革兰氏染色与淋球菌培养诊断女性淋病的比较研究

本文用淋球菌培养比较研究对革兰氏染色法在女性淋病诊断中的应用作重新评价.妇科门诊500名病人615价标本的检查结果表明,革兰氏染色法敏感性为94.9%,特异性为95.2%,阳性预报率为74%,阴性预报率为99.2%.

泌尿生殖道沙眼衣原体分离培养方法探讨

本文采用放线菌酮处理的McCoy细胞分离培养泌尿生殖道沙眼衣原体。450例宫颈炎,盆腔炎患者培养阳性234人(52%),30例男性尿道炎患者培养阳性15人(50％),提示沙眼衣原体引起的泌尿生殖道感染在国内十分常见。249份阳性中二次传代阳性73人(29.3％),放线菌酮最适浓度为1～4μg/ml,经离心处理的标本包涵体形成数明显高于不离心标本。用放线菌酮处理细胞、离心。

用PCR-SSCP检测母婴标本中沙眼衣原体的研究

用配对母胎标本探讨沙眼衣原体的垂直传播。材料与方法;用细胞培养、聚合酶链反应(PCR)和单链构象多态性(SSCP)检查配对母胎标本中的沙眼衣原体。结果:30份宫颈标本中8份沙眼衣原体培养和质粒 PCR 均为阳性:9名宫颈标本质粒 PCR 阳性的孕妇中有4份羊水标本培养和 PCR均为阳性:1例新生儿睑结膜和配对羊水标本表现相同的 SSCP 图谱。结论:孕妇的沙眼衣原体感染易导致胎儿感染;1例新生儿子宫内和出生后感染的沙眼衣原体为同一菌株。

MOMP基因和质粒PCR与细胞培养检出沙眼衣原体的比较研究

在用临床标本作沙眼衣原体（Ct)基因分型中，主要外膜蛋白（MOMP）基因扩增至关重要，本文用ct分离培养，质粒PCR、MOMPPCR作比较研究，502例宫颈标本中Ct培养阳性145例（28.9%)，220例质粒PCR和培养比较，质粒PCR敏感性为90.6%，特异性为98.1%。150例MOMP和质粒PCR比较，MOMPPCR敏感性为71.7%，特异性为100%，本文结果提示，宜先用质粒PCR初筛临床标本，阳性者再作MOMPPCR。

几种主要STD实验诊断方法的应用评价

在评价某试验方法的准确性时,常用敏感性和特异性这两个指标。若某法敏感性高而特异性低,则假阳性率高;敏感性低而特异性高则假阴性率高。一、梅毒本病由梅毒螺旋体引起,表现为皮肤粘膜及内脏的病变。 (一)使用非螺旋体抗原的非特异试验这些试验用从牛心肌中提取的脂质作为抗原,检测血清中的心脂质抗体。

静脉用免疫球蛋白

八十年代几种静脉用免疫球蛋白（IVIG）相继问世，人们对这些新一代免疫球蛋白制剂作了大量的实验和临床研究。

结核分枝杆菌Ag85B-Ag85A双抗原融合真核表达质粒的构建及表达

目的 :构建结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B Ag85A融合基因及其双价抗原真核表达载体 .方法 :采用 geneSOE ing法将Ag85B和Ag85A编码基因用疏水甘氨酸接头(Gly4Ser) 3 行PCR扩增融合 ,经限制性内切酶消化后克隆入pcDNA3.1 (+)中构建真核表达质粒 pCDAg85B A ,酶切、DNA测序鉴定 ,用脂质体法将 pCDAg85B A转染COS 7细胞 ,采用RT PCR ,ELISA方法检测其表达 .结果 :Ag85B Ag85A融合基因定向克隆入pcDNA3.1 (+) ,双向测序表明碱基无突变 ,Ag85B Ag85A融合基因在真核细胞中能表达 .结论 :成功构建结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B Ag85A融合基因及其双价抗原真核表达载体 。

