动物体内活性氧、氧化应激与细胞凋亡以及抗氧化剂研究进展

氧化应激为机体内活性氧的产生与抗氧化系统之间平衡失调,造成体内生物大分子(脂质、蛋白质以及DNA)损伤,导致细胞凋亡,从而诱发各种疾病的发生。抗氧化剂能有效调控机体的氧化应激与细胞凋亡,保障机体细胞内外环境的稳定和生理机能正常。氧化应激在高度集约化的现代养殖业中的危害已大量显现,减少或缓解畜禽的氧化应激已成为现代养殖业的重大课题。深入开展氧化应激与细胞凋亡以及新抗氧化剂的相关研究,对促进动物健康养殖和提高畜产品质量具有重要意义。笔者等在概述有关氧化应激与细胞凋亡的产生、反馈机制及其信号通道的基础上,综述了抗氧化剂应用的最新研究进展。

桦木酸对地塞米松致氧化应激小鼠血清指标的影响

本试验旨在研究桦木酸(BA)对地塞米松(Dex)诱导氧化应激小鼠血清指标的影响。将40只健康雄性昆明小鼠随机分为5组,即对照(NC)组、Dex组、0.25 mg/kg BA组、0.50 mg/kg BA组、1.00 mg/kg BA组,每组8只。NC组和Dex组灌服1%的可溶性淀粉,其余各组灌服混悬于1%可溶性淀粉溶液中不同剂量的BA,连续灌服14 d后,除NC组注射生理盐水外,其余4组均腹腔注射25 mg/kg Dex诱导氧化应激模型。15 h后,眼眶采血,收集血清。检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)活性,总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、总胆红素(T-Bil)、钙离子(Ca^(2+))、细胞色素C(CytC)含量,总抗氧化能力(T-AOC)、抑制羟自由基能力、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量。结果显示:BA预处理后,能够显著或极显著降低Dex诱导氧化应激小鼠血清ALP活性及TG、T-Bil、CytC含量(P<0.05或P<0.01),且呈量效关系;低剂量BA(0.25、0.50 mg/kg)显著或极显著降低了血清MDA含量(P<0.01或P<0.05),但高剂量BA(1.00 mg/kg)反而极显著升高了其含量(P<0.01);能够显著或极显著升高血清Ca2+和GSH含量、SOD的活性、T-AOC和抑制羟自由基能力(P<0.05或P<0.01),并呈量效关系;降低了血清ALT和AST活性,但影响不显著(P>0.05),对血清TP和ALB含量无显著影响(P>0.05)。由此可见,BA能够改善Dex引起的小鼠血清指标的变化,对Dex诱导的氧化损伤有预防性的保护作用。

猪肝微粒体的制备与活性测定

为了获得高活性的猪肝微粒体用于药物代谢研究,试验采用钙沉淀法制备猪肝微粒体,考马斯亮蓝法测定肝微粒体蛋白浓度,可见光-紫外分光光度法测定肝微粒体细胞色素P450酶系含量。结果表明:猪肝微粒体的蛋白含量为(10.653±0.256)mg/g,细胞色素P450含量为(0.903±0.021)nmol/mg,细胞色素b5含量为(0.429±0.038)nmol/mg,氨基比林-N-脱甲基酶活性为(0.226±0.010)μmol/(min.mg),红霉素-N-脱甲基酶活性为(0.055±0.008)μmol/(min.mg),NADPH-细胞色素C还原酶活性为(4.658±1.170)nmol/(min.mg)。说明钙沉淀法制备的猪肝微粒体具有较好的活性,所用的可见光-紫外分光光度法灵敏、可靠,重复性较好。

HPLC测定大鼠肝微粒体温孵体系中二氢血根碱的含量

建立了测定大鼠肝微粒体温孵体系中血根碱代谢产物二氢血根碱含量的高效液相色谱法。色谱柱为Shimadzu VP-ODS Shim-pack(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为水∶乙腈(37∶63,V/V);流速1 mL/min;柱温35℃;检测波长285 nm;进样量10μL。结果显示50 nmol/L和1000 nmol/L二氢血根碱标准溶液的方法回收率分别为101.72%和98.82%;50、100、500 nmol/L标准溶液的日内RSD分别为2.26%、2.57%和3.02%,日间RSD分别为6.21%、4.33%和3.95%;二氢血根碱在25～1000 nmol/L内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9996)。本分析方法快速简便,灵敏度高,重现性好,符合方法学验证的要求,可满足二氢血根碱在体外代谢中的定量研究。

