16S rRNA基因序列分析法鉴定病原细菌

目的:运用16S rRNA基因序列分析法鉴定14种细菌,为该方法的临床应用奠定基础。方法:提取细菌DNA,采用通用引物PCR扩增16S rRNA基因片段并测序。将测序结果用Blastn在线软件在Nucleotide数据库中进行序列同源性比对,根据序列同源性鉴定病原细菌。结果:12种细菌可以鉴定到"种",2种细菌可以鉴定到"属"。结论:16SrRNA基因序列分析是一种有效的病原细菌鉴定方法。

转基因植株的分子检测方法概述

从个体或组织水平、DNA水平、RNA水平和蛋白质水平概述了检测转基因植株的各种方法及应用情况 ,并作了简要评价。

帕金森病相关蛋白质LRRK2在脑中的表达分布与定位分析

帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种最常见的神经退行性运动障碍,常染色体显性遗传PD可由LRRK2(leucine-rich repeat kinase 2)基因突变引起.原核表达和纯化得到LRRK2多肽与GST的融合蛋白,免疫新西兰雄兔,得到了anti-LRRK2兔多克隆抗体.抗体用途分析实验表明,自制的anti-LRRK2兔多克隆抗体可用于Western印迹,免疫组织化学,免疫细胞染色等实验.利用自制的抗体,Western印迹证明,LRRK2在大鼠脑主要神经解剖学部位均有表达.免疫荧光双染色的结果表明,LRRK2定位于线粒体.本研究对了解LRRK2在PD中的分子生物学功能具有重要的意义.

10种常见细菌基因检测膜条的研制

以16S rRNA基因为检测靶基因,设计10种常见细菌的DNA探针,将探针固定于硝酸纤维素膜条;PCR扩增细菌的16S rRNA基因片段并标记生物素后与膜条杂交;采用碱性磷酸酶标记的链亲和素检测生物素标记,以NBT/BCIP显色。该膜条不仅能单独检测10种细菌中的任何一种,也能同时检测5种细菌。该方法具备高通量、低成本、快速、准确等特点,具有良好的临床应用前景。

帕金森病中LRRK2的功能

帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种最常见的神经退行性运动障碍,常染色体显性遗传PD可由LRRK2基因的突变引起.总结了LRRK2功能研究的最新成果,分为分子遗传学、表达分布和亚细胞定位、突变体的功能、蛋白质化学、蛋白质动力学、相互作用蛋白和底物、信号传导途径、与突起和突触囊泡蛋白的关系、结构分析、病理和临床特征等10个方面进行论述.指出已有的研究初步阐明了LRRK2突变导致PD的发病机制,提出了治疗PD的新策略,并对未来研究进行展望.

对医学生开展生物化学双语教学的探究

为提高医学生的英语水平,在临床医学八年制和生物科学专业学生中进行了生物化学双语教学。组织了英语好、专业强的骨干教师,并聘请外籍生物化学教师,采用新版英文原版生物化学教材;在教学过程中开辟师生角色互换的第二课堂,组织学生围绕某一专题制作多媒体课件、上台作读书报告,并书写英文综述;课程结束后采用全英文试题考试;建立了专家评课与学生评议的双语教学的反馈评价体系。全面提高了学生的专业英语水平和综合素质,为推进双语教学改革、探索一条适合中国国情的双语教学模式提供了参考。

“生物化学”智慧教学

为了贯彻《教育部关于一流本科课程建设的实施意见》,深化教育教学改革,提高教学质量,实现“生物化学”课程的高阶性、创新性和挑战度,在中南大学湘雅医学院开展生物化学智慧教学。在教学过程中,利用“雨课堂”将课堂翻转过来,利用线上线下多种资源混合式教学,将科学理论联系科研和生活实践,并在教学中采用最新的计算机技术,实现提高学生综合能力的目标。实践证明,与传统教学相比,“生物化学”智慧教学的学生学习兴趣高、课堂参与度高、能积极主动思考,取得了较好的教学效果。

一种水稻全包穗突变体的发现及初步分析

从恢复系T893群体中得到一全包穗突变体,通过鉴定与分析,探讨水稻全包穗性状的遗传基础与生理机制,发掘水稻新的功能基因;对全包穗突变体的农艺特性、遗传基础、幼穗分化Ⅳ-Ⅷ期茎秆激素含量及对赤霉素敏感性进行了初步分析;突变体具有全包穗特性,并表现茎秆节间缩短,植株矮化,每穗颖花数减少,花粉育性部分降低;遗传分析表明突变体包穗性状受1对隐性基因控制;突变体与T893茎秆内源激素含量比较:突变体幼穗分化Ⅵ期、Ⅷ期时的GA4含量较野生型低,ABA含量高,IAA和Z的含量无显著差异;幼穗分化末期突变体对赤霉素反应钝感;初步研究表明,突变体的产生与水稻茎秆内源激素合成及代谢途径变化有关。

