煮沸裂解法与磁珠法在HBV DNA荧光定量检测中的核酸提取效果

目的比较煮沸裂解法和磁珠法在HBVDNA荧光定量PCR检测中的核酸提取效果.方法应用煮沸裂解法与磁珠法对不同拷贝数（〈10^3、10^3、10^4、10^5、10^6和10^7拷贝/mL）HBVDNA样本进行核酸提取,并采用荧光定量PCR检测结果进行评价.结果磁珠法的核酸提取效果优于煮沸裂解法,尤其在低拷贝样本中,明显优于煮沸裂解法约10倍（P〈0.05）;磁珠法的重复性高于煮沸裂解法;磁珠法提取核酸时,样本只要1～32个,提取时间不随样本量变化.结论磁珠法的核酸提取效果好于煮沸裂解法,尤其在低拷贝数样本中;且重复性较高.

H1N1流感病毒M1蛋白表位筛选及其在禽流感病毒交叉免疫中的作用机制

流感病毒,如2009甲型H1N1流感病毒(2009 pH1N1)以及发生跨种传播的H7N9禽流感病毒(H7N9)等的流行严重威胁了人类健康并造成了重大社会经济损失.自2009年以来, 2009 pH1N1作为季节性流感病毒的流行使得健康人群存在一定的T细胞免疫本底水平.本研究对2009 pH1N1和H7N9的主要T细胞免疫原M1蛋白存在的4个突变区段,利用ELISPOT试验确定了2009 p H1N1在这4个区段来源的T细胞表位多肽H1-M42 (LMEWLKTR), H1-M102(KLKREITFHGAK), H1-M202s (AMEVANQTR)和H1-M244 (MGVQMQRFK).同时,发现健康人群对H7N9来源的相应多肽预存有一定水平T细胞免疫,但低于对2009 pH1N1本身多肽的免疫水平.多肽与HLA分子的复性实验表明, H1-M102和H1-M244能够与HLA-A*1101稳定结合;而H1-M42和H1-M202s虽然能够结合HLA-A*3303,但H7N9相应的表位与这些分子的结合力相对较弱.结果表明,在健康人群中存在有限的针对H7N9的预存T细胞免疫,而H7N9在新鉴定表位多肽中的氨基酸突变对于免疫逃逸具有一定的贡献.对流感病毒交叉免疫的研究能够为了解禽流感病毒逃逸T细胞免疫机制以及通用流感疫苗的研发提供重要参考.