生物化学与分子生物学一流本科课程建设的实践与探索

目的:在生物化学与分子生物学一流本科课程建设中培养学生综合能力、民族自信心和社会责任感。方法:选取护理专业2021年级1-3班学生共80例,按教学模式不同分为对照组和观察组各40例,对照组采用传统授课模式;观察组采用翻转课堂结合线上、线下混合式教学模式。观察组课前发布预习任务单,督促自主学习。课中利用信息化教学手段,采用多样化的教学方法吸引学生注意力,将思政教育融于教学过程,强化过程性考核。课后答疑解惑,在线测试,巩固教学效果。结果:问卷调查显示,观察组在自主学习能力36例(90.0%)、文献检索归纳33例(82.5%)、语言表达能力35例(87.5%)、团队合作能力36例(90.0%)、学以致用能力36例(90.0%)、思想教育提升38例(95.0%)等方面提高高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:采用翻转课堂结合线上、线下混合式教学能有效调动学生的学习积极性,提高学生的综合能力,激发学生的爱国情怀。

切割海马伞海马中56kD差异蛋白的质谱分析

目的:探讨切割海马伞海马中具有生物活性的56kD差异蛋白的组成成份及其功能。方法:切割SD大鼠海马伞后14d海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE),应用电喷雾质谱分析、蛋白质数据库和文献分析等方法对56kD差异蛋白进行检测和功能分析。结果:质谱分析找到了33组肽段,这些蛋白按照其功能可以分为:细胞骨架蛋白、参与代谢的酶、信号传递、蛋白降解、核酸水解、氧化应激、神经递质运输、突触形成、功能未知蛋白。结论:切割海马伞海马中56kD差异蛋白中含有功能涉及神经干细胞迁移、分化的蛋白质。

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳在大鼠海马组织蛋白分离中的应用

目的 :探索应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离大鼠海马组织蛋白的最佳条件。方法 :选用不同 p H的正极缓冲液和样品蛋白上样量 ,应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离大鼠海马组织蛋白质。结果 :在其它条件不变的情况下 ,p H9.0的正极电泳缓冲液以及 40～ 6 0 μg/孔样品蛋白上样量时 ,可得到分辨率高、条带多而清晰的电泳图谱。结论 :应用 p H9.0的正极电泳缓冲液和样品上样量为 40～ 6 0 μg/孔时 ,进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,可成功地分离大鼠海马组织蛋白。

磷酸化细胞外信号调节激酶在海马提取液诱导神经干细胞向神经元分化过程中的表达

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路在海马提取液诱导神经干细胞向神经元分化过程中的作用。方法切割12只SD大鼠右侧穹隆海马伞,14d后分别取切割侧和正常侧海马制成匀浆,离心收集上清液,蛋白定量后备用。将获取的鼠胚海马源性神经干细胞培养在24孔板中,分成3组,每组8孔,于无血清条件下,切割组加切割侧海马提取液;正常组加正常侧海马提取液;对照组不加上述海马提取液。培养14d后进行微管相关蛋白2(MAP-2)与p-ERK的免疫荧光双标检测。结果MAP-2阳性神经元数量、胞体面积和细胞周长在切割组、正常组和对照组中依次减少,3组之间均有显著性差异。MAP-2、p-ERK免疫荧光双标细胞数量在切割组、正常组、对照组中也依次下降,但双标记细胞数占MAP-2阳性神经元数的百分比却反而依次增加,两者3组之间均有显著性差异,双标细胞大多为欠成熟细胞。结论切割穹隆海马伞侧海马提取液较正常海马提取液有明显促使神经干细胞向成熟神经元分化的作用;形态学初步证实ERK信号转导通路可能与神经干细胞向神经元分化有关。

