以胎儿心脏占位为首发表现的结节性硬化症1例报告并文献复习

目的探讨结节性硬化症的临床特点。方法收集1例结节性硬化症患儿的临床资料,分析其临床特征及基因突变结果。结果患儿,女,36日龄,胎儿及生后超声心动图发现异常回声结节,考虑为多发心脏横纹肌瘤;躯干部及双下肢有多处色素脱失斑;头颅磁共振成像示皮质结节、室管膜下结节和脑白质辐射状迁移线;高通量二代测序发现TSC2基因突变(c.4541-4544 del CAAA),确诊为结节性硬化症。结论基因检测有助于早期确诊结节性硬化症。

细胞外组蛋白通过促进凋亡参与新生大鼠缺氧缺血性脑病损伤过程

目的:研究细胞外组蛋白是否通过促进凋亡参与新生大鼠缺氧缺血性脑病的损伤。方法:将54只7日龄新生SD大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血性脑损伤(HIBD)组和治疗组,每组18只,各组组内再随机分为3个亚组:6 h组、24 h组及72 h组,每亚组6只;采用改良Rice法制备HIBD模型,治疗组予选模前5 min尾静脉注射特异性组蛋白H4中和抗体20 mg/kg。各组大鼠在造模后6 h、24 h和72 h检测血浆中细胞外组蛋白的含量、脑组织病理学及凋亡相关指标。结果:相比于假手术组,HIBD组大鼠脑含水量较高(P<0.05),HE染色显示脑组织结构破坏,尼氏染色显示脑组织损失率增加(P<0.05),血浆细胞外组蛋白含量上升(P<0.05),TUNEL染色显示脑组织凋亡细胞增加(P<0.05),凋亡蛋白cleaved casepase-3表达升高(P<0.05);相比于HIBD组,治疗组大鼠脑含水量减少(P<0.05),HE染色显示脑组织结构破坏减少,尼氏染色显示脑组织损失率减少(P<0.05),血浆细胞外组蛋白含量降低(P<0.05),Tunel染色显示凋亡细胞减少(P<0.05),凋亡蛋白cleaved casepase-3表达下降(P<0.05)。结论:细胞外组蛋白可能是通过促进凋亡,从而参与新生大鼠缺氧缺血性脑病的损伤。

MiR-152对转化生长因子β1诱导的气管上皮细胞向间质细胞转化的影响

目的:研究miR-152在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的气管上皮细胞向间质细胞转化(EMT)中的表达情况,探讨miR-152能否影响EMT的发生。方法:用10ng/mL的TGF-β1诱导人气管上皮16HBE细胞EMT发生,光镜下观察细胞形态变化,qRT-PCR和Westernblot检测细胞中EMT相关标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-cadherin和Vimentin的改变;qRT-PCR检测有或无TGF-β1处理的16HBE细胞中miR-152的表达情况;通过转染miR-152mimics和miR-NC至细胞后,再次检测细胞中EMT标志物的表达情况。结果:与对照组比,TGF-β1处理72h时能引起16HBE细胞发生EMT,细胞形态在72h改变明显,α-SMA和Vimentin表达增加,E-cadherin表达下降(P<0.01);转染miR-152mimics,细胞内miR-152的表达显著增加(P<0.01);与miR-NC组比,转染miR-152过表达后,气管上皮细胞中α-SMA和Vimentin的表达降低(P<0.01),E-cadherin表达增加(P<0.01),EMT受到抑制。结论:TGF-β1能诱导离体培养的气管上皮细胞发生EMT;miR-152可以抑制TGF-β1诱导的气管上皮细胞EMT的发生。

人肠三叶因子重组真核表达载体的构建及在CHO/dhfr-细胞中的稳定表达

目的:构建人肠三叶因子(hITF)重组真核表达载体,并检测其在CHO/dhfr-细胞中的表达。方法:通过重叠延伸PCR法获得hITF cDNA片段,将目的基因插入真核表达载体pIRES/dhfr,得到重组真核表达载体pIRES/h ITF/dhfr;经脂质体介导转染CHO/dhfr-细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的CHO/dhfr-细胞系;用RT-PCR及ELISA法检测hITF的表达。结果:成功构建了重组真核表达载体pIRES/hITF/dhfr,并建立了稳定转染的CHO细胞系,成功地表达了目的基因。结论:成功构建了重组真核表达载体pIRES/hITF/dhfr,并在CHO/dhfr-细胞中分泌表达hITF蛋白,为进一步进行重组hITF的临床前研究奠定良好的实验基础。