高效液相色谱法测定大鼠肝微粒体温孵体系中血根碱的含量

本研究建立了大鼠肝微粒体温孵体系中血根碱的高效液相色谱含量测定方法。采用Shimadzu VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液(30:70,V/V)为流动相,以1 mL/min流速进样量10μL在284 nm波长下进行检测,结果显示500和1000 nmol/L血根碱对照品溶液的方法回收率分别为98.3%和98.9%;250、500、1000 nmol/L标准溶液的日内RSD分别为3.76%、2.88%和3.56%,日间RSD分别为5.19%、4.96%和3.84%;血根碱的摩尔浓度在250～10000 nmol/L内与峰面积呈良好的线性关系,表明该方法简单、快速、灵敏度高、特异性好,可用于血根碱在肝微粒体温孵体系中的含量测定。

桦木酸对Dex致小鼠氧化损伤的保护作用

为了研究桦木酸(betulinic acid,BA)对地塞米松(dexamethasone,Dex)致氧化损伤的保护作用。将35只健康雄性KM小鼠随机分为5组,即对照组、Dex组、BA低、中、高剂量(0.25、0.5、1 mg/kg)+Dex组。对照组和Dex组灌服1%的可溶性淀粉,其余各组灌服混悬于可溶性淀粉中不同剂量的BA,1次/d,连续14d后,除对照组注射生理盐水外,其余4组均腹腔注射地塞米松(25 mg/kg)诱导氧化应激模型。15h后,处死小鼠,收集淋巴器官和肝脏。检测小鼠淋巴细胞的活性以及活性氧(ROS)水平,肝脏、脾脏和胸腺的超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果显示,BA预处理后,能显著降低Dex诱导氧化损伤小鼠ROS水平和MDA含量,提高脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞的活性,增强小鼠SOD和GSH-Px活性,且呈量效关系。表明BA能加速细胞清除活性氧自由基,增强小鼠抵抗氧化损伤的能力,对Dex诱导的氧化损伤有一定的保护作用。

桦木酸的药理作用研究进展

桦木酸(betulinic acid,BA)属于羽扇豆烷型五环三萜类物质,广泛分布于多种植物中,具有抗肿瘤、抗艾滋病、免疫调节、抗氧化应激、抗菌、抗炎以及抗寄生虫等广泛的药理作用。由于BA具有优越的抗肿瘤和抗艾滋病活性,在恶性肿瘤和艾滋病等威胁人类健康的疾病防治方面具有广阔的应用前景。BA还能提高机体的抗氧化能力、增强免疫力,在机体的抗氧化损伤和免疫调节过程中发挥着重要作用。就BA的药理作用进行详细综述,为BA的研究和开发利用提供参考。

桦木酸对小鼠酒精性肝损伤的保护作用

目的研究桦木酸(betulinic acid,BA)对酒精性肝损伤的保护作用。方法 56只健康雄性KM小鼠随机分为:正常对照(NC),酒精模型(MC),BA低、中、高剂量(L-BA,M-BA,H-BA,按0.25、0.5、1mg/kg b w给与),BA低、中、高剂量与酒精联合(L-BAA,M-BAA,H-BAA)8组;NC、MC组灌胃1%的可溶性淀粉,其余各组灌胃混悬于可溶性淀粉中不同剂量的BA,1/d,连续14d后,除NC组,L-BA,M-BA,H-BA组灌胃生理盐水外,其余4组均按10 ml/kg灌胃50%酒精诱发酒精性肝损伤模型。测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)的活性,甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)的含量;肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性以及谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量,并观察肝脏病理改变。结果 BA预处理后,能显著降低酒精诱导肝损伤小鼠血清AST、ALT、ALP活性及TC和TG含量,提高ALB、A/G水平,增强SOD、CAT、和GSH-Px活性及GSH含量,降低MDA含量,明显减轻肝组织损伤程度,且呈量效关系。结论 BA具有抗氧化损伤的能力,缓解酒精引起的脂质过氧化,对酒精诱导肝损伤有预防性的保护作用。