江苏地区无偿献血人群人类免疫缺陷病毒感染趋势调查

目的分析江苏地区2007-2016年无偿献血人群人类免疫缺陷病毒(HIV)感染率变化趋势。方法 2007-2016年共727 233例献血者经两种ELISA试剂筛查抗-HIV,抗-HIV反应性样品送南京市疾病预防控制中心(CDC)确证,统计分析10年来献血者HIV感染流行趋势。结果江苏地区近10年献血人数逐年增长,抗-HIV筛查阳性率呈平稳下降趋势,流行率为0.11%。但经CDC确认为HIV感染的献血者人数和感染率则急剧升高,感染率为16.85/100 000。确认感染的HIV献血者在不同性别、年龄和职业之间均具有统计学意义(P<0.01),其中HIV感染率在男性献血者组、18~30岁组和非公职人员组分别明显高于女性组、其他年龄组和其他职业组(P<0.05)。初次献血组和再次献血组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论江苏地区无偿献血人群HIV的感染率呈上升趋势,一方面需要加强对献血者的血液安全教育,另一方面提高献血前征询和献血后血液筛查的能力,保证临床用血安全。

第3代和第4代HIV检测试剂在血液筛查中的应用比较

第4代HIV检测试剂是将HIV抗原和抗HIV p24抗体同时包被在载体上,同时检测抗HIV-1/2抗体和p24抗原。我单位自2009年4月采用第3代和第4代HIV检测试剂对血液进行平行检测,至今已完成了68 650例血液标本的检测,结果报告如下。

江苏地区合格无偿献血人群戊型肝炎病毒感染情况调查

目的了解江苏地区无偿献血人群戊型肝炎病毒感染情况。方法 2014年9-10月对1 144份无偿献血者的血液标本进行ELISA抗-HEV Ig M和Ig G检测,并对检测结果进行统计分析;提取Ig M阳性标本的病毒RNA,进行逆转录和巢式PCR扩增;扩增产物经纯化后测序,用Mega 6.0软件分析测序结果并构建进化树,进行基因型分析。结果本次筛查HEV Ig M阳性率为1.49%;HEV Ig G阳性率为19.23%。HEV Ig M阳性率在年龄、男女比例、职业、婚姻状况和受教育程度上均无统计学差异(P>0.05);25份HEV Ig M初筛反应性标本经巢式PCR扩增,3份HEV-RNA阳性,献血者中病毒核酸阳性率为0.26%;序列分析结果表明,2例为Ⅳ型HEV感染;1例未能确定基因型。结论江苏地区献血者中HEV病毒核酸阳性率较高,有必要扩大筛查数量,并对输血后戊肝的潜在危险进行评估。

江苏地区无偿献血者HCV基因型的分布

目的探讨江苏地区献血者感染的HCV基因型及亚型。方法收集2013年来自江苏省血液中心ELISA双试剂检测抗-HCV阳性献血者血清标本,使用HCV核酸定量检测试剂盒检测HCV RNA载量;同时使用RNA提取试剂提取HCV RNA,反转录PCR法扩增HCV Core区基因片段,并对扩增产物进行测序,利用进化树分析基因型和亚型。结果 2013年抗-HCV阳性标本139例(0.20%),其中64例抗-HCV阳性血清标本经荧光定量检测,RNA阴性30份,阳性34份。经巢式PCR扩增能够分型的标本24份,包括1a(71.7%)、1b(7.5%)、2a(7.5%)和3b(1.9%)3种基因型和4种亚型。年龄偏大(>35岁)以及男性的HCV RNA阳性标本的病毒滴度与抗-HCV水平(S/CO值)都高于RNA阴性标本,并且存在性别差异,但年龄间无差异。结论江苏无偿献血者感染的HCV基因型以1型为主,其中1b为优势基因亚型。病毒血症献血者的HCV抗体水平显著升高,HCV RNA在自然感染进程中的变化有待通过进一步随访进行研究。