肠道急性移植物抗宿主病黏膜通透性与肠黏膜病理改变的相关性研究

目的研究肠道急性移植物抗宿主病(aGVHD)黏膜通透性变化与肠黏膜病理改变以及二者之间的关系。方法32只BALB/C小鼠随机分为4组:单纯照射组(对照组)和3个时段aGVHD组(aGVHD后7、11和15天组),各8只。TBI剂量8.0Gy,剂量率1.0Gy/min。高效液相色谱-蒸发光散射检测器分析(HPLC-ELSD)检测尿液标本中乳果糖(lactulose,L)和甘露醇(mannitol,M)的排出率比值(L/M),评价各组小鼠的肠道通透性;收集空肠组织标本做病理评估。结果肠道aGVHD后7、11和15天组L/M比值均明显高于对照组(P<0.05),分别为0.509±0.353,0.717±0.012,0.762±0.014,0.291±0.053。aGVHD后7、11和15天组aGVHD严重程度评分较对照组显著增加(P<0.05),分别为0.810±0.259,1.940±0.176,2.750±0.267,0.000±0.000。各组L/M与肠道aGVHD严重程度水平呈显著相关(r=0.903,P<0.01)。结论 aGVHD后随着时间延长肠黏膜通透性逐渐增加且肠道aGVHD严重程度评分逐渐增高;aGVHD后肠道通透性与肠道aGVHD严重程度呈显著相关,尿液L/M可作为肠道aGVHD严重程度的无创评估方法。

虚拟解剖结合尸体解剖判定非免疫性胎儿水肿致死1例

1.1简要案情胡某,女,33岁,于孕32+4周时因早产在某医院行剖宫产术。胎儿产后不哭,全身发绀,后经积极治疗无效死亡。委托方委托对患儿的死亡原因进行法医学鉴定。为更好地了解患儿情况,于尸体解剖前行虚拟解剖。1.2病史摘要胡某因“胎儿水肿,胎儿心律失常”行剖宫产术产下一女婴。胎儿产后不哭,全身发绀,心率<100次/min,1分钟Apgar评分1分(心率1分),予气囊加压及气管插管、胸外按压等处理后,5分钟Apgar评分5分(心率2分,肤色2分,呼吸1分),予气管插管进行同步间歇指令通气(synchronized intermittent mandatory ventilation,SIMV),血氧饱和度约为60%,心率约为250次/min。由于血氧饱和度一直较低,球囊加压给氧为30%~50%。上述措施抢救无效,患儿于出生后4 h死亡。

肝素对高氧致支气管肺发育不良新生鼠血清及肺组织中性粒细胞诱捕网的影响

目的探讨肝素对支气管肺发育不良(BPD)新生鼠血清及肺组织中性粒细胞诱捕网(NETs)的影响。方法将新生SD大鼠随机分为空气组、高氧组、肝素组、对照组,每组12只。空气组置于空气中,其他3组置于氧浓度为90%的高氧箱7d建立BPD模型。肝素组于造模开始后,每天腹腔注射低剂量肝素(250U/kg)至造模结束;对照组每天腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。分别在出生后第7、14天,每组各取6只麻醉并采集血液标本及肺组织标本,采用PicoGreen荧光染色法检测血清游离DNA(cf-DNA/NETs)水平,共聚焦显微成像观察肺组织NETs,HE染色观察肺组织形态学并测定肺泡辐射状计数(RAC)和平均内衬间隔(MLI)。结果出生后第7、14天,高氧组、对照组新生鼠血清游离DNA水平较空气组明显升高(均P<0.05),肝素组较高氧组明显降低(P<0.05)。在荧光显微镜下观察,高氧组、对照组肺组织组蛋白、髓过氧化物酶荧光信号范围增加,NETs表达增加;肝素组荧光信号范围减少。与空气组比较,高氧组、对照组新生鼠RAC明显减少,MLI明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.05);与高氧组比较,肝素组RAC明显增加,MLI明显减少,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论高氧致BPD新生鼠血清及肺组织中存在大量NETs,肝素可抑制NETs产生,并改善高氧引起的肺发育受阻。

