectratyping)呈现熔点不同的CDR3多态性,为多克隆增生的高斯分布,2例淋巴瘤型白血病患者外周血T细胞TCRalpha链32个家族CDR3表达频率不一致,部分家族呈缺失状态,患者各家族PCR产物的溶解曲线谱型图上,多数家族为多克隆增生的高斯分布,但每个患者均出现数量不等的单克隆和寡克隆增生家族。结论:荧光定量PCR溶解曲线分析TCRalpha链CDR3谱系漂移技术方法稳定简便,能较好地监测正常人和临床样本外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。

减低剂量的DA方案诱导治疗初治急性髓细胞白血病的临床疗效研究

目的探讨含不同剂量柔红霉素的DA(柔红霉素+阿糖胞苷)方案诱导治疗初治急性髓细胞白血病的临床疗效观察。方法前瞻性研究分析我省多个医疗研究中心2013年8月至2016年11月住院确诊的初治急性髓细胞白血病76例患者的临床资料,分为A组、B组及C组,观察三组患者治疗后完全缓解(CR)率及生存期。结果入组A组患者12例,B组患者54例,C组患者10例。首次诱导治疗后A组有效率83.33%,CR率66.67%;B组有效率92.60%,CR率83.33%;C组有效率90.00%,CR率80.00%。第二疗程评估共73例:A组有效率83.33%,CR率83.33%;B组有效率90.74%,CR率88.87%;C组有效率85.71%,CR率85.71%,C组患者3例中1例患者死亡,另2例患者自请出院。6个周期疗程治疗的可评估病例共51例,A组6例,B组42例,C组3例,OS率A组100%,B组92.86%,C组100%;随访1年,共45例,1年总生存(OS)82.22%,无进展生存期(PFS)64.44%;2年总OS 74.36%,PFS 61.54%。结论减低剂量柔红霉素的DA方案诱导治疗初治急性髓系白血病有效,与高剂量相比毒副作用较低,适用于老年、体能状态差、有合并症及经济条件差的患者,但减低剂量方案治疗疾病易进展,不常规推荐使用。

外周血涂片镜检在急性白血病诊断中的意义

急性白血病（acute leukemia,AL）是一种常见的血液系统恶性克隆性疾病,导致血细胞数量和成分的变化,引起血常规检查中一系列指标异常。由于白血病细胞的多态性和复杂性,仪器分类系统及标本本身存在问题等诸多因素,均可使仪器分析结果出现偏差。受工作数量和技术力量等各方面影响,临床检验人员的外周血常规涂片镜检工作开展较薄弱，时有漏诊、误诊发生。

血清免疫球蛋白水平与成人ITP患者疗效的相关性研究

目的探讨血清免疫球蛋白是否有助于免疫性血小板减少(ITP)患者的治疗策略选择。方法收集该院2009年1月至2012年7月成人初诊ITP患者128例,所有患者予激素联合丙种球蛋白(IVIG)、环孢霉素A(CsA)、血小板生成因子(TPO)受体激动剂联合利妥昔单抗的阶梯式治疗,通过监测血清免疫球蛋白水平,分别比较小于或等于IgG、IGM、IgA中位数组及大于中位数组的患者对治疗方案的反应率。结果血清IgA、IgM、IgG水平与出血倾向并无相关性。低IgM水平与一线治疗抵抗相关,但对CsA及TPO受体激动剂联合利妥昔单抗治疗有反应;血清IgA水平增高往往与一线及CsA治疗抵抗相关,但对利妥昔单抗联合TPO受体激动剂治疗有反应。结论血清免疫球蛋白检测有助于成人ITP患者的治疗策略选择。

急性髓细胞白血病的免疫表型异质性及治疗特点

目的探讨急性髓细胞白血病(AML)的免疫表型异质性及治疗特点。方法111例初发的成人AML,常规骨髓细胞瑞氏染色及细胞化学染色进行FAB分型,用单克隆抗体标记经流式细胞仪对骨髓细胞进行白血病细胞免疫分型。每个病例用标准方案诱导1个疗程后复查血液学缓解情况。结果111例FAB分型为AML的病例中,免疫学分型为Ly-AML79例(71.2%),Ly+-AML30例(27%),急性混合细胞白血病(acute mixed-lineage leukemia,AMLL)2例(1.8%)。在Ly+-T-AML中,T细胞表面抗原以CD7表达率(89.5%)最高,CD2(22.2%)次之。在Ly+-B-AML中,B细胞表面抗原以CD19表达率(66.7%)最高,CD10(33.3%)次之。用标准诱导缓解方案治疗后,Ly-AML患者CR率63.3%,Ly+-AML患者CR率40%,两者CR率差异有显著性(P=0.028)。结论白血病细胞免疫分型可客观反映细胞来源及分化阶段,经标准诱导缓解后,Ly-AML患者CR率高于Ly+-AML患者。

