无刺枸骨果实化学成分及其抗氧化和抑菌活性研究

[目的]探究无刺枸骨果实的化学成分及功能,为种质资源的开发利用提供基础。[方法]利用正丁醇、乙酸乙酯和石油醚等萃取剂对无刺枸骨果实成分进行萃取,并采用2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)法、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法和滤纸片抑菌法测定其萃取物的抗氧化与抑菌活性;结合气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术对正丁醇萃取物的化学组分进行鉴定。[结果]无刺枸骨果实甲醇粗提取物的正丁醇、乙酸乙酯和石油醚萃取物对ABTS和DPPH自由基均有明显的清除作用,且清除率与萃取物浓度间呈线性正相关。抑菌试验结果表明:正丁醇提取物对于所有菌株均具有极显著的抑菌作用,且是3种萃取剂中抑菌作用最强的;而乙酸乙酯萃取物对于枯草芽孢杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和变形杆菌也具有极显著抑菌作用;石油醚萃取物对枯草芽孢杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和变形杆菌抑制作用显著。结合GC-MS与UPLC-QTOF/MS技术,本文首次证实无刺枸骨果实含有抗氧化与抑菌活性的药用成分——绿原酸。[结论]本研究首次采用多种萃取剂对无刺枸骨果实成分进行萃取和鉴定,并通过试验证明其萃取物具有显著的抗氧化和抑菌活性,该结果为无刺枸骨果实资源的开发利用提供了数据支持。

肺炎链球菌耐药相关蛋白Sp_0010生物信息学分析及结晶尝试

目的克隆表达肺炎链球菌中一个潜在β-内酰胺酶基因SP_0010并进行晶体学研究和生物信息学分析,以期阐明该蛋白的生理功能,为其疫苗研究奠定基础。方法从数据库中查询获得肺炎链球菌TIGR4菌株基因SP_0010及其编码蛋白Sp_0010的序列信息,利用生物信息学分析软件对Sp_0010的生物学功能进行预测和分析;利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导已构建的菌株Rosetta(DE3)/pET28a(+)-SP_0010中目标蛋白Sp_0010表达,经Ni2+柱亲和层析、分子筛纯化及浓缩后用晶体初筛试剂盒进行初筛,对筛出的蛋白Sp_0010晶体进行优化。结果基因SP_0010编码422个氨基酸残基,生物信息学分析显示其编码蛋白Sp_0010具有信号肽,是一种表达后分泌至细胞外的亲水性蛋白;同源建模显示Sp_0010具有N端和C端两个结构域,且C端结构域形成具有"β-内酰胺酶折叠类似"结构;抗原表位分析表明Sp_0010含有7个优势抗原表位,具有免疫原性;晶体筛选显示Sp_0010的初试结晶条件为25%polyethylene glycol 3350,0.2mol/L MgCl2,0.1mol/L Hepes,pH 7.5。结论蛋白Sp_0010可在大肠杆菌中重组表达,表达蛋白可形成晶体,这为研究其结构与功能奠定了基础。