2009年山东H9N2亚型禽流感M基因的分子进化分析及对哺乳动物致病性的研究

根据GenBank公布的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)M基因序列设计引物,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增H9N2亚型禽流感病毒M基因,并与GenBank中AIVM基因序列进行了同源性比较和氨基酸编码分析,绘制了M基因的系统发育进化树。结果表明:这6株病毒的M基因的核苷酸同源性在95.9%～99.4%。M1蛋白的同源性在97.6%～99.6%。M2蛋白的同源性在95.1%～100%。进化分析这6株病毒都属于A/Quail/Hong-Kong/G1/97(G1)-like分支。这6株病毒的M2蛋白的第31位氨基酸存在S→N(AGT→AAT)的变异,都具有金刚烷胺的抗性。以106EID50的剂量,将H9N2病毒鼻腔感染BALB/c小鼠,结果表明H9N2亚型流感病毒可以对哺乳动物小鼠可使得体重下降,也可致死。上述结果对于揭示H9N2亚型禽流感流行规律和病毒的致病机理具有一定的意义。

2006年至2010年山东省鸡传染性支气管炎病毒分子变异的研究

为研究山东省鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的遗传变异规律,本研究2006年～2010年从山东省发病的商品鸡中分离鉴定了17株IBV,并对其S1基因、N基因和M基因分别进行RT-PCR扩增、测序及遗传进化分析。序列分析结果表明:与疫苗株H120相比,17个分离株S1蛋白的变异程度较大,存在广泛的基因突变和氨基酸替代,多数病毒株还存在氨基酸的插入;N蛋白无碱基的缺失和插入,仅存在核苷酸的突变和氨基酸的替代;M蛋白除病毒株CK/CH/SD09/005插入3个碱基外,其它16个分离株仅存在少数的碱基突变和氨基酸替代。S1基因、N基因和M基因的系统进化分析结果表明多数分离株的3个基因在进化上相对平行,与国内分离株LX4同属一个进化分支,同源性较高;分离株SDYT0605的3个基因与疫苗株H120同源性较高,可能是免疫压力下变异的疫苗株;分离株SDTA06111、SDWF0608和CK/CH/SD09/005的S1基因、N基因和M基因分属于不同的进化分支,可能发生了基因重组。本研究结果显示基因突变、插入和不同基因之间的重组是免疫压力下IBV变异的主要方式。

不同日龄肉鸡感染网状内皮增生症和传染性贫血动态分布及抗体产生规律

为了解禽网状内皮增生症(REV)和传染性贫血(CAV)在商品肉鸡中的感染情况,对某鸡场不同日龄商品肉鸡,通过斑点杂交和ELISA,对这两种免疫抑制病进行抗原和抗体检测。结果表明:137份病料中REV感染率为2.19%,高于CAV的感染率(1.46%),相对应的90份血清样品中REV抗体水平都低于相同日龄CAV抗体水平(42日龄除外),且都低于50%。这些检测结果为该商品肉鸡制定合理的免疫程序提供可靠生物学背景,具有重要的兽医临床指导意义。

氟苯尼考制剂中磺胺二甲嘧啶和磺胺间甲氧嘧啶检测方法的研究

为建立测定氟苯尼考制剂中非法添加的磺胺二甲嘧啶（SM2）和磺胺间甲氧嘧啶（SMM）高效液相色谱分析方法,本研究使用C18色谱柱,以乙腈-0.2%冰醋酸溶液（27∶73）作为流动相进行等度洗脱（流速1.0 mL/min）;采用二极管阵列检测器,检测波长270 nm;进样量20μL。结果表明,磺胺二甲嘧啶（SM2）和磺胺间甲氧嘧啶（SMM）分别在进样浓度为31.25~500.00μg/mL和12.50~200.00μg/mL范围内呈良好线性关系（r2分别为0.9996和1.0000）;平均回收率分别为98.6%（SM2）和99.8%（SMM）;检出限分别为0.125μg/mL（SM2）和0.225μg/mL（SMM）。建立的方法简便、准确、可行,适用于氟苯尼考制剂中非法添加的磺胺二甲嘧啶和磺胺间甲氧嘧啶的检测。

高效液相色谱法测定盐霉素预混剂中盐霉素A的含量

建立了测定盐霉素预混剂中盐霉素A含量的高效液相色谱分析方法。采用C18色谱柱,甲醇-水-冰醋酸(94∶6∶0.1)等度洗脱,甲醇-硫酸-香草醛(95∶2∶3)为衍生试剂,流速0.7 mL/min;衍生温度98℃;检测波长520 nm;进样量20μL。结果表明,盐霉素A在0.4～0.6mg/mL范围内线性关系良好(r2=0.9998),平均回收率100.6%。该方法简便、准确、可行。

6株H9N2禽流感病毒分子进化及对小鼠的致病性

2009年从山东不同地区的规模化肉鸡场中分离到6株H9N2亚型流感病毒,对其分子特征进行分析,发现6株病毒可以分为2个不同的基因型,并且其中一个基因型是CK/SH/F/98(H9N2)和CK/SH/Y2/2008(H9N2)的重组病毒。为阐明H9N2流感病毒对哺乳动物致病性,分别以106 EID50剂量攻毒6周龄BALB/c雌性小鼠,6株病毒都能在小鼠肺脏中复制,而且2株病毒能在攻毒7d后引起小鼠死亡。结果表明,H9N2亚型流感病毒对哺乳动物毒力有增强趋势。