结核分枝杆菌lhp-esat6融合基因穿梭表达载体的构建及在BCG中的表达

目的 构建能表达结核分枝杆菌早期分泌蛋白CFP10 -ESAT6融合蛋白的重组卡介苗 (recombinantBCG ,rBCG)。方法 以 pQE30 -CFP10 -ESAT6质粒为模板 ,通过PCR扩增 6 33bplhp -esat6基因 ,将该基因定向克隆到穿梭表达载体pJCH0 2中构建重组 pJCH0 2 -CFP10 -ESAT6质粒。用电穿孔法将重组质粒导入BCG菌构建rBCG ,将rBCG培养 2 3天 ,于收菌前 3天每天 4 5℃热诱导 4 5min ,对表达产物作SDS -PAGE及免疫印迹分析。结果 重组质粒 pJCH0 2 -CFP10 -ESAT6经酶切及测序证实构建成功 ,并在BCG中经热诱导成功表达出了具有CFP10及ESAT6抗原性的CFP10 -ESAT6融合蛋白。结论 成功构建能表达CFP10 -ESAT6融合蛋白的重组BCG ,为发展新型结核病疫苗奠定了基础。

人颗粒溶素与小鼠单链IL-12真核共表达质粒的构建及其在RAW264.7细胞中的表达

目的构建人天然颗粒溶素(Granulysin,GLS)和小鼠单链IL-12基因的真核共表达载体pZM02并在RAW264.7细胞中进行表达。方法将人GLS和小鼠单链IL-12基因同时克隆进多启动子真核共表达载体pBudCE4.1中,得到真核共表达质粒pZM02,以pZM02转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7,通过RT-PCR、免疫细胞化学和ELISA的方法检测目的基因的表达。结果在转染后的RAW264.7细胞中同时检测到了人GLS和小鼠IL-12的表达。结论人GLS能够与小鼠IL-12在小鼠巨噬细胞株RAW264.7中实现共表达,pZM02的成功构建为进一步研究GLS与IL-12的协同细胞免疫作用机制和免疫治疗作用奠定了基础。

结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗的免疫效果观察

目的:研究并比较结核分枝杆菌(H37Rv)Ag85B、MPT64DNA.以及两者的融合基因(AM)的免疫原性。方法:雌性C57BL/6小鼠25只,随机分为5组,即A组(PBS)、B组(peDNA3.1)、C组(pcDNA/Ag85B)、D组(pcDNA/MPT64)和E组(pcDNA/AM)。分别于胫前肌注射7.5 g/L利多卡因和质粒混合物(1:4,100μL,含质粒70μg/次),间隔2 wk免疫 1次,共3次。末次免疫后4 wk取血分离血清测定总IgG,同时分离脾淋巴细胞,用PPD刺激后分别做脾淋巴细胞增殖实验(MTT比色法)和测定脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ的水平。结果:Ag85B、MPT64和AM质粒DNA,均能诱导小鼠产生较高水平的PPD特异性IgG。免疫小鼠脾淋巴细胞体外经PPD刺激后,能产生特异性淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ。peDNA/AM组IFN-γ的分泌水平明显高于pcDNA/Ag85B和pcDNA/MPT64免疫组(P<0.05)。结论:结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗,能在小鼠体内诱导特异性细胞和体液免疫。

牛磺酸对白细胞介素－1β损伤的胰岛细胞分泌的影响

在Ｗｉｓｔａｒ新生大鼠离体培养胰岛细胞中定量观察了ＩＬ－１β对胰岛素分泌的抑制作用以及牛磺酸的反转效应。实验结果表明：①ＩＬ－１β（５～２０Ｕ／ｍｌ）可抑制胰岛β细胞的分泌功能，表现为胰岛素的基础分泌和葡萄糖刺激时的分泌量均明显减少。②经ＩＬ－１β处理的胰岛细胞加入牛磺酸共同孵育后，可见胰岛素的基础分泌量和糖刺激时的分泌量均显著增加，表明牛磺酸能反转ＩＬ－１β的抑制作用，并且这种反转效应有量效和时效关系。

