探究“八字缝合法”在大口径股动静脉鞘管拔除后对穿刺位点的止血效果

目的本实验欲比较"八字缝合法"与"指压法"在犬的急性心肌梗死(AMI)模型及Ⅲ度房室传导阻滞(Ⅲ°AVB)模型手术中股动静脉鞘管拔出后对穿刺位点的止血效果。方法把试验犬分成心肌梗死模型组及Ⅲ度房室传导阻滞模型组,每组再分成"八字缝合法"组与"指压法"组。心肌梗死模型中比较两种方法对股动脉穿刺位点的止血效果,而在Ⅲ度房室传导阻滞模型中比较两者对股静脉穿刺位点的止血效果。手术期间静脉使用肝素以防血栓形成。比较4组的止血时间,并在术后立即、12h后和24h后对两组穿刺位点进行超声多普勒检查,比较术前与术后穿刺位点的血管影像学检查,并观察4组术后的并发症。结果本实验分别对10只AMI模型犬及9只Ⅲ°AVB模型犬行"八字缝合"止血法,其余行指压止血法。组内比较平均体重与心率差异无统计学意义(P>0.05)。AMI模型与Ⅲ°AVB模型中按压止血所需时间分别为8.45±1.28min与6.61±0.80min。两种模型术后立即行超声多普勒检查发现"八字缝合"处回声增强且没有侧漏,术后12h与24h后增强影消失。模型犬在八字缝合后行静脉造影检查示缝合处明显狭窄。观察一周后AMI模型与Ⅲ°AVB模型犬中分别有两只发生血肿,分别有一只与两只发生感染。结论 "八字缝合"法可以对犬的大口径股动静脉鞘穿刺点进行安全有效的止血,与传统的指压止血法比较并不会增加血肿或再出血等并发症。

人诱导多潜能干细胞向心肌细胞分化的实验研究

目的探究通过阶段性调控经典Wnt信号通路促使人诱导多潜能干细胞向心肌细胞分化。方法采用阶段性激活或抑制Wnt信号通路的方案使人尿路上皮细胞来源的多潜能干细胞(U1细胞系)定向分化为心肌细胞,在分化第14天,采用流式细胞术检测U1细胞向心肌细胞分化的效率,利用免疫细胞化学检测心肌细胞肌钙蛋白表达,通过激光扫描共聚焦荧光显微镜检测人诱导多潜能干细胞来源的心肌细胞(hiPSC-CMs)的Ca 2+活动,利用全细胞膜片钳技术记录hiPSC-CMs的电生理特性。结果U1细胞系向hiPSC-CMs分化的效率为(88±3)%;全细胞膜片钳技术记录的动作电位特征显示hiPSC-CMs可分为心室肌样细胞、心房肌样细胞和窦房结样细胞,其中主要是心室肌样细胞。窦房结样细胞的比例、动作电位时程、动作电位幅度及最大去极化速率均明显小于心室肌样细胞和心房肌样细胞。结论阶段性调控Wnt信号通路能促使hiPSCs定向分化为hiPSC-CMs,并且hiPSC-CMs具有哺乳动物心肌细胞相似的电生理特征。