STI571诱导K562细胞耐药机制的实验研究

目的体外建立对STI571耐药的K562细胞系(简写为K562-R),并对其耐药机制进行初步分析。方法用药物浓度逐步递增的方法培养野生型K562细胞(简写为K562-W)。绘制K562-R生长曲线,MTT法检测STI571、阿霉素(adriamycin,ADR)和三尖杉酯碱(harringtonine,HT)对K562-R的细胞毒作用,Ho-echst33342染色检测STI571对K562-R诱导凋亡作用。流式细胞术检测K562-R的MDR-1表达情况;基因测序检测K562-R的Abl激酶ATP结合区点突变情况;间期荧光原位杂交(interphasal fluorescence in situ hybridization,I-FISH)检测Bcr/Abl融合基因扩增情况。结果生长曲线绘制结果表明K562-R在0.5μmol/L的STI571环境中可呈指数增长;MTT法检测STI571对K562-W和K562-R的半数抑制浓度(50% inhibiting concentration,IC50)分别为(1.64±0.13)μmol/L和(3.32±0.05)μmol/L,K562-R的耐药倍数为(2.04±0.16)倍,而ADR和HT对两种细胞毒性作用均呈剂量依赖性反应,耐药前后差异无显著性(P值分别为0.472和0.108);Hoechst33342细胞凋亡试验表明STI571对K562-W诱导凋亡作用呈剂量依赖性,对K562-R作用减弱。流式细胞术检测K562-R和K562-W的MDR-1表达率分别为2.68%和1.39%(P<0.001),基因测序表明两种细胞Abl激酶ATP结合区序列完全一致;I-FISH检测初步观察K562-R的Bcr/Abl融合信号拷贝数增多(P<0.001)。结论体外成功建立STI571耐药的K562细胞系,其耐药机制可能与Bcr/Abl融合基因扩增有关。

伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病患者ABL激酶区点突变的检测

目的探讨伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病(CML)患者ABL酪氨酸激酶区点突变的发生情况及临床意义。方法采用巢式PCR扩增23例CML患者不同时期的40份骨髓标本的ABL激酶区,对扩增产物纯化、双向测序并进行序列同源性比对。结果7人(30.43%)检测出点突变,共导致5种类型的氨基酸替换:T315I3例,Y253H、E255K、F317L及G321W各1例。慢性期、加速期和急变期患者点突变的例数分别为2例、2例和3例。其中6例患者测序前经400mg/d伊马替尼治疗无效,加大伊马替尼剂量至(600～800)mg/d,随访3～6个月,仅F317L患者获得部分细胞遗传学缓解,另外5例患者均无遗传学反应,且Y253H和1例T315I疾病进展至急变期。G321W为初治慢性期患者,经400mg/d伊马替尼治疗达到完全血液学缓解,BCR-ABL+细胞比例显著下降。结论ABL激酶区点突变是CML患者对伊马替尼耐药的重要原因。不同类型的突变导致的耐药程度不完全相同,且并非所有点突变都会导致耐药的发生。监测ABL激酶区点突变有助于预测疗效并及早调整治疗。

骨髓单个核细胞热休克蛋白27表达在多发性骨髓瘤中的临床价值

目的探讨骨髓单个核细胞热休克蛋白27(HSP27)表达与多发性骨髓瘤(MM)临床特征的关系。方法收集初治多发性骨髓瘤患者86例,复发难治患者27例,对照组为非血液系统恶性肿瘤患者,根据治疗方案的不同,MM患者分为初治组、复发难治常规化疗组及含硼替佐米化疗组。分别于化疗前、化疗后1、2、3疗程检测骨髓单个核细胞HSP27的表达率及蛋白水平。结果化疗前各组HSP27表达量及蛋白水平趋势为:复发难治组大于初治组大于对照组。初治组中Ⅲ期患者的HSP27明显高于Ⅱ期患者。含硼替佐米化疗方案可明显降低HSP27的表达及蛋白水平,含硼替佐米化疗方案抑制HSP27的表达力度明显优于常规化疗组。化疗后1个疗程HSP27的表达量小于1的患者,其死亡率、复发率明显低于HSP27表达量大于1的患者,且复发时间明显延后。结论骨髓单个核细胞HSP27的表达及蛋白水平与多发性骨髓瘤的分期、治疗应答、预后相关。

双环醇对多发性骨髓瘤患者外周血单个核细胞Th1/Th2的影响

目的观察双环醇对多发性骨髓瘤(MM)患者连续疗程化疗前后外周血Th1/Th2比例的影响。方法收集2012年9月至2015年9月间初治MM患者68例,对照组为健康体检者37名。根据保肝药物的不同,随机将患者分为双环醇组(n=34例)及阿托莫兰组(n=34例)。分别于第1、2、3疗程化疗前、化疗后骨髓恢复期Th1、Th2类外周血单个核细胞(PBMC)培养后的细胞因子水平。结果阿托莫兰组及双环醇组患者DILI发生率在3疗程化疗期间的发生率差异均无统计学意义。MM患者中,Th1/Th2比例较健康对照组明显降低。第2疗程Th1类细胞因子水平明显较治疗前回升,而Th2类细胞因子水平明显较治疗前下降,但阿托莫兰组各类细胞因子则未见明显改变。结论双环醇对于MM患者的化疗相关性肝损伤的预防作用与同用途药物阿托莫兰无差异。双环醇使用至少2个疗程后,可调节MM患者的Th1/Th2细胞比例失调。