猫角膜缘干细胞不同采集、分离与培养鉴定方法的对比研究

本研究旨在对比不同的分离与培养方法体外培养猫角膜缘干细胞(feline limbal stem cells,FLSCs)的效果,建立使FLSCs持续稳定增殖、结构及功能正常的最佳分离与培养体系。在手术显微镜下活体采集猫角膜缘组织,分别使用组织贴壁法(T法)、混合酶消化法(N法)、混合酶消化法联合组织贴壁法(NT法)分离FLSCs,鉴定LSCs标志蛋白ABCG2,以筛选最适分离方法。用BC培养基、DLM培养基和SCM培养基进行细胞培养,连续7 d细胞计数、观察细胞形态,选取LSCs的阳性标志物p63、波形蛋白和上皮分化标记物CK3、CK12定性分析第3、4、5代培养细胞。结果显示:3种方法分离的细胞中,ABCG2均呈阳性表达,NT法表达最强,表明3种方法均可分离FLSCs,NT法消化分离效果最好。3种培养基均可培养FLSCs,细胞形态无差异,细胞在DLM组中增殖速度最快,更快到达细胞生长峰值,与其他两组比,差异显著(P<0.05)。FLSCs生长曲线图呈典型“S”型,前72 h为迟缓期,72~216 h为对数生长期,216~264 h则基本处于平稳期,从264 h开始进入衰亡期。FLSCs群体倍增时间为38.9 h,平均最大增殖浓度为5.66×10^(5)cells·mL^(-1)。第3、4和5代FLSCs中波形蛋白、p63均呈强阳性表达,CK3和CK12不表达。使用NT法分离FLSCs,并在DLM中进行培养,可建立稳定增殖的FLSCs体外培养体系。

新型生物组织工程角膜移植治疗犬猫角膜疾病的回顾性分析

本研究旨在大型回顾性分析总结新型生物组织工程角膜(biotissue-engineered cornea,BEC)治疗犬猫角膜疾病的手术方法与长期临床效果。本研究回顾了2018—2022年使用BEC进行眼表移植手术并至少跟踪随访3个月及以上的犬猫的医疗记录。包括坏死性角膜炎、深度角膜溃疡、后弹力层膨出以及角膜穿孔在内的犬猫患眼被纳入本研究。术后每周定期检查,并在术后0、3、6和12个月对部分患眼进行了光学相干断层扫描检查,根据最后一次检查结果对术眼角膜进行评级。本研究共纳入139只患眼(猫112例,犬27例),其中板层角膜移植103只眼,全层角膜移植36只眼。使用4种不同厚度的BEC植片(200、300、400和450μm),植片的平均直径为7.74 mm(范围为3~13 mm)。术后影响相对较大的并发症包括植片部分松脱或裂开(5例,3.60%)、植片溶解或穿孔(8例,5.76%)、角膜植床坏死(1例,0.72%)和眼球萎缩(1例,0.72%)。术后随访时间为3~50个月(中位数18个月),最终139只眼均保持了角膜和眼球完整性,其中133只眼(95.68%)保留了较敏锐视力。统计学分析显示,角膜植片透明度与动物年龄(P=0.021)、物种(P=0.000)、植片直径(P=0.032)、是否全层移植(P=0.000)以及角膜再上皮时间(P=0.000)显著正相关。BEC是一种安全且有效的角膜植片,可用于犬猫板层或全层角膜移植术,具有广泛的临床应用价值。

建筑业的税收筹划策略以及注意问题探析

目前，我国建筑业亟须合理缩减成本，促进可持续发展。而税收筹划在守法情况下能够减轻企业税收负担，促进企业经济效益发展。为此，在建筑业中实施税收筹划是很有必要的。本文主要对税收筹划的概念、建筑业税收筹划的策略和建筑业税收筹划应注意的问题进行了分析。