PITX2 R62H突变导致角膜环状皮样瘤的分子基础

角膜环状皮样瘤(RDC)是一种呈常染色体显性遗传的角膜良性肿瘤,前期研究证明,PITX2基因的G185A突变(R62H)是导致RDC发生的原因.为了进一步探讨R62H导致RDC的分子基础,将PITX2构建至原核表达载体,诱导表达后纯化融合蛋白进行EMSA实验,显示R62H与DNA的结合能力并未明显下降.筛选稳定表达PITX2WT和R62H的HeLa细胞克隆,用流式细胞仪分析细胞周期,并用Quantitative Real-time PCR来检测细胞克隆的β-catenin和Cyclin D1的表达水平,结果发现稳定表达PITX2R62H的HeLa细胞的增殖活性低于PITX2WT,且β-catenin和CyclinD1的mRNA水平均比PITX2WT明显下降.由此推测,R62H突变使Wnt/β-catenin→PITX2信号途径发生改变,促使基因表达异常,导致细胞异常增生和角膜环状皮样瘤的形成.

采用16S rRNA基因分析技术鉴定正畸患者矫治前龈沟液的细菌种类

目的 了解安氏Ⅱ类错牙合畸形患者矫治前期龈沟液的细菌分布情况,为进一步探讨细菌感染对安氏Ⅱ类错牙合畸形矫治后牙根吸收的影响奠定基础。方法 从中南大学口腔医学院收集24例安氏Ⅱ类错牙合畸形的12-18岁患者龈沟液,在厌氧条件下进行细菌培养,PCR扩增细菌16S r RNA基因序列,经测序后通过序列比对鉴定细菌菌株。结果 共鉴定出43株菌,其中链球菌属18种菌株,奈瑟菌属7种菌株,放线菌属6种菌株,孪生球菌属2种菌株,罗氏菌属2种菌株,艾肯菌属等其他8个菌属各1种菌株。结论 安氏Ⅱ类错牙合畸形患者矫治前期龈沟液中分布多种细菌。

在生物化学课堂教学中践行课程思政建设纲要

生物化学作为临床医学最早学习的重要基础课程,是医学生专业课程思政建设的排头兵。如何在生物化学课程教学中融入思政元素,达到协同育人的目的,值得我们关注和思考。挖掘生物化学课程中的思政元素,并将这些元素有机地融入生物化学课程教学过程中,对医学专业学生综合素养提升具有重要的意义。本文介绍了生物化学课程思政建设的经验,重点探讨如何以课程思政建设纲要为指导,发掘生物化学课程知识点的思政内涵,并在学生中开展问卷调查,为今后的课程思政建设明确了努力方向,相关教学方法和手段可为医学专业其他课程思政建设改革提供参考。

重叠法联合长引物法构建具有HA标签的DJ-1 L166P突变体

目的通过构建具有HA标签的DJ-1 L166P突变体(DJ-1 L166P-HA),建立一种快速构建具有标签的突变体的方法——重叠法联合长引物法。方法 PCR分别扩增DJ-1的N端和C端。扩增C端的反向引物DJ-1-HA-R包含HA标签的编码序列,是具有60个核苷酸的长引物。然后,DJ-1的N端和C端重叠延伸获得DJ-1 L166P-HA全长。最后,克隆DJ-1 L166P-HA至质粒pcDNA3.1(+)。结果只需一次连接反应,成功地构建了具有HA标签的DJ-1 L166P突变体的重组质粒pcDNA3.1(+)-DJ-1 L166P-HA。将该重组质粒转染HEK293细胞后,DJ-1 L166P-HA融合蛋白质成功表达。结论重叠法联合长引物法具有简便、快捷,易掌握等特点,具有良好的应用前景。

新香优80春制高产技术

根据新香优 80亲本的特征特性 ,提出了春制高产制种技术。

Origin软件在福林-酚试剂法测定蛋白含量实验数据处理中的应用

运用Origin软件对福林-酚试剂法测定蛋白含量实验进行数据处理分析和制作标准曲线图,方便、快捷,并且能大大提高实验结果的准确度,提升实验教学效果。

3种致遗传病PITX2突变体功能的比较研究

角膜环状皮样瘤(RDC)、虹膜发育不全(IH)和Axenfeld-Rieger综合征(ARS)都是常染色体显性遗传病,都可以由于一个转录因子PITX2的突变引起.在3种疾病中,RDC的症状最轻,IH其次,ARS最重.将分别引起RDC,IH和ARS的错义突变R62H,R84W和T68P定点地引入PITX2野生型cDNA序列中进行分子功能的比较研究.结果证明,3种突变体蛋白都可以在真核细胞中稳定表达,并且都定位在细胞核中.EMSA和转录激活研究显示,3种突变体功能保留情况不同,R62H在三者中保留了最多的活性,R84W也保留了小部分功能,而T68P则完全丧失了DNA结合和转录激活能力.这一结果证实了前人提出的假设,即PITX2突变体残留活性的多少决定了疾病表型的严重程度.