利伐沙班对非瓣膜性房颤抗凝治疗有效性和安全性的Meta分析

目的评价利伐沙班对非瓣膜性房颤患者抗凝治疗的效果及安全性。方法计算机检索PubMed、EMbase、Medline、CNKI、万方数据库，查找所有比较利伐沙班与华法林对非瓣膜性房颤患者抗凝治疗的安全性与有效性的随机对照试验。检索时间均为建库至2015年5月24Et。同时手动检索纳入文献的参考文献。采用Cochrance协作网提供的RevMan5．2软件进行Meta分析。结果纳入文献共3篇，总样本量为15867例。Meta分析示，与华法林相比，利伐沙班可明显降低严重出血事件发生率（OR=0．71，95％CI0．55-0．91，P=0．007）、颅内出血率（OR=0．63，95％CI0．45-0．87，P=0．004）、致死性出血事件发生率（OR=0．51，95％CI0．33-0．79，P=0．003）、主要有效终点事件发生率（卒中、系统栓塞）（OR=0．75，95％CI0．62-0．90，P=0．002）、次要有效终点事件1发生率（卒中、系统栓塞、血管性死亡）（OR=0．83，95％CI0．72～0．95，P=0．008）、次要有效终点事件2发生率（卒中、系统栓塞、血管性死亡、心肌梗死）（OR=0．82，95％CI0．72～0．93，P=0．003）；而少量出血事件发生率（OR=1．04，95％CI0．95～1．13，P=0．43）、上消化道出血率（OR=1．35，95％CI0．47-3．82，P=0．58）无明显差异。结论利伐沙班对非瓣膜性房颤的抗凝治疗效果优于华法林，且在危险终点事件上更安全。

CHADS_2/CHA_2 DS_2-VAS_C评分的应用

临床上CHADS2评分和CHA2DS2-VASC评分主要用来对非瓣膜性心房颤动(房颤)血栓栓塞的风险进行评估。由于CHA2DS2-VASC评分系统更为全面,并能筛选出不需要抗凝治疗的"真正的低危患者",因此现多应用此评分系统。然而,两种评分系统所包含的危险因素同样适用于其他心血管疾病,两者也可以被用来对房颤风险、左心房功能进行评估,同时也可对非房颤患者进行预后评估。

转染人TBX18基因的大鼠心脏成纤维细胞中HCN4蛋白表达、If及对心肌细胞搏动频率的影响观察

目的：观察转染人TBX18基因的大鼠心脏成纤维细胞HCN4蛋白表达、超极化激活内向离子电流（If）及对心肌细胞搏动频率的影响。方法取新生SD大鼠，断头处死后取心脏，分离培养成纤维细胞及心肌细胞。构建人TBX18基因的腺病毒载体Ad-GFP-TBX18，包装并纯化病毒滴度至1＆#215;1010 TU／mL。取传代2～5代时对数生长期新生大鼠成纤维细胞分为A、B、C组，培养24 h后A、B组分别转染Ad-GFP-TBX18、腺病毒载体pHBAd-MCMV-GFP（阴性对照），C组不做任何处理。采用RT-PCR法检测各组细胞TBX18 mRNA。采用Western blotting法检测各组超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4（HCN4）蛋白。采用电压钳记录各组细胞超极化激活内向离子电流（If）。将各组细胞与新生大鼠心肌细胞共培养，观察新生大鼠心肌细胞搏动频率。结果 A、B、C组TBX18 mRNA相对表达量分别为98．32±6．21、1．03±0．05、1．02±0．02。A组TBX18 mRNA相对表达量高于B、C组（P均＜0．05）；B、C 组TBX18 mRNA相对表达量差异无统计学意义。A、B、C组HCN4蛋白相对表达量分别为0．49±1．21、0．12±0．02、0．09±0．01。A组HCN4蛋白相对表达量高于B、C组（P均＜0．05）；B、C组HCN4蛋白相对表达量差异无统计学意义。A组约有30％的细胞可以检测到If，而B、C组中没有细胞检测到If。同一时点A组新生大鼠心肌细胞搏动频率高于B、C组（P均＜0．05）；B、C组新生大鼠心肌细胞搏动频率差异无统计学意义。结论转染人TBX18基因的大鼠心脏成纤维细胞高表达HCN4蛋白，存在If电流，并能促进共培养新生大鼠心肌细胞的搏动。