切割穹隆海马伞后大鼠海马中83ku差异蛋白的质谱分析

目的:探讨切割穹隆海马伞海马中具有诱导神经干细胞向神经元分化生物活性的83 ku差异蛋白的组成成分及其功能。方法:切割SD大鼠穹隆海马伞后14 d海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native PAGE),应用电喷雾质谱分析、蛋白质数据库和文献分析等方法对83 ku差异蛋白进行检测和功能分析。结果:质谱分析找到了17组肽段,这些蛋白按照其功能可以分为:细胞骨架蛋白、参与代谢的酶、信号传递、蛋白降解、氧化应激、神经递质运输、突触形成、功能未知蛋白。结论:切割穹隆海马伞海马83 ku差异蛋白可以通过参与Rho信号通路,调控神经干细胞向神经元分化。

海马中56 kD蛋白诱导人神经干细胞向神经元分化的作用

在已证明切割海马伞海马中差异表达的56kD蛋白具有诱导神经干细胞迁移作用的基础上,进一步探讨其诱导神经干细胞向神经元和AChE阳性神经元分化的作用。取切割SD大鼠海马伞后14d及正常海马组织的匀浆进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)。将用无血清培养技术获取的人胚神经干细胞球分别与切割海马伞后14d和正常海马56kD差异蛋白的胶条及空白对照胶条共培养,在倒置显微镜下观察神经干细胞球中细胞的迁移和分化情况,于第21d分别应用MAP-2免疫荧光和AChE组织化学方法检测人神经干细胞分化为神经元和AChE阳性神经元的情况,并进行神经元的计数、细胞面积、细胞周长的图像处理和统计学分析。结果显示,分化的MAP-2阳性神经元的数量、细胞面积及细胞周长三项指标切割组最好,正常组次之,而空白对照组最差;三组AChE组织化学染色均为阴性结果。上述结果提示切割海马伞后海马中差异表达的56kD蛋白具有诱导神经干细胞向MAP-2阳性神经元分化的作用,但不能诱导神经干细胞向AChE阳性神经元分化。

海马中56kD蛋白诱导人神经干细胞迁移的作用

为了探讨切割海马伞后的海马和正常海马在蛋白表达方面的差异,获取海马中具有生物活性的特异蛋白,并观察其对人胚神经干细胞迁移的影响,取切割SD大鼠海马伞后10、14、20d及正常海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE)。将用无血清培养技术获取的人胚神经干细胞球分别与切割海马伞后14d海马和正常海马的56kD差异蛋白胶条及空白对照胶条共培养,观察神经干细胞球中神经干细胞迁移情况,第3d时计数朝胶条方向1/4扇区内的迁出细胞数。结果显示,切割后各天组和正常组比较见多条差异蛋白条带,其中56kD差异蛋白的密度积分正常组最低,10d组和20d组较高,14d组最高。神经干细胞球中向56kD差异蛋白胶条方向迁移的细胞数在切割组最多,正常组次之,对照组最少。提示切割海马伞后的海马与正常海马间存在多种差异蛋白,其中56kD蛋白在切割海马伞后14d表达量最高,并具有诱导神经干细胞迁移的作用。

艾迪注射液对肺癌细胞A549放射增敏作用的实验研究

目的研究艾迪注射液对人肺腺癌细A549放射增敏作用及机制。方法(1)MTT法测定药物对细胞的抑制作用,计算半数抑制浓度IC50。(2)应用集落形成法观察药物对细胞的放射增敏作用。(3)流式细胞仪分析药物对细胞周期分布、凋亡的影响。结果药物作用48小时后,细胞生长受到抑制,且细胞抑制率随药物浓度的升高而增加。IC50为16.04 mg/mL。加药照射组与单纯照射组比较,细胞存活率下降,药物有放射增敏作用,随药物作用时间的延长放射增敏作用增强。单纯照射组、加药24小时、48小时后照射组三组D0值依次为2.13 Gy、2.04 Gy、1.64 Gy,Dq值依次为2.88 Gy、1.68 Gy、1.51 Gy,加药24小时及48小时后照射组放射增敏比SERD0分别为1.04、1.3,SERDq分别为1.71、1.91。流式细胞仪检测药物作用后G2/M期细胞增加,细胞凋亡率升高,药物作用时间延长以上变化更显著。结论艾迪注射液对肺癌细胞A549有抑制作用及放射增敏作用,其放射增敏作用机制可能为抑制细胞亚致死损伤修复,阻滞细胞于G2/M期,诱导细胞凋亡。

