能量可控陡脉冲治疗兔移植性肿瘤的安全性探讨

目的:研究能量可控陡脉冲(ECSP)治疗兔移植性肿瘤的安全性。方法:建立20只新西兰大白兔VX2移植性乳腺癌模型,给予ECSP处理,比较其处理前和处理后1、7天的肝肾功能、血象和心电图(ECG)的变化。建立10只新西兰大白兔VX2移植性肝癌模型,给予ECSP处理后取其周边正常组织,行DNA片段化分析。结果:ECSP处理后动物的肝肾功能、血象和ECG与处理前比较,差异无显著性(P>0·05)。ECSP处理后对周边正常组织的DNA电泳为一完整条带,表明无DNA损伤。结论:ECSP治疗兔移植性肿瘤安全有效。

能量可控陡脉冲对肿瘤细胞内钙离子浓度及膜电位的影响

背景与目的:前期研究表明,陡脉冲电场对肿瘤细胞具有明显的杀伤作用,但其确切机制尚不清楚。本文拟探讨不同剂量陡脉冲对细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)和细胞膜电位的影响。方法:将乳腺癌细胞MDA-MB-231分为对照组和5个不同剂量能量可控陡脉冲(energy controllable steep pulses,ECSP)处理组,分别用荧光探针Fluo-3/AM标记Ca2+、DiBAC4(3)标记细胞膜电位,应用激光共聚焦显微镜静态观察不同剂量ECSP处理后乳腺癌细胞内荧光探针的平均荧光强度,分析细胞内Ca2+浓度的变化以及细胞膜电位的改变。同时观察细胞胞外有或无钙离子时,ECSP对细胞内游离Ca2+浓度的影响。结果:静态观察发现在细胞受到能量较低电场刺激后,细胞外钙内流;当能量增大后,细胞内钙大量外流。实时动态观察发现在低能量的脉冲处理时,细胞内Ca2+的荧光强度和上升速率随脉冲电场强度的增加而增加;但当能量达到电压285V、频率100Hz时,荧光强度反而呈现明显的下降。在没有外Ca2+的情况下,细胞内Ca2+浓度的增加虽然与有外钙时相比显著下降,但在脉冲电场作用下在脉冲电场作用下仍缓慢上升。低剂量的ECSP可诱导细胞DiBAC4(3)的荧光强度增强,表明细胞发生去极化;但当剂量继续增加时,细胞DiBAC4(3)的荧光强度反而减弱,表明细胞发生超极化。结论:低能量陡脉冲可使细胞膜发生去极化,诱导细胞外钙离子内流;高能量陡脉冲可直接破坏细胞膜,使细胞膜发生超极化,诱导细胞内钙离子外流,导致肿瘤细胞发生坏死。

能量可控陡脉冲对乳腺癌细胞缝隙连接的影响

目的：研究能量可控陡脉冲（energy controllable sleep pulse，ECSP）对细胞缝隙连接蛋白Cx43的影响。方法：处理组用不同剂量参数组合的ECSP对乳腺癌MDA—MB-231细胞处理5min后继续培养48h，对照组不予任何处理。2组均采用间接免疫荧光细胞化学法测定和激光共聚焦显做镜观察连接蛋白Cx43的定位。采用Western印迹法检测细胞内Cx43蛋白的含量，RT—PCR检测Cx43mRNA的表达。结果：对照组乳腺癌细胞间连接处有散在的明亮点状标记。ECSP处理2、3、4组经ECSP处理（条件分别为：电压100V，频率100Hz；电压100V，频率200Hz；电压150V，频率100Hz）后，继续培养的乳腺癌细胞间连接处标记斑点较对照组增多。Western印迹分析表明：ECSP处理2、3、4组Cx43蛋白条带亮度明显增加，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。RT—PCR扩增产物中，ECSP处理2、3、4组的Cxa3基因条带亮度明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。ECSP处理1、5组（条件分别为：电压100V，频率50Hz；电压200V，频率200Hz）经ECSP处理后继续培养的乳腺癌细胞间连接处标记斑点与对照组无明显差异（P〉0．05）。ECSP处理1、5组Cx43蛋白条带与对照组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。RT—PCR扩增产物中，ECSP处理1、5组Cx43基因条带亮度与乳腺癌对照组比较，差异亦无统计学意义（P〉0．05）。结论：低能量可控陡脉冲可增强体外培养的乳腺癌细胞缝隙连接通讯功能，从而达到治疗恶性肿瘤的目的。