分别转染TBX18后乳鼠成纤维细胞对心肌细胞搏动频率的影响

目的用TBX18分别转染成纤维细胞(CFs)与心肌细胞(NRVMs),探究转染的成纤维细胞对整个共培养系统的影响。方法用TBX18分别转染乳鼠心脏CFs与NRVMs,并分成5组:NRVMs组,TBX18-NRVMs组,TBX18-NRVMs+CFs组,TBX18-NRVMs+GFP(绿色荧光蛋白)-CFs组与TBX18-NRVMs+TBX18-CFs组。培养7d后观察并比较各组细胞的搏动频率。结果共培养7d后发现TBX18可显著提高心肌细胞的自发搏动[(94.20±7.38)b/min vs.(62.10±11.67)b/min,P<0.01],且相比TBX18-NRVMs组,GFP-CFs或CFs与TBX18-NRVMs共培养并没有明显改变搏动频率,但CFs具有减缓心肌自发搏动的趋势,经TBX18转染后的CFs与TBX18-NRVMs共培养可显著提高心肌细胞的搏动频率[(118.50±7.25)b/min vs.(82.80±15.82)b/min,P<0.01]。结论在分别转染TBX18的成纤维细胞与心肌细胞共培养系统中,成纤维细胞可显著提高心肌细胞的搏动频率。

转录因子TBX18对乳鼠成纤维细胞的重编程作用

目的探讨窦房结促生长转录因子TBX18对乳鼠心脏成纤维细胞的重编程作用。方法构建携带人TBX18基因的重组腺病毒载体(Ad-TBX18)及只带有绿色荧光蛋白的腺病毒载体(Ad-GFP),转染乳鼠心脏成纤维细胞(CFs),分成实验组A(CFs-TBX18)、对照组B(CFs—GFP)和空白对照组C(CFs)。各组细胞培养8 d观察形态学变化并检测HCN4蛋白、Cox43蛋白及Cox45蛋白的表达情况;再检测心肌肌钙蛋白1(cTn1)蛋白的表达量并记录细胞内钙火花的数量;最后检测α-SMA蛋白的表达及Vimentin蛋白的荧光分布。结果成纤维细胞转染Ad—GFPTBX18后其形态学和搏动功能均未向iSANs转化。转染TBX18的成纤维细胞HCN4表达明显增高,Cox43与Cox45蛋白表达下调。钙火花检测结果显示,空白对照组细胞内有钙火花,而实验组和对照组中均未发现钙火花。cTn1蛋白检测结果表明,实验组中无cTn1蛋白表达。免疫荧光检测显示,各组中均有Vimentin蛋白的红色荧光,实验组中α-SMA高表达,而对照组α-SMA表达明显降低。结论 CFs经TBX18转染后可重编程为高表达HCN4蛋白,和低表达COX43、45蛋白表达较低的肌成纤维细胞(MCFs)。

远程心电监测系统在心房颤动患者导管消融与抗心律失常药物治疗中的随访应用

目的采用远程心电监测系统（transtelephonic monitorsystem，1TM）进行随访比较心房颤动（房颤）患者导管消融治疗与抗心律失常药物（antiarrhythmic drugs，AAD）的治疗效果。方法从2012年6月到2014年2月，在武汉大学人民医院心血管内科接受治疗的房颤患者162例，其中男92例，女70例。分为导管消融组与AAD组，并使用TTM进行随访，采用Kaplan—Meier方法分析房颤复发因随访时间进程而变化的情况。结果共人选162例房颤患者，随访期间使用TFM共收集到20946份有效心电图，9824份异常心电图中无症状发作的3229份（32．9％），8800份窦性心电图中有症状的2598份（29．5％）。阵发性房颤患者（82例）中，消融组房颤随时间复发率低于AAD组（P=0．011）；在持续性房颤患者（80例）中，消融组房颤随时间复发率低于AAD组（P=0．006）。结论通过短期随访发现，对于房颤患者的窦性心律维持，导管消融要优于AAD。TTM可有效提高房颤复发检出率，可用于评估导管消融治疗房颤的临床有效性。

