鲤春病毒血症病毒RT-RAA-LFD检测方法的建立

为建立一种可现场快速准确检测鲤春病毒血症病毒(SVCV)的方法,本研究结合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,根据SVCV L基因保守区域设计引物及探针,通过优化反应时间和温度等条件,初步建立了可用于SVCV现场可视化检测的RT-RAA-LFD方法。优化后的检测方法在35℃水浴锅中恒温反应15 min即可实现对SVCV目的基因片段的有效扩增。结果显示,该方法可以特异性的检测SVCV,并且不与病毒性出血败血症病毒、传染性鲑鱼贫血症病毒、病毒性神经坏死病毒等其他常见鱼类病毒发生交叉反应;对SVCV重组质粒标准品的检测限为2.42×10^(2)拷贝/μL,并具有较好的稳定性和重复性;采用该方法和病毒分离、套式RT-PCR、荧光定量RT-PCR、荧光定量RT-RAA共5种方法同时对45份临床样品检测,其中病毒分离、套式RT-PCR和荧光定量RT-PCR均检测到29份阳性样品,荧光定量RT-RAA和本研究建立的方法均检测到28份阳性样品,本研究与前3种方法的阳性符合率为97.8%,与荧光定量RT-RAA的阳性符合率为100%。上述结果表明,本研究建立的SVCV RT-RAA-LFD检测方法简便快捷、特异性强、敏感性高、结果可靠,且不依赖于复杂的仪器,可适用于现场和实验室对SVCV的快速检测。

海水鱼神经坏死病毒致病机理研究进展

神经坏死病毒(nervous necrosis virus,NNV)主要分布在地中海和太平洋西海岸,已在120多种鱼中被检测到,能引起鱼类病毒性神经坏死病(viral nervous necrosis,VNN),是对海水鱼类危害重大的病原之一。目前,随着神经坏死病毒的基因序列、类型、诊断和预防技术等方面研究的不断深入,其致病机理的报道也越来越多。本文概述了病毒附着、致病基因、细胞凋亡以及免疫逃避等几个方面的研究现状。

传染性造血器官坏死病病毒RT-RAA-LFD检测方法的建立与应用

为针对传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)建立一种可实现现场快速、准确的检测方法,结合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,在IHNVG基因保守区域设计引物和探针,通过优化反应时间和温度等条件,建立了可用于IHNV现场可视化检测的RT-RAA-LFD方法。优化后的检测方法在35℃水浴锅中恒温反应15 min即可实现对IHNV目的基因片段的有效扩增。结果显示:该方法可以特异性地检测出IHNV,不与其他常见鱼类病毒发生交叉反应;对IHNV质粒标准品的检测下限可以达到2.15×101 copies/μL;采用该方法和实时荧光RT-PCR、实时荧光RT-RAA同时对35份临床样本进行检测,其阳性符合率为100%。上述结果表明,本研究针对IHNV成功建立了一种快速、准确、便捷的试纸条检测方法,并可适应于多种场合。

传染性造血器官坏死病毒重组酶介导等温扩增快速检测方法的建立和验证

为建立快速检测传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的荧光重组酶介导扩增(RAA)方法,本试验参考世界动物卫生组织(WOAH)《水生动物法典(第6版)》所列的诊断方法确认原则,根据IHNV核酸保守序列设计特异性引物和探针,选用其G蛋白保守序列中长度为196 bp的片段构建重组质粒,在不同反应条件下进行优化,建立RT-RAA检测技术,并通过26个IHNV不同基因型毒株和本实验室保存样品进行验证。结果显示,该方法对5个基因型IHNV的26种毒株均敏感,与另外7种RNA病毒无交叉反应,且反应时间仅为RT-PCR的1/5;对重组质粒原液做4个梯度稀释后,在10-4稀释度时完全呈阴性;通过对71份临床样品的验证,阳性检出率为80.28%。上述结果表明,本研究建立的RT-RAA方法具有操作简便、灵敏度高、特异性好、检测时间短、不完全依赖实验室设备和条件等优势,可为IHN防控提供更便捷、更适合现场检测的工具。

病毒性神经坏死病毒实时荧光RT-RAA快速检测方法的建立

为建立一种简单、快速检测病毒性神经坏死病毒(VNNV)的重组酶介导等温扩增(RAA)方法,本研究通过比较分析VNNV RNA2基因保守序列,设计引物与探针。经过筛选优化,建立了VNNV实时荧光RT-RAA快速检测方法。结果显示,该方法在39℃恒温反应15 min即可快速、特异性地检测出VNNV,并与常见的鱼类RNA病毒核酸不发生交叉反应,其对标准质粒的检测下限为2.6×10^(1)copies/μL,组内和组间变异系数均小于5%。利用该方法对48份实验室及送检样品进行检测,结果与实时荧光RT-PCR的一致。上述结果表明,本研究建立的检测方法操作简单,特异性强,敏感性高,结果可靠,且不依赖于复杂的仪器,可适用于现场和实验室对VNNV的快速检测。

胖胖的同学胖胖的心

他没有英俊潇洒的模样,也没有炯炯有神的眼睛,看起来永远是刚哭过的肿得像包子似的单眼皮,笑起来眼睛眯成一条线,别人都说他的眼睛小得可怜。但是他的头却很大,班上的同学当中数他的头是最大的。以前听人说过,头大读书是天才。

回家

编者推荐:借"小鸟回家"说"环保"——角度独特。此文还需要升格:当前"回家"的内容宜略写,"美梦"的内容应详写——正面引导,实现"环保"!