五味甘露自发热凝胶贴的制备及抗炎活性研究

目的:对水凝胶基质配方进行优化,并进行热源复合,制备五味甘露自发热凝胶贴并评价其抗炎作用。方法:通过Box-Behnken设计响应面法优化五味甘露凝胶贴的基质处方,并以流变学指标和感官指标作为评价标准,以甘羟基铝、吐温80、羧甲基纤维素钠的用量为考察因素,对五味甘露凝胶贴的基质处方进行优化。采用小鼠耳廓肿胀炎症模型评价五味甘露自发热凝胶贴的抗炎效果。结果:筛选的五味甘露自发热凝胶贴的基质处方为:7.5%聚丙烯酸钠NP800,0.26%甘羟基铝,0.05%二乙胺四乙酸钠,4.6%滑石粉,0.38%二氧化钛,37.52%甘油,1.69%羧甲基纤维素钠,2.35%吐温80,0.28%酒石酸,42.87%水,五味甘露干粉含量为2.5%。五味甘露自发热凝胶贴治疗小鼠耳廓肿胀具有显著的疗效。结论:优化后制备的五味甘露自发热凝胶贴可以解决软膏剂水凝胶贴黏附力差、药物渗透性弱、使用不便等问题。同时对小鼠耳廓肿胀炎症模型的治疗作用优于不复合热源的五味甘露凝胶贴。

网络药理学结合谱效关系及分子对接探讨五味甘露抗炎物质基础及作用机制

目的基于网络药理学结合谱效关系及分子对接,探讨五味甘露抗炎的物质基础及作用机制。方法利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、Genecards、Pubchem、UniProt、中国学术期刊全文数据库(CNKI)等数据库筛选五味甘露的活性成分及抗炎的作用靶点,利用STRING数据库、Cytoscape3.7软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络并筛选核心靶点,利用Metascape数据库进行基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。将细胞炎症模型与高效液相色谱法相结合分析五味甘露不同极性部位的抗炎活性和药效成分。采用Discovery Studio Lib Dock软件将主要药效成分与核心靶点进行分子对接,并进行可视化分析。结果网络药理学分析共获取五味甘露抗炎成分125个,潜在抗炎靶点251个,得到核心靶点131个,包括肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)重要靶点。KEGG通路富集分析,共富集到20条相关通路,其中涉及基因较多的包括脂质与动脉粥样硬化和类风湿性关节炎(RA)等通路,诸多通路均涉及NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)核心靶点。五味甘露的醋酸乙酯相能够抑制炎症相关的NLRP3、IL-1β、TNF的表达,且其中总黄酮含量最高,为(305.0±11.4)mg·g^(-1)。LC-MS图谱分析和分子对接实验显示醋酸乙酯相中山柰酚、杨梅素、异荭草素、异槲皮苷和黄芪苷等黄酮类物质的离子强度远远高于单味药材且其母核结构与NLRP3受体蛋白的7个氨基酸活性位点有显著的相互作用。结论五味甘露抗炎的主要物质为黄酮类,可通过抑制NLRP3炎症小体的活化起到抗炎作用。

五味甘露水提工艺的优化及其抗炎机制的研究

目的 优化五味甘露的水提工艺及探究其抗炎机制。方法 在单因素的基础上,对料液比、提取时间和水提次数进行考察,采用正交试验-细胞药效学综合评分法对工艺进行评价。采用动物实验评价五味甘露水提物的药效。结果 五味甘露的最优水提工艺为:浸泡时间8 h,料液比1:12,提取时间60 min,提取温度60℃,水提3次。五味甘露可显著抑制炎症因子肿瘤坏死因子α和炎症小体NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 mRNA水平的表达,对大鼠足跖肿胀也具有显著的抑制效果。结论 优化的藏药五味甘露水提工艺稳定、可行,可为其在临床应用治疗关节炎提供依据。

限制活动加剧2型糖尿病小鼠肠道菌群和糖脂代谢紊乱

【背景】久坐行为在2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者群体中广泛存在,对于患者的血糖控制具有严重的不良影响,但是其具体机制还缺乏较为完善的阐述。【目的】通过限制小鼠活动模拟久坐行为,从而阐明久坐导致2型糖尿病小鼠糖脂代谢紊乱加剧的具体机制,为相应的健康教育和干预提供一定的理论基础。【方法】利用C57BL/6J雄性小鼠构建糖尿病模型,小鼠随机分为3组:正常组(CON)、2型糖尿病模型组(MOD)和2型糖尿病限制活动组(SED),通过限制小鼠活动的方法使其进行8周的久坐行为;采用试剂盒和形态学观察法测定小鼠糖脂代谢紊乱情况;HE和PAS染色观察小鼠回肠组织受损情况;采用RT-qPCR法测定小鼠粪便微生物的变化;采用TBA试剂盒测定小鼠血清和肝脏中总胆汁酸含量;分别通过荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blotting测定小鼠回肠和肝脏组织中法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)和G蛋白偶联胆汁酸受体5(G protein coupled bile acid receptor 5,TGR5)的mRNA和蛋白表达水平。【结果】与正常组相比,模型组小鼠血糖升高、血脂增加、胰岛素抵抗和口服葡萄糖耐量紊乱,而且肠道病理学变化明显,限制活动使T2DM小鼠糖脂代谢紊乱增加(P<0.05);T2DM小鼠肠道菌群失调,在门和属水平上的有益菌减少、有害菌增加,限制活动加剧了这一情况;与正常组相比,T2DM小鼠血清和肝脏组织中总胆汁酸含量增加,限制活动组总胆汁酸进一步增加(P<0.05);模型组小鼠胆汁酸受体FXR和TGR5表达较正常组显著降低(P<0.01),限制活动后进一步抑制了这些受体的表达。同时,Spearman相关性分析也显示小鼠糖脂代谢水平与肠道菌群及肠道菌群代谢物胆汁酸存在显著相关性。【结论】限制活动致使T2DM小鼠糖脂代谢紊乱加剧,其机制可能与肠道菌群和胆汁酸代谢失调,以及胆汁酸受体的进一步下调有关。

藏法合成人工牛黄促进糖尿病创伤愈合的机制研究

目的评价藏法合成的人工牛黄促糖尿病创伤愈合的作用,并探讨其机制。方法通过RAW264.7细胞炎症模型,观察藏法人工牛黄对抗炎因子表达的影响。建立糖尿病大鼠创伤模型,评价藏法人工牛黄对糖尿病创伤的治疗效果。结果藏法人工牛黄在体外可显著促进RAW264.7炎症细胞中白细胞介素(IL)-10mRNA的表达,体内可显著促进创伤组织中IL-10和精氨酸的表达,增加创伤处M2型巨噬细胞的数量,降低IL-1β、肿瘤坏死因子α的表达,促进糖尿病创伤愈合。结论藏法人工牛黄可能是通过促进糖尿病创伤部位巨噬细胞向M2型转化、分泌抗炎因子并抑制促炎症因子的表达来促进创伤的愈合。研究结果为藏法人工牛黄在慢性创伤临床治疗上的应用提供了依据。