DNA条形码技术在海马物种鉴定中的应用分析

海马具有重要的药用和观赏价值,但因其可供鉴定的形态特征较少,应用形态学对海马进行种水平的鉴定时经常会遇到很多困难。DNA条形码技术为海马物种鉴定提供了重要的鉴定方法。通过检索生命条形码数据库(BOLD)和GenBank数据库中海马的DNA条形码信息,应用MEGA软件计算海马种间遗传距离,分析DNA条形码在海马物种鉴定中的应用效果。结果表明,COI基因条码可以有效鉴别大部分种以上阶元的海马,但对亲缘关系较近的海马难以获得准确的鉴定结果。还有一些海马尚无相关的基因信息,也无法通过基因条形码进行鉴别。因此,应用DNA条形码鉴定海马物种尚有一定的局限性。

水生动物野田村病毒研究进展

随着水产养殖业的快速发展,各种新发传染病不断暴发流行,其中由野田村病毒引起的传染病,造成大批养殖水生动物死亡,给水产养殖业和生态环境带来了严重威胁。野田村病毒分为α野田村病毒属和β野田村病毒属,以及分类未定的野田村病毒,其中水生动物野田村病毒主要包括鱼类神经坏死病毒、对虾偷死野田村病毒、罗氏沼虾野田村病毒、行动障碍野田村病毒以及贝类神经坏死病毒。一些野田村病毒易感宿主多,如α野田村病毒可感染哺乳动物,虾类野田村病毒可感染鱼类,鱼类野田村病毒又可感染贝类,加之近年来的研究发现一些野田村病毒毒株存在自然重组现象,这对水产养殖业造成了威胁。本文综述了野田村病毒科病毒的分类,水生动物野田村病毒主要种类,以及野田村病毒跨物种传播、病毒重组等研究进展,探讨国内外新发现的水生动物野田村病毒的潜在风险,为有效监测和防控水生动物野田村病毒病提供借鉴。

动物新冠病毒感染状况及其影响

新冠病毒感染给人类带来了巨大灾难,也给动物带来严重影响。全球已有36个国家报告至少26种哺乳动物感染新冠病毒(SARS-CoV-2),包括宠物、养殖动物和野生动物。绝大部分动物的SARS-CoV-2感染来自与人类接触,感染后无明显症状或症状轻微。宠物中,犬和猫对SARS-CoV-2具有一定的易感性,其感染率与宠物主人的密切接触程度有关,但总体感染率不高,目前还没有宠物在人类感染传播中起重要作用的证据。养殖动物和野生动物中,水貂和白尾鹿极易感染SARS-CoV-2,种群感染率很高,而且在其体内病毒可以快速变异和进化,甚至回传感染人类;水貂是动物中SARS-CoV-2感染最严重的宿主,感染后表现严重的临床症状甚至死亡。目前尚无动物SARS-CoV-2感染对人类健康、动物健康以及生物多样性产生重大影响的证据,但动物感染不仅会影响动物种群的健康,而且可能造成SARS-CoV-2变异株的出现,进而威胁人类健康。因此,需要坚持“同一健康”理念,加强对动物SARS-CoV-2感染的监测和防控。

实时荧光定量PCR快速检测对虾IHHNV载量方法的创建

近年来,因感染虾肝肠胞虫,对虾生长缓慢现象频发。虾肝肠胞虫在宿主肝胰腺小管上皮细胞质内复制,目前主要通过组织学观察及LAMP检测方法诊断。为建立快速定量灵敏的PCR方法,用于对虾传染皮下及IHHIV(传染性皮下及造血组织坏死病毒)早期诊断监测,本文使用生物学软件进行序列化对比,优化实时荧光定量PCR反应条件,提高特异性灵敏度。研究表明,线性范围5×102^(5)×107拷贝/ml,灵敏度超过普通PCR的1/5。

罗湖病毒RT-LAMP方法的建立与应用

为快速检测罗湖病毒(tilapia lake virus,TiLV),根据TiLV编码RNA聚合酶的片段1,设计了6条特异性引物,通过对反应体系优化,建立了检测TiLV的RT-LAMP方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行了评价。结果显示:该方法特异性好,仅能够对TiLV进行特异性扩增,对真鲷虹彩病毒等10种鱼类常见病毒扩增均呈阴性;灵敏度为2.5×10^(-7) ng/µL,且30 min即可得到试验结果;两组重复试验显示,该方法重复性良好,且熔解曲线相一致。结果表明,成功建立了快速检测TiLV的RT-LAMP方法。本研究为快速诊断、监测TiLV提供了技术支撑。

罗湖病毒(TiLV)RT-qPCR方法的建立

研究根据罗湖病毒(Tilapia lake virus,TiLV)编码RNA聚合酶的基因片段1设计1对特异性引物和探针,建立一种检测TiLV的实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)方法,并对该检测方法进行了反应体系和条件优化。结果表明,优化的20μL反应体系:2×Probe RT-PCR Master Mix 10μL,QN Probe RT-Mix 0.2μL,5μmol/L的引物TiLV-qF、TiLV-qR、探针TiLV-qP各1μL,模板1μL,补充RNase-free water至20μL。优化的反应条件:反转录45℃20 min;预变性95℃5 min;扩增95℃15 s,60℃1 min,40个循环。荧光收集设置在60℃退火延伸时进行。本文建立的RT-qPCR方法检测TiLV的特异性好,重复性好,灵敏度高,灵敏度为2.5×10^(-8) ng/μL,可为TiLV的监测和预防提供技术支撑。

螯虾瘟流行病学和诊断技术研究进展

螯虾是全球重要的养殖和观赏虾类,也是我国重要的养殖和出口产品。由变形藻丝囊霉(Aphanomyces astaci)感染导致的螯虾瘟是螯虾最主要的传染病之一,导致欧美和亚洲地区许多国家的螯虾种群感染严重甚至灭绝。我国除台湾以外,在大陆地区至今尚未发现变形藻丝囊霉感染。本文介绍了螯虾瘟的病原学、流行病学(包括地理分布、易感动物、传播方式、临床症状以及发病率和死亡率)和诊断技术研究进展,以期为该病防控技术储备研究提供借鉴。

COⅠ和16S rRNA基因条形码在海马物种鉴定中的应用

本研究基于DNA条形码技术,应用通用引物扩增了6种海马的线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ基因(COⅠ)和16S核糖体RNA基因(16S rRNA)部分序列,将测定的6种海马基因序列和GenBank数据库下载其他已知海马物种的参考序列进行系统发育分析。结果表明,COⅠ基因或16S rRNA基因可以对大部分海马物种进行准确鉴定,其中COⅠ基因具有更高的种间分辨率。对于亲缘关系较近的海马物种,应同时结合形态特征和地理分布等信息进一步鉴别。本研究提供的海马物种鉴定方案可对海马物种进行准确快速地鉴定,为打击海马走私、保护海马资源提供技术支持。