经食管超声左心耳参数与心房颤动患者左心耳血栓和/或自发显影的关系

目的探讨经食管超声左心耳(LAA)参数与心房颤动(简称房颤)患者LAA血栓和/或自发显影(SEC)是否存在相关性。方法选取在本院心血管内科收治并接受经食管超声心动图(TEE)检查发现LAA血栓和/或SEC的房颤患者34例为SEC组;同时,同期以1∶2的比例随机选取接受TEE检查但并未发现LAA血栓和/或SEC的房颤患者68例为非SEC组。收集患者既往病史资料,并测定其左房前后径(LAD)、左室射血分数(LVEF)和左心耳开口宽度(LAAW)、左心耳长度(LAAL)、左心耳血流排空速度(LFEV)、左心耳血流充盈速度(LFFV)、左心耳射血分数(LAAEF)等指标。多因素Logistic回归分析房颤患者LAA血栓和/或SEC的独立危险因素。结果两组之间年龄、房颤类型(持续性房颤比例)、脑卒中/短暂脑缺血发作(TIA)病史、CHA_2DS_2-VASc评分、LAD、LAAW、LAAL、LVEF、LFEV、LFFV、LAAEF差异有统计学意义。调整其他危险因素,通过多因素Logistic回归分析发现,既往脑卒中/TIA(OR 22.894;95%CI 1.883~278.418;P=0.014),更大的LAAW(OR 1.205;95%CI 1.008~1.441;P=0.040)、LAAL(OR 1.203;95%CI 1.039~1.394;P=0.014)及更低的LAAEF(OR 0.964;95%CI 0.929~0.999;P=0.047)是房颤患者LAA血栓和/或SEC的独立危险因素。结论房颤患者LAA结构增大及较低的LAAEF提示LAA血栓和/或SEC的可能性增大。

在体经皮微创注射TBX18构建生物起搏点

目的探讨经皮微创注射转录因子T-box 18(TBX18)对三度房室传导阻滞模型犬心率的影响。方法取两只比格犬,均植入起搏器(右室VVI起搏,45次/分)并经股静脉途径消融房室结构建三度房室传导阻滞模型。经导管(NOGA MyoStar)分别注射腺病毒-绿色荧光蛋白-TBX18(Ad-GFP-TBX18,TBX18犬)或Ad-GFP(GFP犬)至右室流出道靠近间隔处,观察14天后犬的心率变化及逸搏节律起源部位,并在荧光显微镜下观察注射部位心肌细胞荧光表达强度。结果房室结消融后两只犬均为起搏心律,频率45次/分,14天后TBX18犬心率64次/分,逸搏节律起源点位于注射部位,GFP犬心率48次/分,逸搏节律起源点远离注射部位。荧光检测显示注射部位心肌组织有绿色荧光表达。结论经皮微创注射TBX18可构建生物起搏点。

