红景天苷对犬细小病毒体外复制的抑制效应分析

旨在分析红景天苷(salidroside,SAL)对犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)的抑制作用及其机制。对病毒感染过程的3个节点(吸附、侵入、复制)分别添加SAL进行孵育,检测细胞中病毒滴度,评价SAL对病毒的抑制作用;TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl Transferase dUTP Nick End Labeling)试验分析细胞凋亡;实时荧光定量PCR和Western blot分别检测细胞凋亡相关蛋白和炎症因子的mRNA或蛋白表达,分析和初步验证SAL抑制病毒复制的机制。结果显示,SAL可显著抑制CPV复制,但对CPV的吸附及侵入过程没有显著影响。SAL可抑制CPV诱导的细胞凋亡,且显著抑制了caspase 8及tBID的蛋白表达。进一步研究发现,CPV可诱导IL-1β及相关炎症因子上调表达,而SAL孵育病毒感染的细胞后部分炎症因子下调表达。Caspase 1、NLRP3的激活与IL-1β密切相关,病毒感染细胞后添加SAL进行孵育可抑制caspase 1的激活,而对NLRP3无显著作用。应用siRNA-caspase 8下调细胞中caspase 8的表达再孵育病毒,结果显示,细胞中IL-1β表达被抑制,与SAL的作用效果一致,表明SAL主要通过抑制caspase 8信号通路活化从而抑制炎症因子的表达。综上所述,SAL可有效抑制CPV的复制,其通过调控caspase 8信号通路抑制了CPV诱导的细胞凋亡,且抑制了部分炎症因子的表达。本研究为有效治疗CPV提供了新的途径和方法。

猪ROCK2基因多态性及其遗传效应分析

为了探究猪ROCK2基因多态性及其与生产性状的关系,试验采用焦磷酸测序法检测了ROCK2基因编码区145 bp序列中5处潜在的SNP中的3个(A27G、C42T和T61C)在大白猪、长白猪、梅山猪、清平猪4个猪种和大白×梅山F2代资源家系中的基因频率,并进行了遗传变异分析及生产性状关联分析。结果表明:3个SNP的优势等位基因在国外猪种和国内地方猪种间没有差异,分别为A、C和T;A27G位点与皮率和胸腰椎间背膘厚呈显著相关(P<0.05),与至第一颈椎背膘厚和至第一肋胸背膘厚呈极显著相关(P<0.01);C42T位点与至第一颈椎背膘厚呈显著相关(P<0.05),与至第一肋胸背膘厚呈极显著相关(P<0.01);T61C位点与皮率、背最长肌和股二头肌大理石纹评分呈显著相关(P<0.05),与股二头肌p H值呈极显著相关(P<0.01)。说明这3个SNP很可能是影响猪生产性状的分子标记。

猪ROCK1基因克隆、序列分析及时空表达研究

为进一步获得猪肉质性状候选基因Rho相关激酶1(Rho-associated,coiled-coil containing protein kinase1,ROCK1)的序列特征、生物学功能及时空表达规律等信息,本研究通过PCR、SMARTer RACE PCR的方法克隆了猪ROCK1基因,应用生物信息学方法分析该基因的蛋白质序列在不同物种中的进化关系,并采用RT-PCR和实时荧光定量PCR的方法检测其在不同组织和不同猪种背最长肌不同发育阶段的表达。结果显示,ROCK1基因有2个转录本,包含4 065bp的开放阅读框(ORF),编码1 354个氨基酸;猪ROCK1基因ORF序列与人、小鼠和大鼠的ORF序列的同源性分别为95%、91%和91%,相应的氨基酸序列同源性分别为98%、96%和94%,该蛋白在不同物种间高度保守;ROCK1基因的组织分布较广泛,不同发育阶段在同一组织中的表达会发生变化;胚胎期ROCK1基因在梅山猪背最长肌中的表达极显著高于大白猪(P<0.01),出生后ROCK1基因在2个猪种背最长肌中的表达无显著差异(P>0.05)。本试验结果为研究ROCK1基因在猪骨骼肌发育中的生物学功能及其分子机制奠定基础。

微视频在医学微生物学教学中的应用

高校生物类课程内容繁杂，重难点多，部分内容着眼微观，学生不易理解，容易遗忘。利用教学微视频，结合传统教学方式，提高教IJ币教学效率，加强学生自主学习效罨。

某猪场爆发蓝耳病的疫情分析及防治

某猪场8月开始出现猪群感染疫病,主要症状表现为精神沉郁,食欲减退,体温升高,伴有喘气,关节炎,跛行.从保育40日龄仔猪开始发病,迅速扩散至保育全群,分娩舍与配怀舍也受到一定影响.经实验室诊断确定为高致病蓝耳病感染.为控制疾病,在发病初期使用多种药物治疗,但效果均不理想.之后调整防控方案,加大替米考星等药物使用剂量,引入康复血清的注射治疗,并在9月下旬进行TJM-F92高致病性蓝耳病弱毒疫苗紧急接种.10月份病情得到控制,保育舍死亡率明显下降,猪群状态呈逐渐恢复.