荧光定量PCR法评价核黄素光化学法灭活全血病毒的效果

目的 了解荧光定量PCR法（qPCR）评价核黄素光化学法灭活含疱疹病毒8型（HHV-8）全血的效果。方法 在常规检测合格的全血中,分别加入含105、106、107 copy/mL HHV-8的淋巴细胞BC-3和核黄素,以40-160J/mLRBC的紫外光辐照进行病毒灭活。以HHV-8ORF26为中心设计4对PCR套式扩增引物（产物长度为2 998、1 252、561、206bp）,构建和优化PCR预扩增条件,以qPCR检测灭活前、后4个片段在不同辐照条件下的扩增产物经梯度稀释的Ct值,计算相应的病毒滴度ΔLog值,以评估对病毒核酸的损伤情况。结果 核黄素光化学法对全血中HHV-8核酸有损伤作用,PCR预扩增HV-1（2 998bp）片段可用于评估辐照后HHV-8的病毒核酸损伤情况。病毒滴度ΔLog值随着病毒滴度、辐照强度和扩增片段长度的增加,最高达1.9Log值。结论 在HHV-8高流行区缺乏常规血液筛查HHV-8方法情况下,可采用核黄素光化学法进行体外灭活,降低其传播的可能性。

两家国产4代HIV试剂特异性评价

目的对国产4代HIV诊断试剂(酶联免疫法)对血站血样检测的特异性进行评价。方法采用两家第3代和第4代HIV酶免试剂盒对8815例随机献血样品进行定性检测,并对其结果进行分析。结果经临床考核和统计发现,两家公司的4代HIV试剂与相应的3代HIV试剂相比,对8815例随机献血样本检测的特异性符合率均为100%。结论与第3代HIV诊断试剂盒相比,第4代诊断试剂盒不会降低HIV诊断的特异性。

2010-2013年中国南京地区无偿献血人群HBV、HCV、HIV感染情况分析

本研究在于了解中国南京地区无偿献血者HBV、HCV和HIV感染及分布情况,探讨本地区人群的传染病流行趋势,为献血宣传和招募工作提供指导意见。将2010.6.10-2013.6.9三年间南京地区无偿献血者199777人次的血液标本,采用ELISA法检测HBsAg、抗-HCV和抗-HIV,对三项阴性标本再采用NAT联合检测HBVDNA、HCV-RNA和HIV-RNA,对检测结果进行统计分析,并将抗-HIV初筛反应性标本送南京市疾病预防控制中心确证。结果表明,3年中无偿献血者HBsAg、抗-HCV、抗-HIV感染率分别为0.45%,0.28%,0.11%;NAT呈反应性为0.07%;确证抗-HIV阳性32例,其中男性30例(6例为再次献血者),女性2例;不确定3例,其中男性2例,女性1例。经统计学处理证实,初次献血者与重复献血者HBsAg、抗-HCV、抗-HIV检测不合格率差异有统计学意义。结论:2010.6.10-2013.6.9南京地区无偿献血人群中抗-HCV、抗-HIV阳性率呈逐年下降趋势,HBsAg、NAT检测不合格率随年龄段增加而增加;抗-HCV、抗-HIV检测不合格率随年龄段增加而降低,重复献血者检测不合格率远远低于初次献血者,抗-HIV检测女性酶免检测阳性率高于男性,但确认阳性率男性明显高于女性。因此应提高献血前的征询技巧,重视献血者的招募环节,重点加强初次献血者献血前的征询和评估,加强无偿献血知识的宣传,巩固和发展固定无偿献血者队伍,大力普及NAT检测技术应用于血液筛查,将有效地提高血液安全。

献血者ELISA检测为灰区标本的确证试验与核酸检测情况分析

目的对献血者血样"灰区"标本进行确证试验及核酸检测,探讨如何设置"灰区"。方法对本中心2011-2013年无偿献血者血液标本进行HBs Ag、抗-HCV、抗-HIV、梅毒抗体常规酶免检测,对Cut off值为0.5≤S/CO<1的标本进行统计分析,核酸检测和确证试验。结果对随机选取的部分"灰区"标本,进行NAT和确证试验的结果表明,HBs Ag、抗-HCV、梅毒抗体的"灰区"标本均有一定比例的确证试验及核酸检测阳性。所有抗-HIV"灰区"标本的确认试验及NAT均为阴性。结论 HBs Ag、抗-HCV、梅毒抗体进行"灰区"设置,可以提高血液安全;抗-HIV设置"灰区",则会造成血液浪费。

