泛素连接酶LNX对上皮细胞间连接的影响

为阐明泛素连接酶LNX在维持上皮细胞之间连接的作用,构建了四环素诱导表达LNX的MDCK细胞株;以免疫荧光法观察细胞连接蛋白E-钙黏素和ZO-1在细胞内的分布,发现LNX的表达使E-钙黏素和ZO-1在细胞内的分布发生明显改变,大量E-钙黏素和ZO-1聚集在胞浆中,而在细胞膜上的分布则明显减少;透射电镜观察上皮细胞间连接的超微结构显示,LNX的表达导致紧密连接和黏附连接的正常结构消失;用钙离子转换实验检测黏附连接的形成发现,表达LNX的MDCK细胞间的黏附连接形成的速度明显滞后于正常细胞.上述结果表明,LNX的表达影响了E-钙黏素在细胞膜上的正常分布,从而延迟黏附连接复合体的形成,导致上皮细胞间连接结构的异常.

急性肾损伤向慢性肾脏病转化中肾小管上皮细胞损伤修复机制的研究进展

急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)是由各种因素引起的以肾功能短期内急剧下降为主要表现的临床综合征,是慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)和终末期肾脏病(end-stage renal disease,ESRD)的独立危险因素。目前对于AKI及预防AKI发展为CKD的治疗手段非常有限,发病率和病死率居高不下。因此进一步探讨AKI向CKD进展的机制,从而发现早期干预靶点变得尤为重要。在面临各种生物压力时,例如缺血、缺氧或药物毒性等,肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)是最容易受到损伤的细胞,同时,RTECs也是驱动急性到慢性肾脏疾病进展的关键细胞。本文概述在AKI及AKI向CKD转化的过程中RTECs损伤修复的作用及机制的最新进展。

Notch通路在高浓度葡萄糖腹膜透析液所致大鼠腹膜纤维化模型中的活化

目的观察Notch通路在高浓度葡萄糖透析液所致大鼠腹膜纤维化模型中的变化并探讨其可能机制。方法给予sD雄性大鼠每日腹腔注射高浓度葡萄糖腹膜透析液，于实验后2周和4周杀检。取壁层腹膜组织行光镜检查；免疫印迹检测转化生长因子β1（TGF—β1）、E钙黏蛋白（E-cadherin）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）的表达；RT-PCR检测Notch通路的下游靶基因Hes-1的表达；免疫印迹和RT．PCR检测Notch配体Jagged-1和Notch通路的负性调节因子Numb的表达。结果HE染色显示模型组腹膜明显增厚，间皮细胞减少；Masson染色显示壁层腹膜中可见明显的胶原沉积。与健康对照组相比，模型组的TGF-β1、α-SMA和ColⅠ的表达增加而E-cadherin的表达下降（均P〈0．01）。4周模型组与对照组相比Jagged-1表达明显增加（P〈0．05），同时Hes-1的表达亦明显增加（P〈0.01），而Notch通路的负性调节因子Numb的表达下降（P〈0．01）。结论在高浓度葡萄糖腹膜透析液所致的大鼠腹膜纤维化模型中有Notch通路的活化，而该通路的活化可能与Notch通路的负性调节因子Numb表达的下调有关。高表达Notch通路的负性调节因子，如Numb，可能是治疗腹膜透析患者腹膜纤维化的新途径。

Numb基因在大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中的作用

目的探讨Numb在大鼠。肾小管上皮细胞转分化过程中的作用。方法重组人转化生长因子p1（TGF-β1）刺激大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E细胞），不同浓度TGF-β1（0、1、5、10、15、20μg/L）作用48h与TGF-β110μg/L作用不同时间（0、24、48、72h）后，采用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光染色分别检测NRK52E细胞内E钙黏蛋白（E—cadhefin）、仅平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Numb的表达。采用RNA干扰技术下调Numb表达，Western印迹观察改变Numb水平对E—cadherin、α-SMA蛋白水平的影响。结果TGF-β1以剂量及时间依赖的方式诱导NRK52E细胞E—cadhefin蛋白表达下调，α-SMA蛋白表达增高。Numb蛋白的表达随TGF-β1浓度的增加而增高，在5、10、15和20μg/L时分别为0μg/L时的1．33倍（P=0．024）、1．39倍（P=0．035）、1．45倍（P=0．025）和1．51倍（P：0．000）。而Numb蛋白和mRNA的表达亦随TGF—β1作用时间的延长而增高，作用24h、48h、72h，Numb蛋白分别为0h的1．48倍（P=0．046）、1．54倍（P=0．011）、1．79倍（P=0．028），NumbmRNA分别为0h的1．56倍（P=0．012）、1．82倍（P=0．008）、1．82倍（P=0．002）；同时Numb的分布也发生了改变，大量聚集在胞质中。下调Numb表达可以显著抑制TGF-β1诱导的d，SMA表达上调（为Numb表达正常时的18．1％，P=0．004）、E—cadhefin表达下调（为Numb表达正常时的2．19倍，P=0．004）。结诊Numb可以佴讲肾小管卜席绷朐岢牮转分化。