重组肝细胞生长因子质粒的构建及对内皮祖细胞增殖的影响

目的构建一种携带人肝细胞生长因子(HGF)基因的表达质粒(pUDKH),探讨重组质粒对体外培养的成人外周血中内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)增殖的影响。方法用PCR方法从人胎盘cDNA文库扩增HGF基因,并将其克隆至病毒表达载体pLenti6/V5-Dest,获得表达质粒pLenti-HGF。制备病毒,感染原代培养的内皮祖细胞,免疫组化分析其感染效率及上清中HGF的表达水平。MTT法检测感染病毒后对细胞增殖的影响。结果 pLenti-HGF病毒可有效感染体外培养的内皮祖细胞,表达HGF,并能促进内皮祖细胞的增殖。结论内皮祖细胞经病毒感染后可以表达hHGF,外源性hHGF基因能够刺激内皮祖细胞增殖。

人外周血内皮祖细胞的培养过程及分化

目的：研究人外剧血中内皮祖细胞（endothelial progenitor cell，EPC）的培养及分离，并探索EPC生物学特性及诱导分化条件：方法：健康成人肘静脉血，用密度梯度离心法得到单个核细胞，接种于纤维连接蛋白包被的6孔板进行培养（含有人血管内皮细胞生长因子），观察细胞集落、梭形贴壁细胞的形成过程。应用激光共聚焦显微镜和流式细咆仪进行EPC的鉴定。结果：在细胞培养的第4天，人外周血来源的单个核细胞开始形成从中间向外剧放射的细胞集落；住第7天时形成典型的长梭形，首尾相连成条索状；培养第2周时，长悛形细胞渐消失，出现鹅卵石样的圆形椭圆形细胞；在第3周时，鹅卵石样细胞增殖旺盛。可以应用激光共聚焦显微镜成功鉴定EPC，并且VEGF和人纤维连接蛋白可以促进EPC的生长。结论：人外周血中的内皮祖细胞来源于单个核细胞，早期内皮祖细胞出现于细胞培养第4-7天，晚期内皮祖绌胞出现于细胞培养2-3周时。EPC任特定条件下可分化为内皮细胞，为EPC的进一步研究及临床应用奠定了基础。