256例ELISA筛查无反应性/核酸检测反应性标本的确认分析

目的对ELISA筛查无反应性而核酸检测反应性(ELISA-/NAT+)标本进行结果确认及部分献血者追踪随访分析,以明确真正感染状态,给予献血者较明确的解答。方法对2010年6月-2015年7月间,常规血液筛查为ELISA-/NAT+的256份标本进行HBs Ag、抗-HBs和抗-HBc化学发光法检测,HBV DNA/HCV RNA/HIV RNA定量检测,对定量检测阳性、化学发光法检测无反应性献血者进行追踪随访。结果在256例ELISA-/NAT+献血者标本中,确认248例为HBV感染者,4例窗口期HIV感染者,1例窗口期HCV感染者,3例假阳性。在248例HBV感染者中,201例确认为隐匿性HBV感染者,22例为窗口期HBV感染者;25例为慢性乙肝病毒感染、感染恢复期或病毒携带者。确认结果回告给献血者,并告知处理办法,得到了满意的结果。结论核酸检测在血站的运用检出的ELISA-/NAT+献血者中,绝大部分是HBV感染,其中尤以隐匿性乙肝感染为主。

1种血液核酸筛查系统的应用评价

目的依据常规检测结果与确认结果的符合率、有效拆分率(拆分阳性数占总混样阳性数的比率)、"假阳性"率(拆分阴性数占总混样数的比率),对COBASs201核酸检测系统进行应用评价。方法对酶免分析(EIA)阴性、核酸检测阳性献血者进行确认和随防,观察实验室常规检测结果与确认结果的符合率;计算试验的有效拆分率及"假阳性"率。结果应用罗氏COBASs201系统,采用6混样(pool)检测,阳性pool再进行拆分检测的模式,常规检测EIA阴性标本115 373份,总pool数为19 356个,阳性pool数为166个,检出104份核酸阳性标本,有效拆分率为62.7%,"假阳性"率为0.32%。经确认及献血者追踪,"窗口期"HBV感染者11例;隐匿性HBV感染者91例;"窗口期"HCV感染者1例;"窗口期"HIV感染者1例,实验室常规检测结果与确认结果的符合率为100%。结论罗氏COBASs201血液核酸检测系统在本实验室运行良好,检测结果可靠。

2003-2013年中国南京地区无偿献血人群HIV感染情况分析

本研究分析2003-2013年南京地区无偿献血人群HIV感染情况,了解HIV抗体阳性和/或HIV-RNA阳性的无偿献血者人群特征,为制定无偿献血招募策略提供依据。无偿献血者全血标本和机采血小板全血标本经实验室ELISA复检2遍,2010年6月以后ELISA呈阴性或单边待查标本进行NAT检测。凡是HIV有反应性标本均送往南京市疾病预防控制中心进行确认,其中有1例酶免双边阳性且HIV-RNA有反应性被判为不确定;另1例酶免双边阴性且HIV-RNA有反应性标本送往江苏省疾病预防控制中心做核酸定量检测判为HIV-RNA阳性;选择2003-2013年间南京地区无偿献血者HIV筛查结果进行统计分析。结果 2003-2013年641401例无偿献血者中检出的57例HIV抗体阳性(都是HIV-1型),总阳性率为8.89/10万,2010年起HIV阳性率呈明显上升趋势(P<0.01),后稳定至2012年,阳性率均为15.43/10万,2013年阳性率为10.03/10万。阳性例数中男女比例为13.25∶1,男性年龄在18-30岁占56.14%,31-40岁占31.58%;首次献血者46例,占80.70%;再次献血者11例,占19.30%.街头流动点献血者HIV阳性占80.70%,阳性率11.88/10万,计划组织献血者HIV阳性占8.78%,阳性率2.33/10万,不同献血次数和不同献血方式献血人群HIV抗体阳性率的差异有统计学意义(P<0.01)。结论结合南京地区无偿献血人群HIV抗体阳性现状,HIV阳性已偏向高学历青壮年男性的首次献血人群发展,提示应坚持从低危人群中招募献血者的原则,普及无偿献血及防艾滋病相关知识的宣传教育,加强街头流动献血点献血前健康询问工作,建立联网数据库等来确保血液安全。

