超声微泡介导质粒转染对人肝癌HepG2细胞迁移、侵袭及克隆能力的影响

目的探讨超声微泡造影剂介导miRNA质粒转染人肝癌HepG2细胞后迁移、侵袭及克隆能力的改变。方法在前期实验所筛选的最佳超声微泡转染条件下,转染目的基因反义miR-21/221、miR-199a进入人肝癌HepG2细胞,划痕实验、Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆能力。结果转染目的质粒后,细胞的迁移、侵袭能力及克隆能力与对照组比较均显著受到抑制(P<0.05),其中以miR-199a质粒组的抑制效果最佳(相对细胞迁移率31.05%;平均视野侵袭细胞数38.67±4.51;克隆数105.67±5.86),与其它目的质粒组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论通过分析miRNAs对人肝癌HepG2细胞部分细胞功能的影响,为肝癌的基因治疗提供新的靶点及思路。

超声微泡介导miR-181c-shRNA质粒转染对人肝癌HepG2细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的探讨miR-181c表达与肝细胞肝癌(HCC)患者预后的相关性及超声微泡介导miR-181c干扰质粒(miR-181c-shRNA)转染对人肝癌HepG2细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法下载癌症基因组图谱(TCGA)中HCC患者数据集,分析miR-181c表达与HCC患者生存时间及预后的关系,利用前期实验筛选的最优超声转染条件介导miR-181c-shRNA质粒转染人肝癌HepG2细胞,实时荧光定量PCR(qPCR)检测转染后细胞miR-181c的表达情况,并检测沉默miR-181c表达后细胞增殖、周期及凋亡情况。结果生存分析结果显示,miR-181c高表达患者的无病生存期较低表达患者明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),而总生存期相比较差异无统计学意义(P>0.05);Cox比例风险模型提示miR-181c表达是HCC的独立预后因素(P<0.05);转染miR-181c-shRNA质粒后细胞的miR-181c表达下调,人肝癌HepG2细胞的增殖受到抑制、周期受到阻滞(P<0.05),但对凋亡无明显影响。结论miR-181c表达可作为HCC的独立预后因素,超声微泡介导miR-181c-shRNA转染人肝癌HepG2细胞后,miR-181c表达下调,细胞增殖受到抑制、周期发生阻滞,但对凋亡无明显影响,本研究有望为HCC的基因治疗提供新的靶点。