基于竹节参转录组的SSR分子标记开发和鉴定

目的:开发鉴定竹节参SSR分子标记,深入研究竹节参的遗传多样性。方法:基于竹节参转录组数据,利用MISA软件进行SSR序列的查找及特征分析;并根据SSR两翼序列设计引物,优化反应体系,以5种不同居群的竹节参为模板检测SSR引物的多态性。结果:在竹节参转录组的66 403条unigenes中找到12 244个SSR位点,共分布于10 299条unigenes中,SSR发生频率为15.51%;SSR重复基序则以2、3、5、6重复类型为主,各自最多的重复单位分别为:AT/AT(44.87%)、AAG/CTT(24.00%)、AAAAT/ATTTT(19.28%)、AAAAAT/ATTTTT(6.54%)。设计30对SSR引物进行PCR扩增,24对可扩增得到特异性条带;通过竹节参样品检测引物多态性,最终获得18对稳定的多态性SSR引物。结论:竹节参的SSR位点类型丰富,分布密集,将为竹节参及其近缘种的分子鉴定和遗传多样性研究奠定分子基础。

湖北枣阳烟区烟叶赤星病病原鉴定

为明确湖北枣阳烟区烟草赤星病病原菌的种类,给产区综合防治烟草赤星病提供依据。从枣阳烟区采集典型烟草赤星病样本进行病原菌分离,在致病性测定的基础上通过形态学和分子生物学方法对病原菌进行鉴定。结果显示,分离出的菌株ZY-1为烟草赤星病病原菌,其分生孢子卵形或椭圆形,褐色,具有3~6个横隔膜和1~4个纵隔膜,分生孢子链较短呈树状,多分枝,病原菌rDNA-ITS序列分析结果表明,菌株ZY-1与链格孢(A.alternata)同源性最高,达100%。结合形态学和分子生物学鉴定结果,确定为链格孢(A.alternata),这是首次在湖北枣阳烟区发现由链格孢(A.alternata)引起的烟草赤星病。

国家级一流本科专业建设背景下制药工程专业多维递进式实践教学模式的构建研究

实践教学是高等学校教学工作的重要环节,对提高学生的实践能力、培养创新精神举足轻重。武汉轻工大学制药工程专业在国家一流本科专业建设背景下,探索制药工程专业实践教学横向层面和纵向深度“三层次五方位”实践教学模型,构建与制药相关行业发展相适应的多维递进式实践教学模式,培养制药工程专业学生的创新素质和实践能力,服务地方乃至全国的制药产业。

灰葡萄孢分泌蛋白BcSGP1的功能研究

由灰葡萄孢(Botrytis cinerea)引起的灰霉病害可造成农作物严重减产,而分泌蛋白在灰葡萄孢的侵染过程中起着重要作用。但迄今为止,对灰葡萄孢分泌蛋白功能和作用机理的研究仍有待进一步的深入。本研究从灰葡萄孢侵染时期的分泌蛋白组中筛选到1个分泌蛋白BcSGP1,该基因在灰葡萄孢侵染期上调表达。将BcSGP1基因敲除后,基因敲除转化子的致病力降低,但生长速度、产孢量和抗逆性没有变化。通过农杆菌注射法在本氏烟草叶片中瞬时表达BcSGP1后能引起叶片坏死,并且其诱导植物坏死的活性依赖于植物中的类受体激酶BAK1,但不依赖于类受体激酶SOBIR1。此外,BcSGP1还能诱导植物对灰葡萄孢的抗病性。以上结果表明,BcSGP1是一个致病相关分泌蛋白,并参与诱导植物的抗性,在灰葡萄孢与植物互作中起着重要作用。研究结果增强了对灰葡萄孢致病机制的理解,为灰霉病害的有效防治提供理论依据和基因资源。

茯苓细胞色素P450基因PcCYP的克隆与序列分析

目的筛选与茯苓Poriacocos生长发育相关的细胞色素P450基因序列,进一步丰富对茯苓生长发育理解。方法通过分子克隆到1个茯苓细胞色素P450基因Pc CYP,并利用在线工具分析其序列,预测蛋白的理化性质、结构域等分子特征;利用MEGA5.0分别对氨基酸进行多序列比对和进化关系分析,并采用q RT-PCR方法检测不同发酵培养时间6、8、10d的相对表达量。结果从茯苓中克隆到的Pc CYP存在可变性剪切,2个选择性剪切体PcCYP1和Pc CYP2CDS区长度分别为1590、1542bp,分别编码529、513个氨基酸。氨基酸序列分析发现其均具有保守的P450结构域,且具有信号肽和多个磷酸化修饰位点,属于分泌型的不稳定亲水蛋白。氨基酸序列多重比对及系统发育树结果显示PcCYP与担子菌Coprinopsis cinerea的CYP502距离最近,推测PcCYP和CYP502具有相似功能,即参与调控茯苓子实体的发育。定量PCR结果显示,选择性剪接变体Pc CYP1的表达量较Pc CYP2低,因此PcCYP2是Pc CYP基因的主要剪接体。结论Pc CYP与茯苓子实体的生长发育密切相关,为进一步研究Pc CYP在茯苓生长发育、遗传规律及育种等方面的生物学功能奠定基础。