南京地区无偿献血者梅毒感染趋势调查

目的探讨南京地区2007-2011年无偿献血者不同性别、年龄和职业的梅毒感染者的分布和趋势。方法对用两种不同厂家的TP—ELISA试剂检测的无偿献血者血液标本的结果进行回顾性调查研究，对不同年份、年龄、职业和性别的无偿献血者的梅毒抗体阳性率进行分析。结果南京地区325226人份无偿献血者血液标本的梅毒抗体阳性率为0．42％。其中女性（0．49％）高于男性（0．37％）；小于30岁年龄组的梅毒抗体阳性率为0．26％，远远低于大于30岁年龄组的1．08％；学生的梅毒抗体阳性率为0．14％。结论南京地区无偿献血人群中的梅毒阳性率呈逐年持续增长趋势；为保障临床用血的安全性与可持续性，学生、军人及其他小于30岁的公民应为献血招募的主要对象。

血液HIV、HBV和HCV筛查策略的探讨

目的比较2种ELISA试剂加1种NAT试剂与1种ELISA试剂加1种NAT试剂筛查血液HBV、HCV、HIV的实验效果。方法以126 457(人)份献血者标本为检测对象,采用A、B 2种国产ELISA试剂平行检测其抗-HIV-1/2和抗-HCV,A、C 2种国产的ELISA试剂平行检测HBs Ag,以1种进口的NAT检测系统及配套试剂检测HBV DNA、HIV RNA和HCV RNA。对ELISA单试剂反应性、NAT阴性的标本做血清学确证试验,阳性者给予追踪随访。结果在本组献血者标本中共检出ELISA单试剂反应性、NAT阴性标本的比例为2.78‰(352/126 457),血清学确证试验阳性率0.13‰(17/126 457),其中抗-HCV:A试剂反应性79例,确证试验(RIBA)阳性1例,随访3个月后仍为阳性;B试剂反应性36例,RIBA阳性4例,随访3个月后,4例中RIBA试验1例转为阴性,1例转为不确定,2例仍为阳性。HBs Ag:A试剂反应性比例为0.88‰(112/126 457),确证试验(中和试验)阳性率0.09‰(11/126 457),有8例实现成功随访,3个月后2例转为阴性,1例转为A和C双试剂反应性,但NAT阴性、中和试验阳性,5例仍为A试剂反应性及中和试验阳性、但4例NAT转为阳性;C试剂反应性比例0.03‰(37/126 457),中和试验阳性率0.01‰(1/126 457),3个月后随访仍为阳性。抗-HIV-1/2:ELISA单试剂反应性、NAT阴性比例为0.69‰(88/126457),确证试验(WB)均为阴性。HBs Ag ELISA A试剂反应性、NAT阳性比例0.04‰(5/126 457);未检出抗-HIV-1/2、抗-HCV ELISA单试剂反应性伴NAT阳性标本。结论 1种ELISA试剂加1种NAT试剂的血液筛查模式,其HCV和HBV的残余风险高于2种ELISA试剂加1种NAT试剂,而2种试剂模式检测HIV的残余风险没有差别。

江苏地区HBsAg-/HBV DNA+献血者血清学和分子生物学特点分析

目的了解江苏地区HBs Ag-/HBV DNA+献血者感染的HBV血清学及其HBV DNA S区分子生物学特点。方法选取2013年度常规初筛HBs Ag阴性、NAT阳性标本,经化学免疫发光法检测HBV感染的血清学指标,确认HBs Ag-/HBV DNA+标本48例;采用巢式PCR扩增HBV DNA S区,对测序结果进行基因型、血清型及其突变分析;用SPSS 11.0软件比较HBV基因型和血清型的分布,并分析献血者感染的HBV基因型、血清学和病毒特征之间的关系。结果江苏地区HBs Ag-献血人群HBV DNA+感染率为0.6‰。48例标本血清病毒载量<20 IU/m L-2 510 IU/m L。43例标本成功扩增出HBV S区基因,根据测序结果分析共有B型21例、C型19例和D型2例,未能定型1例;其血清型共3种包括:19例adr;23例adw(adw2,21;adw3,2);1例ayr。献血者HBV血清学特征、年龄、性别、ALT值以及病毒载量与基因型均之间均无相关性。8例(18.6%)标本发生突变,其HBV"a"决定簇的突变位于Q111R/H,S117C,G119R,T126M,Q129L/H/P,G130R,N133R,F134L,C147Y。结论江苏地区HBs Ag-/HBV DNA+献血者感染的HBV多为低病毒载量的隐匿性感染,其基因型以B型为主,其次是C型;adw为主要血清型。HBV S区的突变与HBs Ag-/HBV DNA+或OBI之间的关系有待进一步调查。