结核分枝杆菌Ag85B与IL-12基因真核共表达质粒的构建及表达

目的 :构建结核分枝杆菌Ag85B和鼠IL 12基因的共表达载体pBud85B IL12。方法 :将结核分枝杆菌Ag85B基因和鼠IL 12基因同时克隆入含多启动子的共表达载体pBudCE4 .1中 ,构建真核共表达质粒pBud85B IL12。以pBud85B IL12转染COS 7细胞 ,通过RT PCR及ELISA方法检测目的基因的表达。结果 :在COS 7细胞中同时可检测到Ag85B和IL12的表达。结论 :pBud85B IL12共表达质粒的成功构建 ,为对其免疫原性。

GLS/IL-12重组耻垢分枝杆菌的构建及其在小鼠体内的表达

目的构建携带编码人天然颗粒溶素(GLS)和小鼠IL-12基因质粒(pZM03)的重组耻垢分枝杆菌,并经鼻黏膜免疫观察其在小鼠体内的表达。方法将人GLS和小鼠IL-12基因及分枝杆菌复制子OriM同时克隆进多启动子真核共表达载体pBudCE4.1中,得到穿梭质粒pZM03,以pZM03电转化耻垢分枝杆菌,再将该重组耻垢分枝杆菌滴鼻免疫Balb/c小鼠3次,第1次免疫后4周,处死小鼠,用免疫组化检测肺、脾组织中GLS表达,用ELISA检测血清IL-12和肺泡灌洗液特异性SIgA的水平。结果得到可表达GLS/IL-12重组耻垢分枝杆菌;在Balb/c小鼠肺、脾组织中均检测到重组耻垢分枝杆菌的分布,以及GLS的表达,并有血清IL-12水平升高和黏膜特异性SIgA的产生。结论成功构建GLS和IL-12修饰的重组耻垢分枝杆菌,该重组菌经鼻黏膜免疫小鼠后,可引起呼吸道黏膜特异性抗菌免疫,以及GLS和IL-12的体内表达,为新型疫苗的研究奠定了基础。

小鼠Ipr1基因与EGFP基因融合表达载体的构建及其在鼠巨噬细胞中的表达

目的:构建小鼠胞内病原体抗性基因1(Ipr1)基因与EGFP基因融合表达载体,观察小鼠Ipr1基因在小鼠巨噬细胞株RAW 264.7中的表达。方法:从C57BL/6J小鼠胸腺组织提取总RNA,以RT-PCR法调取Ipr1基因编码序列,克隆至pEGFP-C1载体中,筛选阳性克隆作PCR、酶切及测序鉴定后得到pEGFP-Ipr1,脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW 264.7,以空质粒pEGFP-C1转染组作为对照。采用RT-PCR法检测Ipr1的RNA水平表达及用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的表达及细胞内定位。结果:扩增出小鼠Ipr1基因编码序列,经PCR、酶切及测序鉴定证明得到正确的重组质粒pEGFP-Ipr1,脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW 264.7得到了成功表达,Ipr1基因表达产物定位于细胞核内。结论:成功地调取小鼠Ipr1基因,构建了小鼠Ipr1基因与EGFP基因融合表达载体并在小鼠巨噬细胞株RAW 264.7得到了成功表达。Ipr1编码蛋白定位于细胞核内,提示其是一种调节蛋白。

