金雀异黄素在去卵巢非酒精性脂肪性肝病小鼠模型中的保护作用及机制

目的探讨金雀异黄素(Genistein)在去卵巢(OVX)小鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的保护作用及机制。方法取40只6周龄雌性C57BL/6小鼠建立OVX小鼠模型,随机分为5组,每组8只,分别为对照组、模型4周组、模型6周组、模型8周组、模型10周组。相同环境下,采用高脂饮食对5组OVX小鼠进行饮食造模,病理学检查显示,经10周高脂饮食诱导NAFLD成功。另取40只6周龄雌性C57BL/6小鼠随机分为5组:空白组、假手术(Sham)组、OVX组、OVX+L-Genistein(4 mg/kg体质量)组、OVX+H-Genistein(8 mg/kg体质量)组。Sham组进行相同的OVX手术过程,但不结扎卵巢动脉和切除卵巢。空白组小鼠正常饮食喂养,其余各组供给高脂饮食。将Genistein溶解在DMSO中,Sham组和OVX组的动物仅用溶媒溶液处理,所有小鼠每天灌胃给药1次,持续10周。记录小鼠体质量及脏器指数,处死小鼠并收集血清及肝组织。试剂盒检测血清ALT、AST活性及TG、TC水平。HE和油红O染色观察肝组织病理。通过Western Blot分析肝组织中脂质代谢相关的固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1c)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)的蛋白表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两组间比较采用Dunnett-t检验。结果高脂饮食10周后,Genistein低、高剂量组的体质量、肝指数和肝质量均低于OVX组(P值均<0.05)。此外,Genistein显著下调了血清TC、TG水平(P值均<0.05),降低了血清中AST和ALT活性(P值均<0.05)。HE和油红O染色结果表明,Genistein低、高剂量组较OVX组脂滴累积明显减少。Western Blot分析结果显示,给予Genistein干预后,SREBP-1c的蛋白表达量明显下降,PPARα的蛋白表达量明显升高(P值均<0.05)。结论Genistein对OVX小鼠NAFLD具有保护作用,其部分作用机制可能与调节SREBP-1c、PPARα的表达有关,从而促进脂肪酸氧化和抑制肝脏脂质合成。

甘草酸对大鼠体内硝苯地平药动学的影响

目的:研究甘草酸对大鼠体内硝苯地平药动学的影响。方法:将大鼠随机分为实验组和对照组,每组10只。实验组大鼠灌胃甘草酸5 mg/kg,对照组灌胃等量的0.5%羧甲基纤维素钠溶液,每日1次,连续给药14 d,第14天灌胃30 min后,2组大鼠均灌胃硝苯地平3 mg/kg,并于灌胃硝苯地平前与灌胃后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24 h眼内眦静脉丛采血0.5 m L。采用高效液相色谱法,以地西泮为内标,测定其中硝苯地平的浓度;色谱柱为ODS-C18;流动相为甲醇-水(62∶38,V/V,乙酸调p H为4.5);流速为1.0 m L/min;柱温为30℃;检测波长为238 nm;进样量为20μL。使用Winonlin 6.0软件计算药动学参数,t检验进行统计分析。结果:实验组和对照组大鼠体内硝苯地平的主要药动学参数tmax分别为(1.40±0.15)、(1.50±0.01)h;cmax分别为(0.15±0.03)、(0.29±0.09)mg/L;t1/2分别为(4.70±1.17)、(5.20±1.38)h;AUC0-24 h分别为(1.00±0.10)、(1.89±0.37)mg·h/L;AUC0-∞分别为(1.00±0.16)、(1.98±0.32)mg·h/L;MRT分别为(6.76±0.64)、(6.60±1.36)h。与对照组比较,实验组大鼠体内硝苯地平的cmax、AUC0-24 h、AUC0-∞均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:甘草酸可能会降低硝苯地平在大鼠体内的生物利用度,两药联用时建议增加硝苯地平的剂量以达到有效的血药浓度。

高脂饮食诱导CYP4A高表达参与小鼠非酒精性脂肪肝病程研究

目的:探讨细胞色素P4504A(CYP4A)在非酒精性脂肪肝(NAFLD)中的调节作用,并检测其在脂肪肝中的变化。方法:高脂乳剂灌胃C57BL/6小鼠方法建立NAFLD动物模型,分对照组和高脂乳剂灌胃组,高脂乳剂灌胃组又分别设4、6、8、10周组。肝组织切片进行HE染色。生化试剂盒检测小鼠血清TG、ALT、AST、MDA、SOD的含量变化;Western blot法检测肝组织CYP4A的变化;液相色谱-串联质谱法(LC/MS/MS)检测花生四烯酸经CYP4A羟基化产物20-羟基二十烷四烯酸(20-HETE)的含量;冰冻切片免疫荧光法检测肝组织活性氧的荧光强度。结果:肝组织HE染色显示脂肪空泡于第10周出现。高脂乳剂灌胃C57BL/6小鼠后血清TG、ALT、AST和MDA的含量随高脂乳剂灌胃时间的延长而逐渐升高,而SOD水平显示下降的趋势。肝组织中CYP4A和20-HETE的表达量随着肝脏脂质堆积而增多。肝组织活性氧的荧光强度表现为第10周最强。结论:CYP4A参与NAFLD时的脂质代谢使花生四烯酸代谢产物20-HETE合成增多,同时诱导活性氧的产生导致氧化应激从而促进脂质过氧化。