H9N2亚型禽流感病毒西藏分离株的全基因组遗传进化分析

根据GenBank登陆的H9N2亚型AIV全基因组序列,设计了8对引物,运用RT-PCR的方法获取了3株H9N2亚型AIV西藏分离株A/Chiken/Tibet/S1/2009、A/Duck/Tibet/S2/2009和A/Chiken/Tibet/S4/2009的8个基因序列,并对所得序列进行同源性及遗传进化分析。结果显示,分离毒株的各基因片段均有完整的开放阅读框,HA基因裂解位点处均为RSSR/G,符合低致病性禽流感的特征;3株西藏分离毒株之间同源性为98%~99%,可能起源于同一种系;各分离毒的HA、NS和NA基因与欧亚分支A/Chiken/Beijing/1/94分支中的A/Duck/HongKong/Y280/97遗传距离最近,而M、NP、PA、PB1和PB2基因与欧亚分支中另一分支A/Quail/HongKong/G1/97群系遗传关系近。由此可见3株分离株的各基因所属分支不具有统一性,说明本研究所分离的3株H9N2亚型AIV西藏分离毒株可能是来源于不同亚系AIV的毒株在感染同一种宿主时发生基因重排的产物。

不同PED疫苗防控猪流行性腹泻的临床效果

猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）是导致仔猪脱水和高死亡率的急性肠道疾病,患猪的典型症状是严重水样腹泻。这种疾病由猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起,该病毒属于冠状病毒科甲型冠状病毒属,有包膜,基因组为单链正链RNA[1]。PED最早是1971年在英国的架子猪和育肥猪中被报道。

可调控表达人博卡病毒1型非结构蛋白NS1稳定细胞系的建立及其反式转录激活作用初探

人博卡病毒1型(Human bocavirus 1,HBoV1)非结构蛋白NS1是多功能蛋白,对病毒复制有重要作用,同时可诱导宿主细胞凋亡。在研究NS1蛋白功能时,降低NS1蛋白对宿主细胞的毒性作用是急需解决的问题。基于此,文中建立了可调控表达HBoV1非结构蛋白NS1的稳定细胞系。构建NS1重组慢病毒质粒(含可调控启动子),应用转染试剂将NS1重组慢病毒质粒转染至HEK293T细胞。通过嘌呤霉素筛选抗性细胞、多西环素诱导NS1表达,建立可稳定表达NS1-100、NS1-70蛋白的HEK 293T细胞系,利用荧光标记蛋白和Western blotting检测,确定NS1蛋白的表达。并在稳定表达NS1细胞系中转染HBoV1启动子-荧光素酶基因的质粒,分析NS1的反式转录激活活性。结果表明NS1蛋白可在建立的细胞系中稳定表达,且稳定表达NS1蛋白对HBoV1启动子有较强的激活活性,为进一步研究非结构蛋白NS1的功能及人博卡病毒致病机理奠定了良好的基础。

应用CRISPR/Cas9构建稳定表达CPV结构蛋白VP2的HEK293T细胞系

为了构建犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)结构蛋白VP2稳定表达的HEK293T细胞系,以2017年新分离的CPV-WH株为材料,扩增其VP2基因,并进行进化树分析。根据安全插入位点AAVS1位点序列设计sgRNA,并构建Cas9及sgRNA的表达载体PX335-U6-sgRNA-Cas9,同时构建含有VP2的特异性同源序列的片段HM-puro-eGFP-VP2-HA,将两者共转染HEK293T细胞后,通过嘌呤霉素筛选稳定表达VP2的HEK293T细胞株,并通过测序确定VP2正确插入。进化树分析显示CPV-WH的VP2存在S557N、T570K 2个氨基酸突变,该氨基酸位点可能与病毒免疫逃逸有关。通过荧光观察和免疫印迹确定了稳定表达细胞系中VP2的表达。本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了表达CPV结构蛋白VP2的HEK293T细胞,为后期制备CPV样颗粒提供细胞模型。

高校免疫学教学融入创新创业教育的课程改革

创新创业教育已成为当前高校教育教学活动中的重要部分。然而由于受到传统教学观念的影响,目前高校教育中,在专业课中融合创新创业教育的探索较少,并且大学生创新精神薄弱,创业意识不足,创业能力偏低。免疫学是面向生物类专业开设的专业课程,涉及多门学科知识,如组织解剖、生理生化、分子细胞生物学、遗传学,它是一门多学科相互渗透极强的前沿学科。如何在免疫学专业课程教学中融入创新创业教育,对于高校创新创业教育有着深远意义。因此,对高校免疫学专业课程融合创新创业教育进行初步探索。