神经生长因子对穹窿海马伞切割后海马自体神经干细胞增殖和向神经元分化的影响

目的探讨切割穹窿海马伞及脑室给予神经生长因子(NGF)后,对大鼠海马自体神经干细胞增殖和分化为神经元的影响。方法12只SD大鼠,随机分成给药组和对照组,每组6只,切割右侧穹窿海马伞,两组切割后即时及第2d、4d向侧脑室分别注射NGF和人工脑脊液,并在术后第3～7d每日腹腔注射2次BrdU。于术后28d灌注取脑、冷冻切片,行BrdU/NF-200免疫荧光双标检测。结果海马齿状回内BrdU阳性细胞数,给药组和对照组切割侧明显多于正常侧,给药组切割侧和正常侧分别多于对照组切割侧和正常侧;海马齿状回内的BrdU/NF-200双标神经元数,给药组切割侧最多,给药组正常侧和对照组切割侧较少,而对照组正常侧则无。结论切割穹窿海马伞后,可致大鼠海马齿状回自体神经干细胞增殖加快并向神经元分化,脑室施加NGF可促进其增殖和分化。

NOV蛋白在切割海马伞大鼠海马中表达的变化

通过切割右侧海马伞制备大鼠海马伞损伤模型,应用Westernblotting、免疫组织化学技术,观察切割海马伞后不同时程海马中肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)蛋白表达的变化,并对结果进行图像处理和统计学分析。Westernblotting结果显示,NOV蛋白在切割海马伞后3d表达开始上升,14d达高峰后缓慢下降。切割海马伞后14d切割侧和正常侧相比较,海马CA1-CA3区的锥体细胞层及齿状回颗粒层NOV阳性细胞数目无显著性差异(P>0.05),但切割侧NOV阳性细胞明显比正常侧深染,两侧比较平均灰度值有显著性差异(P<0.01)。结合本课题组以往的工作,本研究结果提示,切割海马伞后海马中高表达的NOV蛋白可能参与了诱导神经干细胞迁移和向神经元分化的过程。

穹窿海马伞切割大鼠海马内Brn-4 mRNA的表达变化

目的探讨切割穹窿海马伞大鼠海马与正常海马内Brn-4 mRNA表达的差异。方法42只SD大鼠随机分成正常对照组和切割海马伞后1、3、7、14、21及28 d组。取各组大鼠的海马组织,提取总RNA,采用半定量RT-PCR法分析穹窿海马伞切割后海马内Brn-4 mRNA表达水平的变化。结果海马内Brn-4 mRNA的表达量在切割后第3 d开始升高,14 d达到最高水平,随后下降,28 d左右恢复至正常水平。结论切割穹窿海马伞后海马内Brn-4 mRNA表达明显上调,可能与促进神经干细胞更多地向神经元和AChE阳性神经元分化有关。

PEBP在切割穹窿海马伞大鼠海马中的表达变化

切割大鼠右侧穹窿海马伞,应用Western blot、免疫组化技术,观察切割后海马中磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidyle-thanolamine binding protein,PEBP)的表达的时空变化。Western blot结果显示:PEBP在切割后3 d表达开始上升,7 d达最高水平,随后缓慢下降,28 d时降至正常。免疫组化结果显示:术后各时间点切割侧海马CA1～CA3区的锥体细胞层和齿状回颗粒层的PEBP阳性细胞数与正常侧相比无显著性差异(P>0.05),但切割侧PEBP阳性细胞染色加深,7 d时最为明显,两侧比较灰度值有显著性差异(P<0.01)。切割侧齿状回门区和颗粒下层中可见较多深染的PEBP阳性细胞,其细胞数和灰度值与正常侧相比均有显著性差异(P<0.05)。结合本课题组以往的工作,本结果提示切割穹窿海马伞后PEBP的高表达可能与海马神经再生有关。