ALT异常献血者隐匿性丙型肝炎病毒感染筛查

目的了解献血者中隐匿性丙型肝炎病毒感染（OCI）情况；ALT是否对OCI献血者有筛查作用。方法从2012年9～12月血液常规筛查单纯ALT异常（ALT〉40U／L，核酸检测阴性）献血者血样中随机抽取其中113例（女性7名）作为实验组，并抽取同样数量的合格献血者做对照组。用Ficoll^R分离其外周血单核细胞（PBMCs），Trazol^R提取总RNA，逆转录一套式聚合酶链反应（RT-Nested PCR）扩增检测PBMCs中的HCVRNA。结果实验组中共检出9例（7．96％）PBMCs HCV RNA阳性，其中女性3例，男性6例；对照组未检出。结论ALT异常献血者中存在隐匿性丙型肝炎病毒感染，且女性高于男性，ALT对OCI献血者的筛查有一定意义。

血液混样核酸筛查与酶免筛查的最佳工作流程探讨

目的建立适合血液紧缺情况下,全血标本及血小板标本的常规酶免检测加混样核酸检测的最佳工作流程。方法对全血标本先行2遍酶免(EIA)检测,将检测合格的标本进行混样核酸检测(MP-6-NAT或MP-8-NAT);将EIA单试剂有反应性待复试标本双孔复试与混样核酸检测同时进行;血小板标本进行EIA及MP-NAT平行检测。结果在34 725人份全血核酸检测标本中,共34 413人份为2遍EIA检测均合格标本,检出35例NAT反应性,核酸检出率为1.0‰;312份EIA待复试标本,检出1例NAT反应性,核酸检出率为3.2‰;在3 449个血小板标本中检出2例NAT反应性,核酸检出率为0.58‰。结论全血EIA待复试标本及血小板标本的核酸阳性检出率均较低,全血待复试标本、血小板标本同时进行EIA及MP-NAT检测,可提高检测时效。

国内常用7家HBsAg酶免检测试剂盒灰区临界值的确定

目的采用约登指数(Youden index)对国内常用HBsAg ELISA血液筛查试剂的阳性判定值进行验证,探讨其"灰区"设置的必要性及设定范围。方法利用SPSS软件对国家卫计委临床检验中心的"血液筛查试剂多中心评估项目"数据进行统计分析。计算在不同S/CO值下试剂的灵敏度、特异性及约登指数,约登指数=(灵敏度+特异性)-1,以S/CO值为横坐标,约登指数为纵坐标,绘制曲线,观察每种试剂在最大约登指数下的S/CO值。结果代码为23003、23081、23043、23001的国产试剂,在S/CO值为0.2-0.4时,其约登指数最大;代码为23021、23089、23107的进口试剂,约登指数最大时的S/CO值为0.5-0.7。结论被评估的7家HBsAg酶免筛查试剂盒均有必要设置"灰区";其阳性判定值设定为国产试剂S/CO≥0.3、进口试剂S/CO≥0.6为宜。

ELISA法检测抗-HCV灰区设置探讨

目的探讨ELISA法检测抗-HCV灰区的设置。方法对本中心33份ELISA法检测"灰区"标本进行重组免疫印迹试验(RIBA)。结果本中心为最大程度的保障血液安全,将灰区范围设置在Cut off值以下50%范围。在33份样本中,位于Cut off值以下10%～20%范围内,通过RIBA确认方法检测出"不确定性"1例。结论证实"灰区"范围内的标本很有可能还存在病毒复制,有一定的传染性。