索拉菲尼诱导的细胞凋亡和自噬对HeLa细胞耐药性的影响

目的 探究索拉菲尼(sorafenib)通过细胞凋亡和自噬对人宫颈癌细胞系HeLa增殖的影响,及对HeLa细胞耐药性的影响。方法 用间歇诱导法构建耐药细胞株,以0、2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0μmol/L为梯度的索拉菲尼处理HeLa细胞,每个浓度维持1周,并筛选出可稳定传代的耐药细胞株;MTT法检测索拉菲尼对细胞增殖的影响;流式细胞术分析细胞周期分布情况;RT-qPCR检测亲本株和耐药株在不同药物浓度下耐药和凋亡基因表达水平的变化。Western blot检测与自噬相关的标志物蛋白LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ的变化。结果 成功获得稳定的耐药株;经药物处理的细胞更多的被阻滞在G1期。在耐药细胞中,凋亡抑制基因Bcl-2表达量显著降低;凋亡基因Bax表达量明显增加;耐药基因表达明显升高。Western blot中耐药细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著高于亲本细胞(P<0.05)。结论 索拉菲尼通过阻滞细胞周期抑制HeLa细胞增殖并诱导其自噬。细胞自噬在宫颈癌治疗过程中可能参与了细胞耐药的发展,促进细胞存活;在一定程度下,药物诱导的细胞自噬能激活耐药细胞的凋亡信号通路,促进细胞耐药逆转。