翻转课堂在“创新训练计划”中的实践

医学生"创新训练计划"是培养高素质人才的重要举措。为了锻炼学生科研能力和增强学生创新能力,加强学生自主化和个性化学习,采用翻转课堂这一新兴的教学模式实施大学生"创新训练计划"效果显著,培养了医学生的创新意识和创新思维,为高校教育改革提供了借鉴。

穹窿海马伞切割后海马内NSCs的增殖和向神经元的分化

目的观察切割穹窿海马伞侧和非切割侧大鼠海马内自体神经干细胞的增殖和向神经元分化的情况。方法切割SD大鼠右侧穹窿海马伞,术后2 d腹腔注射BrdU,连续5d,于术后28 d取脑冰冻切片,进行BrdU/NF-200免疫荧光双标检测。结果切割穹窿海马伞侧海马内的BrdU免疫荧光阳性细胞明显多于非切割侧,且发现有BrdU/NF-200双标神经元,而非切割侧未见到BrdU/NF-200双标神经元。结论穹窿海马伞切割后,切割侧海马内自体神经干细胞增殖加快,并可向神经元分化。

核受体相关因子1基因过表达诱导神经干细胞分化为多巴胺能神经元

目的探讨核受体相关因子1(Nurr1)基因对大鼠中脑神经干细胞(NSCs)体外诱导分化为多巴胺能神经元的作用。方法通过基因重组技术构建pEGFP-N1-Nurr1真核表达载体,用电穿孔法将重组质粒转染第3代NSCs,用荧光显微镜观察转染效率,免疫印迹法检测基因表达效果;并对转染后的NSCs进行体外分化培养3周,用免疫荧光双标技术检测酪氨酸羟化酶(TH)和微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达。结果电穿孔法转染NSCs48h后转染效率达35%,1周后免疫印迹法检测到Nurr1蛋白高表达,约为对照组的5倍;Nurr1基因转染的NSCs分化为TH阳性神经元的比率为15.45%,明显高于对照组,而MAP-2阳性神经元数量与对照组相似。结论 Nurr1基因过表达可以诱导NSCs向TH阳性的多巴胺能神经元分化。

切割海马伞大鼠海马中65kD和83kD差异蛋白诱导神经干细胞迁移和向神经元分化的作用

目的：探讨切割海马伞大鼠海马中65 kD、83 kD差异蛋白是否具有诱导神经干细胞迁移和向神经元分化的作用。方法：切割海马伞后的海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,将65 kD、83 kD差异蛋白胶条与大鼠神经干细胞球共培养,计数神经球朝胶条方向1/4扇区内迁移出的细胞数。10 d后行微管相关蛋白2(MAP-2)免疫荧光,计数其中MAP-2阳性神经元数,图像处理其胞体面积和细胞周长。结果：83 kD切割组朝胶条方向迁移的细胞最多,迁移速度最快。其分化的神经元数量多,胞体大、周长长,明显地优于83 kD正常组、65 kD切割组、65 kD正常组和空白对照组。结论：大鼠海马组织中83 kD蛋白具有诱导神经干细胞迁移和向神经元分化的作用。

基于微信平台的延续性护理干预在尿路造口患者中的应用

目的探讨以微信平台为基础的延续性护理对尿路造口患者的影响。方法选取南通大学附属医院泌尿外科2015年1月至2017年12月就诊的行全膀胱切除+腹壁造口术后患者80例,随机分为对照组和观察组各40例,对照组采用传统造口护理方法,观察组住院期间直至出院后运用微信平台实施规范性延续性护理教育,比较2组患者的情绪、自护能力、生活质量及造口并发症。结果观察组患者出院后1、3、6个月SAS评分(51.60±5.34、46.70±5.66、43.35±6.12)和SDS评分(52.78±5.52、47.38±5.82、42.48±6.35)明显低于对照组SAS评分(54.88±4.76、51.68±7.21、49.53±5.79)、SDS评分(55.36±4.82、51.82±6.58、48.82±4.56),差异有统计学意义(P<0.05);观察组的3个月后生活质量水平高于对照组(P<0.05);观察组出院后1、3、6个月造口并发症发生率低于对照组(P<0.05)。结论基于微信平台的延续性护理干预能够提高患者自护能力和生活质量,降低造口并发症发生率,值得临床推广。