1例May-Hegglin异常的致病基因研究及家系调查

目的 对1例疑诊May-Hegglin异常(MHA)的患儿进行致病基因分析及家系调查。方法 提取家系成员的外周血基因组DNA,采用全外显子组捕获高通量测序技术,对MHA致病基因非肌性肌球蛋白重链9基因(MYH9)进行测序,采用Sanger测序验证结果,并对致病基因进行家系分析。结果 本家系中MHA患者表现为典型的“血小板减少、巨大血小板、外周血白细胞Dohle样小体”三联征,无感音神经性耳聋、白内障和肾炎症状。先证者MYH9基因编码区存在c.5521G>A(p.Glu1841Lys)错义变异。家系样本验证结果显示,受检者父亲、奶奶样本中也检测到该变异,考虑该变异为致病变异。结论 MYH9基因c.5521G>A(p.Glu1841Lys)错义变异是该家系的遗传学病因。

全身照射后肠黏膜通透性与肠三叶因子mRNA表达的关系

目的探讨全身照射（TBI）对肠道黏膜通透性和肠三叶因子（ITF）mRNA表达的影响以及二者之间的关系。方法32只BALB／c小鼠随机均分为4组：空白对照组和总剂量8．0Gy全身照射后4、8和12d组。TBI剂量8．0Gy，剂量率1．0Gy／min。高效液相色谱一蒸发光散射检测器分析（HPLC-ELSD）检测尿液标本中乳果糖与甘露醇的排出率比值（L／M），评价各组小鼠的肠道通透性；收集空肠组织标本，实时荧光定量PCR检测肠道ITFmRNA表达水平。结果TBI后4、8和12d组L／M比值分别为0．5092±0．0353，0．7174±0．0116和0．7295±0．0063，均明显高于空白对照组（0．2908±0．0533，F=321．47，P〈0．05）。TBI后4、8和12d组ITFmRNA表达水平分别为0．78612±0．1428，0．2521±0．1223，和0．2306±0．0221，均显著低于空白对照组（1．3498±0．0476，F=235．71，P〈0．05）。各TBI组中L／M与肠道ITFmRNA水平呈显著负相关（r=-0．985，P〈0．01）。结论TBI后随着时间延长ITFmRNA表达逐渐下降而肠黏膜通透性逐渐增加，即TBI后ITFmRNA表达与肠道通透性呈显著负相关。ITF在TBI所致肠道黏膜通透性增加中起着保护作用。

一例ATP6V0A2基因变异所致常染色体隐性皮肤松弛症患儿的临床特征及遗传学分析

目的探讨一例ATP6V0A2基因相关常染色体隐性皮肤松弛症(autosomal recessive cutis laxa,ARCL)患儿的临床表现及遗传学特点。方法收集1例ATP6V0A2基因相关ARCL患儿的临床资料,对患儿进行全外显子组测序分析(trio-whole exome sequencing,trio-WES),Sanger测序对可能的变异位点进行验证,并复习文献总结该类疾病的临床表现和遗传学特征。结果患儿5岁2月龄,身高109.5 cm(40%),体重14.2 kg(<3%),眼裂下斜、眼距宽、宽鼻梁、前额突、长人中,腹部、双侧腹股沟皮肤松弛、皱纹明显,双侧隐睾,既往有"脐疝"病史,ATP6V0A2基因存在复合杂合变异,包含1个移码变异c.1421_1424delAGTC(p.Val476Thrfs*71)和1个剪接位点变异c.2293+1G>A,2个变异位点文献均未见报道。本研究对既往文献报道的75例ATP6V0A2基因相关ARCL患者的临床表型进行分析,结果显示皮肤松弛(100%,75/75)、特殊面容(78.7%,59/75)和前囟大或闭合延迟(65.3%,49/75)是最常见临床特征,眼裂下斜(57.3%,43/75)、宽鼻梁(40.0%,30/75)和长脸(34.7%,26/75)是最常见的面部特征。结论当患者出现皮肤松弛,合并特殊面容、前囟大或闭合延迟、生长发育迟缓、智力发育迟缓和癫痫等应考虑ATP6V0A2基因相关ARCL。全外显子组测序是一种快速鉴定致病变异的精确方法,有助于早期确诊。

一例德朗热综合征患儿的致病基因变异分析

目的对1例疑诊德朗热综合征(Cornelia de Lange syndrome,CdLS)的患儿进行致病基因变异检测,明确其发病原因。方法应用高通量捕获测序对CdLS相关致病基因(NIPBL、SMC1A、SMC3、RAD21和HDAC8)进行测序,用Sanger测序验证测序结果以及致病基因的家系分析。结果患儿NIPBL基因存在c.6109-1G>A杂合剪接变异,Sanger测序验证结果表明患儿父母均未携带此变异,提示为新发变异,该变异未在HGMD及ExAC数据库收录。根据Human Splicing Finder预测剪接软件,预测该剪接变异将改变NIPBL基因剪接位点,为致病性变异。未发现SMC1A、SMC3、RAD21和HDAC8基因致病性变异。结论NIPBL基因c.6109-1G>A剪接变异可能是该例患儿的发病原因,新变异的检出丰富了NIPBL基因变异谱。