陡脉冲治疗卵巢癌中组织因子的变化

电脉冲因其微创,靶向性强,无明显禁忌而逐渐成为肿瘤治疗研究的热点。其对肿瘤治疗的有效性研究已取得一系列肯定的结果,但其治疗机制仍旧没有得到完全的研究证实。为明确陡脉冲对肿瘤的治疗机制,本实验采用能量可控陡脉冲(Energy controllable steep pulse,ECSP)治疗荷瘤裸鼠,检测既是凝血系统重要启动因子、又是肿瘤浸润和转移指标——组织因子(Tissue factor,TF)在ECSP治疗前后的变化,分析ECSP,肿瘤凝血状态及肿瘤浸润、转移之间的相互作用,浅析ECSP对肿瘤的治疗机理。实验中将裸鼠卵巢癌皮下移植瘤完全随机分为治疗组和未治疗组,ECSP对治疗组作用后,光镜从形态学观察血栓形成,免疫组织化学SP法、RT-PCR对TF进行定位和定量检测。结果显示,ECSP作用后肿瘤血栓明显形成,TF在肿瘤治疗组表达明显降低。结果表明,ECSP促血栓形成,消耗TF,改变肿瘤组织高凝状态;同时TF在卵巢癌组织表达减少,提示ECSP与卵巢癌的侵袭和转移受抑制有关。

能量可控陡脉冲对兔VX2乳腺癌增殖和凋亡的影响

目的:观察能量可控陡脉冲对荷瘤兔乳腺癌细胞增殖能力和凋亡的影响,分析陡脉冲对处理旁中心区域肿瘤组织潜在的影响。方法:实验兔24只制成VX2乳腺癌模型,随机分为处理组(n=21)和对照组(n=3),处理后0、12、24、48、72、120、168小时取肿瘤组织,通过HE染色、脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dutp-生物素标记法(TUNEL法)、免疫组化观察处理中心组织及处理旁中心区域细胞形态、增殖指数(PI)及凋亡指数(AI)的改变。结果:陡脉冲处理后肿瘤中心凝固性坏死,旁中心区域见大量凋亡细胞,中心部分凋亡细胞较少。处理组细胞凋亡高峰在术后24小时左右,后逐渐下降,与对照组相比差异有显著性(P<0·05);PI随时间延长逐渐下降,与对照组相比差异有显著性(P<0·05)。结论:陡脉冲通过诱导处理旁中心区域肿瘤细胞凋亡,扩大陡脉冲处理的有效范围,促进肿瘤细胞的原位灭活。

纳米板转导HPV16 E7siRNA对宫颈肿瘤组织增殖和凋亡的影响

目的:探讨经纳米板转导HPV16 E7siRNA对宫颈癌组织增殖和凋亡的影响。方法:建立裸鼠宫颈癌移植瘤模型,纳米板将HPV16 E7siRNA转导入肿瘤组织细胞,转导后2 d用TUNEL法检测实验组和对照组的凋亡情况,免疫组化法检测实验组和对照组Ki-67的表达情况。结果:经纳米板转导HPV16 E7siRNA后实验组细胞凋亡显著增加,Ki-67表达明显降低,与对照组相比凋亡指数、增殖指数差异均具有显著性(P<0.05)。结论:纳米板转导的HPV16 E7siRNA对宫颈癌肿瘤组织增殖具有明显的抑制作用。

纳米板转导HPV18 E7siRNA对宫颈癌细胞增殖的抑制作用

目的通过纳米板转导HPV18 E7 siRNA进入HPV18 E7宫颈癌转基因鼠皮肤组织,探讨纳米板转导siRNA的效率及转导的siRNA对宫颈癌细胞增殖的抑制作用。方法纳米板转导FITC标记的寡聚DNA(代替siRNA)进入小鼠皮肤,观察荧光变化,判断DNA是否被转导进入皮肤细胞中;纳米板转导DiI标记脂质体与siRNA复合物进入小鼠皮肤,测定转导前后和残留在皮肤上的荧光强度,计算纳米板转导siRNA进入组织细胞的效率;纳米板转导E7 siRNA和脂质体的复合物于转基因鼠皮肤中后,BrDU免疫组化检测siE7对宫颈癌细胞增殖的抑制作用。结果纳米板转导寡聚DNA后绿色荧光逐渐分散变多,表明DNA已逐渐进入小鼠皮肤细胞中。纳米板转导DiI标记脂质体与siRNA进入小鼠皮肤后,通过荧光强度计算得出转染率为50.23%。纳米板转导E7 siRNA进入HPV18 E7宫颈癌转基因鼠皮肤后,能有效抑制宫颈癌细胞增殖。结论纳米板能高效的转导siRNA进入组织细胞,并且转导进入细胞的siE7能有效抑制宫颈癌细胞增殖。

能量可控陡脉冲治疗肿瘤的剂量学初探及安全性研究

目的研究能量可控陡脉冲治疗兔移植性肿瘤的最佳剂量及安全性。方法建立10只新西兰大白兔VX2移植性乳腺癌模型,通过正交设计给予ECSP治疗,TTC染色观察其治疗体积情况,通过直观分析寻找最佳剂量。建立20只新西兰大白兔VX2移植性肝癌模型,给予ECSP治疗后取其周边正常组织,行DNA片断化分析及彗星实验。结果在ECSP的4个参数中,电压对治疗效果的影响最大。在不考虑各因素间相互影响的条件下,电压为150V,频率为100Hz,脉宽为0.01μm,作用时间为15min时的治疗效果最理想。ECSP治疗后对周边正常组织的DNA电泳为一完整条带,无明显彗星扫尾现象发生,表明无DNA损伤。结论ECSP治疗兔移植性肿瘤的最佳剂量为电压150V,频率100Hz,脉宽0.01μm,作用时间15min,对周围组织安全。