海马放射状胶质细胞激活后Rest和Runx1t1基因的表达变化

目的探讨经切割穹隆海马伞侧海马提取液诱导而激活的海马放射状胶质细胞的基因表达变化。方法将分离、纯化后的海马放射状胶质细胞分别加入正常侧和切割穹隆海马伞侧海马提取液,7d后利用免疫荧光法检测两组细胞的数量和生长情况;利用基因芯片分析细胞内基因表达情况;利用实时定量PCR分析神经干细胞向神经元分化的相关基因Rest和Runx1t1的转录情况。结果与正常组相比,切割组放射状胶质细胞的数量明显增多,胞体增大,突起增粗变长。基因芯片结果显示,在所检测的709个基因中,切割组中10个基因表达明显上调,10个基因明显下调;实时定量PCR结果表明,切割组Rest和Runx1t1的转录水平均显著高于正常组(P<0.05)。结论切割穹隆海马伞海马提取液可诱导海马放射状胶质细胞的激活,提高Rest和Runx1t1基因转录水平。

Brn4在神经干细胞向神经元分化中的作用及其机制研究

目的:观察脑因子4(Brn4)对神经干细胞(NSCs)向神经元分化的诱导作用,探讨Brn4促进新生神经元成熟和维持细胞存活的分子机制。方法:应用基因重组技术,构建pLV5-Brn4-GFP慢病毒表达载体,感染NSCs后使外源性Brn4基因稳定高表达。NSCs诱导分化后,应用细胞免疫荧光法检测NSCs分化为微管相关蛋白-2(MAP-2)阳性神经元的情况,应用TUNEL法检测分化细胞的凋亡情况。结果:重组病毒感染NSCs后,Brn4蛋白表达较对照组增高约5倍,同时分化细胞中胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)及其受体GFRα-1和Ret蛋白的相对表达量均明显高于对照组(P﹤0.01)。NSCs分化2周后,Brn4过表达组MAP-2阳性神经元的分化率(65.71±5.18%)明显高于对照组(12.57±1.77%)(P﹤0.01),且细胞胞体较大,突起较丰富。而凋亡细胞的百分率(2.73±0.44%)明显低于对照组(8.39±0.95%,P﹤0.01)。结论:Brn4基因过表达可诱导NSCs向神经元分化,同时通过GDNF信号通路促进新生神经元的发育成熟,并通过抑制细胞凋亡提高细胞存活率。

PD模型大鼠黑质中Nurr1和TH的表达变化及其意义

为探讨孤儿核受体(Nurr1)在多巴胺能神经元损伤修复过程中对特异性表型酪氨酸羟化酶(TH)的影响,本研究用6-羟基多巴胺(6-OHDA)损伤大鼠一侧前脑内侧束(MFB)制备单侧帕金森病(PD)模型,分别应用Western blot和免疫组织化学技术观察不同时间点中脑黑质中Nurr1、TH蛋白表达的变化及其相关性。结果显示,Nurr1蛋白表达在术后1d损伤侧黑质中即明显下降,7d后开始逐渐上升,14d接近正常水平,28d明显升高;TH蛋白表达在术后1d损伤侧黑质中无明显变化,7d开始下降,14d达最低,28d开始上升。上述结果提示,在6-OHDA损伤黑质-纹状体通路后,Nurr1的表达先下降后上升,其表达变化早于TH,可能在PD模型大鼠的损伤修复中发挥重要作用。