一例瓜氨酸血症Ⅰ型患儿的临床特点及ASS1基因突变分析

目的对一例临床怀疑瓜氨酸血症Ⅰ型患儿进行分子遗传学研究,明确致病突变,并对其相关的临床特点、转归进行总结。方法收集患儿的临床资料,提取患儿外周血DNA,应用高通量捕获测序确定患儿ASS1基因突变情况,并用Sanger测序验证测序结果以及ASS1基因的家系分析。结果患儿生后第6天出现体温不升、呻吟、喂养困难、惊厥,血氨明显升高(1240μmol/L),血串联质谱(MS/MS)分析提示血瓜氨酸显著升高(1979.03μmol/L),尿气相色谱/质谱(GC/MS)提示乳清酸升高,予限制蛋白饮食、精氨酸治疗后血氨恢复正常,神经系统损害持续加重,头颅MRI提示脑萎缩、脑软化明显,随访至12月时死亡。基因序列分析发现患儿ASS1基因存在c.910C>T和c.1087C>T复合杂合突变,其中c.910C>T突变来源于父亲、c.1087C>T突变来源于母亲。c.910C>T突变导致第304号氨基酸由精氨酸变异为色氨酸,c.1087C>T突变导致第363号氨基酸由精氨酸变异为色氨酸,为错义突变。结论通过高通量捕获测序和Sanger测序确定了一例瓜氨酸血症Ⅰ型患儿的致病基因,随访发现该复合杂合突变引起的瓜氨酸血症患儿临床表现重,预后极差。

Clara细胞分泌蛋白在新生儿肺部疾病中的研究进展

近年来,关于新生儿尤其早产儿肺部疾病发病率及死亡率高的现象已引起广泛关注,但其发病早期呼吸道症状和体征不明显,早期诊断和治疗仍存在困难。Clara细胞分泌蛋白（clara cell secretory protein,CCSP）主要由细支气管、终末细支气管及呼吸性细支气管上的Clara细胞分泌产生,具有抗炎、

早产卵巢过度刺激综合征一例并文献复习

目的总结早产卵巢过度刺激综合征（POHS）的临床特点、发病机制、诊治经验。 方法总结2015年温州医科大学附属第一医院新生儿重症监护室收治1例POHS患儿的病例资料。患儿女，本院出生，为试管婴儿，出生胎龄32＋2周。通过检索词为＂ovarian hyperstimulation syndrome＂＂preterm infants or newborns＂及＂卵巢过度刺激综合征＂＂早产儿或新生儿＂在PubMed及万方数据库检索自1980至2015年的相关文献。对POHS的临床特点、发病机制、诊断及处理进行总结。 结果患儿41日龄（纠正胎龄38＋1周）出现外阴水肿、阴道黏膜皱襞外翻、下腹部和大腿肿胀，诊断尚不明确。患儿49日龄（纠正胎龄39＋2周）B超提示右侧卵巢囊肿，血促性腺激素及雌激素升高，诊断考虑POHS，未予干预，随访监测。患儿169日龄（纠正胎龄4月龄）症状消失、卵巢囊肿缩小至消失，激素水平恢复正常。共检索到符合条件的外文文献6篇，无中文文献，共报道12例POHS患儿，连同本例共13例，其临床特点均为早产、卵巢囊肿、外阴充血水肿、下腹部和大腿肿胀、促性腺激素和雌二醇升高，其中3例伴乳房肿大，1例伴阴道流血，1例伴阴道黏膜皱襞外翻，这些特点出现在纠正胎龄35～39周。治疗方面，1例患儿进行手术联合药物治疗，1例进行药物治疗，其他均只进行随访监测未采取干预措施，手术治疗的患儿出现复发，但复发后和其他患儿一样随着时间的推移在4～5个月症状逐渐消失、卵巢囊肿消失、激素水平恢复正常。 结论POHS是一种罕见的自限性疾病，主要表现为早产儿于纠正胎龄35～39周时出现卵巢囊肿、外阴水肿、下腹和大腿肿胀、促性腺激素和雌二醇升高等，无并发症时只需随访监测，4～5个月恢复正常，预后良好。