腹腔镜仿真子宫模型在妇科住院医师培训中的应用

目的对比多角度缝合腹腔镜仿真子宫模型和传统外科手术模型的训练效果,探索出更适用于妇科住院医师培训的腔镜模型。方法选择2021年2月至2023年2月在浙江大学医学院附属邵逸夫医院培训的住院医师48名,分批训练,每批随机平均分为两组,观察组运用传统外科手术模型和普通手术视频进行训练,试验组运用本研究组成员自主研发、可多角度缝合的腹腔镜仿真子宫模型和配套手术视频进行训练。最后对比两组住院医师考核成绩以及对试验组进行问卷调查。采用SPSS 20.0统计软件对结果进行t检验或卡方检验。结果两组住院医师在年龄、性别分布、学历、临床经验方面差异无统计学意义。试验组[(82.63±3.93)分]和观察组[(85.00±6.15)分]理论成绩差异无统计学意义(P>0.05)。在技能考核上,两组前壁考核差异无统计学意义[(83.08±4.47)分vs.(82.79±3.58)分,P=0.804]。但在侧壁和后壁考核时,试验组熟练度、精确度和双手协调程度均优于观察组,总分差异有统计学意义[(64.13±3.34)分vs.(46.75±3.50)分,(62.25±4.41)分vs.(45.00±2.89)分,P<0.001]。在调查问卷中,试验组对腹腔镜仿真子宫模型的满意度高,认为模型仿真度高,可从中受益。结论多角度缝合的腹腔镜仿真子宫模型相较于传统外科模型,能高质量地提高住院医师操作水平,为今后妇科住培腹腔镜模型训练提供了新思路。

宫腔镜子宫内膜切除术对服用他莫昔芬的绝经后乳腺癌术后患者子宫内膜增生的抑制作用

目的探讨宫腔镜子宫内膜切除术对服用他莫昔芬的绝经后乳腺癌患者子宫内膜增生的抑制作用。方法选取服用他莫昔芬的绝经后乳腺癌患者35例,比较宫腔镜子宫内膜切除术(transcervical resection of endometrium,TCRE)前后子宫内膜的变化。结果宫腔镜子宫内膜切除术后,患者子宫腔修复层厚度较术前明显下降,在随访期间无子宫内膜息肉复发。结论在服用他莫昔芬的绝经后乳腺癌患者中,宫腔镜子宫内膜切除术能明显抑制他莫昔芬引起的子宫内膜增生反应,降低子宫内膜息肉的复发。

能量可控陡脉冲抑制乳腺癌细胞增殖活性的机制初探

观察能量可控陡脉冲对乳腺癌细胞增殖抑制作用以及相关基因表达的影响,探讨能量可控陡脉冲抑制肿瘤细胞增殖的可能机制。能量可控陡脉冲作用于人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,于作用后24h应用TUNEL法观察肿瘤细胞凋亡,RT-RCR方法测定处理组和对照组中Rb基因及转录调节因子E2F1基因表达的改变。陡脉冲对乳腺癌细胞的增殖有明显抑制作用,与对照组相比处理组细胞数目明显减少,TUNEL阳性细胞显著增多,处理组Rb基因mRNA表达明显升高、E2F1mRNA表达明显下降。能量可控陡脉冲具有抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡的作用,Rb基因、EF基因可能参与了能量可控陡脉冲抑制恶性肿瘤细胞增殖的过程。

电化学疗法对肿瘤血管的影响

随着电化学治疗(electrochemotherapy,ECT)法作为一种新的肿瘤治疗方法的兴起,人们发现ECT法除了有以电脉冲的电穿孔效应为基础的化疗药物增敏作用外,还能通过破坏肿瘤间质的血管起到间接杀伤肿瘤细胞的作用.肿瘤血供,以及组织氧含量对于肿瘤生长是至关重要的,同时肿瘤的脉管系统也是局部浸润和远处转移的重要条件.因此,对于ECT法对肿瘤脉管系统的作用能否防止肿瘤再生、转移,即促进肿瘤"良性化",国内外学者展开了深入的研究,以期进一步提高ECT的治疗疗效,本文对此做一综述.

妇产科住院医师规范化培训中宫腔镜教学体会

住院医师规范化培训是培养医学人才的重要举措。在妇产科规范化培训中，宫腔镜是重要的教学内容。浙江大学医学院附属邵逸夫医院妇产科探索采取理论教学、教学查房、PBL、见习培训、实际操作一对一培训、技能考核等形式多样的教学培训，以期提高规范化培训的教学质量以及住院医师的实际操作能力。