两株高致病性PRRSV河南分离株ORF5基因克隆及遗传变异分析

从河南信阳和新乡两地区猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征病料中分离出能引起Marc145细胞病变的病毒,命名为HN1和HN2。采用RT-PCR方法从分离的2株PRRSV中均分别扩增出ORF5基因,并将其克隆、测序。用DNAStar软件分析所测序列,并与北美洲型VR-2332株及国内分离株进行核苷酸和推导的氨基酸同源性比较,绘制系统进化树,结果表明,ORF 5核苷酸与北美洲型的同源性为81.2%～99.1%,与欧洲型Lv株的同源性分别为35.9%和35.3%,推导氨基酸与北美洲型的同源性为84.5%～99.5%,与欧洲型Lv株的同源性分别为46.0%和45.5%。证明新分离到的PRRSV毒株仍属北美洲型。与国内分离的高致病性PRRSV毒株JXA1、HUB1、JX0612、GDZC1、ZQ、SX-1、HB1、HEB1、Hnyz核苷酸同源性达96.5%～99.1%,氨基酸同源性为96.0%～99.5%。分析结果表明,所获得的2个毒株GP5蛋白氨基酸序列中的抗原表位已经发生变异。

靶向PRRSV核衣壳蛋白N基因的siRNA表达载体的构建及鉴定

[目的]研究靶向PRRSV核衣壳蛋白N基因的siRNA表达载体的构建及鉴定。[方法]设计并人工合成靶向PRRSV核蛋白N基因的3个siRNA靶序列,将其插入CMV启动子下游,克隆到真核表达载体pSilencer4.1-CMV中,对该重组表达载体进行酶切鉴定及DNA测序。[结果]成功构建了靶向核蛋白基因表达的siRNA干扰重组质粒载体pSilencer-N。[结论]该研究为进一步运用RNA干扰技术进行PRRSV防治研究奠定了基础。

三元杂交猪IL-18全基因的序列测定及分析(英文)

白细胞介素-18（IL-18）又称γ干扰素诱导因子（IGIF），研究表明IL-18是一种重要的新型免疫佐剂分子。为探讨猪IL-18的免疫佐剂作用，该研究根据已发表的猪IL-18基因序列，设计并合成1对特异性引物，从猪脾脏中直接扩增得到猪IL-18全基因，并进行克隆和序列测定、分析。

靶向PRRSV核衣壳蛋白N基因的siRNA表达载体的构建及鉴定

1材料与方法 1．1材料限制性核酸内切酶HindIII、BamHI、PvuII、SspI、质粒抽提试剂盒、EcoT14 DNAMarker购自TakaRa公司。T4DNA连接酶购于promega公司。大肠杆菌DH5α菌株由该实验室保存。siRNA表达载体pSilencer 4．1-CMV Nero质粒购自Ambion公司。

三元杂交猪IL-18全基因的序列测定及分析

[目的]为进一步研发新型抗病毒制剂和疫苗佐剂、有效控制猪重大传染病奠定基础。[方法]根据GenBank中猪白细胞介素-18基因(IL-18)序列,设计1对特异性引物,应用RT-PCR方法从河南三元杂交猪脾脏淋巴细胞中扩增猪IL-18基因,并进行克隆、序列测定和分析。[结果]猪IL-18基因全长为579 bp,编码192个氨基酸的无活性前体蛋白,但前体蛋白并不含典型的疏水信号肽,在第35位氨基酸残基处有1个潜在的白细胞介素1β转换酶(ICE)剪切位点,剪切后变为具有生物活性的猪IL-18成熟蛋白。序列分析结果表明,该试验获得的猪IL-18基因与已知猪IL-18基因序列同源性很高,均为96%以上,其推导的氨基酸同源性在98%以上。[结论]该研究成功构建了猪IL-18基因的重组真核表达载体并得到了具有生物活性的瞬时表达产物。

超高效液相色谱-串联质谱法测定磷酸肌酸钠中3种潜在遗传毒性杂质

目的建立同时测定磷酸肌酸钠中3种潜在遗传毒性杂质磷酸三乙酯、肌酸磷酸二乙酯、肌酐磷酸二乙酯含量的超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS)。方法采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪,色谱柱ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×10 cm;1.7μm);流动相为0.1%甲酸水溶液-甲醇(60∶40);流速为0.25 mL·min^-1;柱温为30℃;进样量为20μL;电喷雾离子源,正离子模式,多反应监测扫描方式采集数据。结果磷酸三乙酯、肌酸磷酸二乙酯、肌酐磷酸二乙酯分别在0.5~135.6、4.1~103.9、0.8~125.6μg·L^-1,峰面积与浓度呈良好线性关系;检测限分别为0.2、1.3、0.3μg·kg^-1;定量限分别为0.6、4.1、0.9μg·kg^-1;在高、中、低3个加标水平下,3种杂质的回收率为97.4%~103.8%,相对标准偏差为0.3%~2.8%。结论该方法简便准确,可用于磷酸肌酸钠中磷酸三乙酯、肌酸磷酸二乙酯、肌酐磷酸二乙酯等杂质的检测。

生物药物新进展(续完)

2.1.2 透明质酸透明质酸是酸性粘多糖,瑞典Pharmacia药厂生产的healon为其主要产品.已广泛用于20余种复杂的眼科手术,形成新兴的眼科“粘性手术”(Viscosuryery),并用作保湿因子(natural moisturizing factor)用于各种化妆品.张天民(1992)报道以新鲜人脐带,用酶解方法制得高分子量(Mr1.2×10~6)透明质酸,收率为0.20%.阎家麒(1994)以兽疫链球菌(Streptococcus ZOO epidemicus)经诱变获得的HA缺陷型变异株Y-921,发酵42h,得透明质酸4.5g/L,分子量1.9×19~6.这为HA的工业规模生产创造了一定条件.

激素对胃泌素释放的影响

1 类固醇激素对胃泌素释放的调节1.1 性激素对胃泌素释放的调节早在1950年,Ojha和Wood就观察到已烯雌酚能减少正常猫对组织胺的胃酸分泌反应.Eisenberg(1965)也报道,雌性狗的卵巢切除后引起去神经小胃的胃酸分泌增加,上述资料提示,卵巢激素能直接或间接地抑制胃酸分泌.Takeuchi,K.S.D(1974)发现,大鼠的胃酸分泌量存在性别差异,雄性大于雌性.这进一步表明,正常情况下,胃酸的分泌受体内性激素的影响.此后,人们认识到,不仅胃酸的分泌受性激素的影响,胃泌素的分泌同样受性激素的调节.