结核分枝杆菌Ag85B和MPT64基因疫苗的免疫原性比较

目的 :研究并比较结核分枝杆菌 (H37Rv)Ag85B和MPT6 4DNA疫苗免疫学特性 .方法 :雌性C5 7/6小鼠 2 0只 ,随机分为 4组 .A组 (PBS)、B组 (pcDNA3.1)、C组 (pcDNA/Ag85B)、D组 (pcDNA/MPT6 4 ) ;分别于胫前肌注射 7.5g·L-1利多卡因和质粒混合物 (1∶4 ,5 0 μL) ,含质粒 70 μg/次 ,末次免疫后 4wk收集血清测总IgG ,分离脾淋巴细胞用PPD刺激后分别作脾淋巴细胞增殖实验 (MTT法 )和测上清中IFN γ 含量 .结果 :Ag85B和MPT6 4基因疫苗均能诱导小鼠产生特异性的IgG(平均滴度为 1∶80和 1∶6 0 )、脾淋巴细胞增殖 (比值≥ 2 )和IFN γ 的分泌 (Ag85B 176 2ng·L-1;MPT6 4 15 2 3ng·L-1) ,其淋巴细胞增殖和IFN γ 的分泌水平 ,Ag85B优于MPT6 4 .结论 :Ag85B和MPT6 4DNA疫苗均能诱导小鼠产生特异性细胞免疫和体液免疫 .

耻垢分枝杆菌与卡介苗作为载体在鼠结核病治疗中的作用比较

目的比较耻垢分枝杆菌(MS)与卡介苗(BCG)作为载体在鼠结核病治疗中的作用。方法分别以不同剂量的MS和BCG免疫BALB/c小鼠,观察二者的致病作用。以结核分枝杆菌H37Rv感染BALB/c小鼠4周后,分别用生理盐水、MS、GLS/IL-12、重组MS、BCG及GLS/IL-12重组BCG治疗6次,于第6次治疗后7d处死小鼠,检测肺、脾荷菌量、血清IL-12和IFN-γ水平、脾淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的水平及肺、脾组织中颗粒溶素表达,并观察小鼠肺组织病理改变。结果重组MS和重组BCG组器官荷菌量明显低于MS和BCG组;重组MS和重组BCG组血清IL-12和IFN-γ水平明显高于MS和BCG组,MS和BCG组明显高于生理盐水组;重组MS和重组BCG组脾淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的水平明显高于其他组;MS与BCG组比较,重组MS与重组BCG比较,荷菌量、病理变化、肺、脾中的IL-12和IFN-γ水平差异均无显著意义;淋巴细胞中的IFN-γ和TNF-α水平,MS与BCG组差异有显著意义,而重组MS与重组BCG组差异无显著意义;重组MS和重组BCG组在肺、脾中均有颗粒溶素表达;MS所致病变比相同剂量BCG轻。结论MS与BCG一样,可将要表达的基因靶向递送到相应的组织,并诱导特异性细胞免疫,同时其在体内的副作用低于BCG,因此可作为良好的有机载体。

结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因的构建表达

目的 :构建结核分枝杆菌 (H37Rv)Ag85B MPT6 4融合基因并在真核细胞中表达 .方法 :采用序贯PCR(geneSOEing)法将Ag85B和MPT6 4编码基因用疏水甘氨酸接头(Gly4Ser) 3经PCR扩增融合 ,定向克隆入 pcDNA3.1(+)中 .采用脂质体转染法将pcDNA/Ag85B MPT6 4 (pcDNA/AM )转染COS 7细胞 ,用RT PCR、ELISA和斑点印迹法检测其表达 .结果 :Ag85B MPT6 4融合基因经双向DNA序列测定 ,碱基突变率为 0 .11%(2 /170 7) ,突变为无意义突变 ;重组质粒转染COS 7细胞后经检测证实 ,该融合基因能在真核细胞中表达 .结论 :成功地构建了Ag85B MPT6 4融合基因并在真核细胞中表达 。

糖原测定法诊断女性生殖道沙眼衣原体感染

用糖原测定法诊断生殖道沙眼衣原体(Ct)感染。用蒽酮法检测女性生殖道上皮细胞内糖原的含量,并与诊断沙眼衣原体感染的聚合酶链反应(PCR)法作比较。320例宫颈标本的检测结果与 PCR 比较,糖原测定法诊断 Ct感染的敏感性为84.8%,特异性为96.5%.糖原测定法是一种简便、快速的诊断 Ct 感染的方法,适宜基层医疗单位采用。