选择性去心脏交感传入神经对犬急性心肌梗死后室性心律失常的影响

目的探讨选择性去心脏交感传入神经(SCSAD)对犬急性心肌梗死(AMI)后自主神经功能、心室电生理特性和室性心律失常的影响。方法 24只成年雄性杂种犬随机分为对照组(n=8)、AMI组(n=8)和SCSAD组(n=8)。SCSAD组犬心外膜给予树胶脂毒素。对照组和AMI组犬心外膜涂抹不含树胶脂毒素的溶剂。AMI组与SCSAD组通过结扎冠状动脉(简称冠脉)左前降支建立AMI模型,对照组只分离穿线,不结扎冠脉。于结扎冠脉后15 min检测心率变异性(HRV),记录结扎后1 h室性心律失常的发生情况,对照组于相应时间点检测。ELISA法检测血清去甲肾上腺素(NE)水平。于结扎冠脉后1 h依次采用S_1S_2程控刺激测量心室有效不应期(ERP),S_1S_1 300 ms起搏测量单相动作电位(MAP)和S_1S_1动态起搏法测量动作电位时程(APD)电交替起搏周长。通过不同电压直接电刺激左侧星状神经节(LSG)后的最大收缩压变化百分比评价LSG功能。蛋白免疫印记法(Western blot)检测各组新鲜LSG组织的c-fos和神经生长因子(NGF)的表达。结果与对照组相比,AMI组HRV明显降低,SCSAD组较对照组和AMI组升高。相比对照组,AMI组和SCSAD组室性早搏发生增多,而SCSAD组较AMI组减少。与AMI组相比,SCSAD组室性心动过速发生减少,且SCSAD组与对照组相比无差异。与对照组相比,AMI组和SCSAD组血清NE水平升高,SCSAD组较AMI组低。与对照组相比,AMI组结扎后其缺血区心室ERP和MAP缩短,APD电交替起搏周长延长。SCSAD组较AMI组ERP和MAP延长,APD电交替起搏周长缩短,且SCSAD组较对照组ERP延长,MAP和APD电交替起搏周长无差异。AMI组LSG功能比对照组增强,SCSAD组较对照组和AMI组LSG功能减低。AMI组c-fos表达比对照组高,NGF表达二者无明显差异,而SCSAD组c-fos和NGF表达比AMI组低。结论 SCSAD降低AMI后心脏交感神经活性,提高心脏电生理稳定性,减少室性心律失常的发生。

靶向损毁心交感神经元对犬心肌梗死后心室电生理性质的影响

目的探讨靶向损毁心交感神经元（targeted ablation of cardiac sympathetic neurons，TACSN）对心肌梗死（MI）后心室电生理性质的影响。方法使用随机数字表法将38只成年雄性杂种犬随机分为：假手术组（8只）、MI组（15只）、MI＋TACSN组（15只）。通过微导管在前降支内注射明胶海绵颗粒栓塞剂构建MI模型。MI＋TACSN组在术后1周进行左侧星状神经节（LSG）内注射霍乱毒素B亚单位（CTB）与肥皂草素（SAP）的轭合物CTB-SAP损毁心交感神经元。术后5周，测量各组犬梗死周边区、正常区、左心室基底部、右心室心尖部、右心室中部及右心室基底部的有效不应期（ERP）、动作电位时限（APD）、APD回复性质、ADP交替周长。结果与MI组相比TACSN显著延长MI后QTc间期[（387．13±16．29）ins对（361．58±23．65）ms，P〈0．05J，减少Tpeak-Tend（51．38±7．41）ins对（66．75±7．97）ms，P〈0．05]，改善心率变异性；延长心室各个部位ERP、动作电位复极完成90％所需时间（APDgo），减少其离散度（0．040±0．019对0．077±0．025，P〈0．05；0．031±0．012对0．062±0．015，P〈0．05）；降低梗死周边区APD回复曲线的最大斜率（Smax），减少其离散度（0．071±0．022对0224±0．079，P〈0．05）；降低梗死同边区APD交替周长。结论TACSN显著改善MI后心室电生理牲质，可能是防治MI后恶性室性心律失常的新策略。

生物起搏器的研究进展

临床上很多心动过缓的病人需要安装起搏器,但经过长期的发展起搏器仍有很多缺陷。为了弥补起搏器的不足,生物起搏器应运而生,且通过模拟起搏细胞功能到模拟起搏细胞表型和功能再到使正常心肌细胞重编程为起搏细胞及调节起搏细胞下游通路等研究,生物起搏器已经可以在大动物心脏中稳定且持久的起效。但投入到临床应用之前,生物起搏器还有很长的路要走。

中国心房颤动患者左心耳封堵与华法林预防血栓栓塞事件的对照研究

目的 研究中国心房颤动（房颤）患者行左心耳封堵（LAAO）与华法林预防血栓栓塞事件的安全性和有效性.方法 入选2014年3月到2015年8月于武汉大学人民医院心内科接受LAAO的非瓣膜性房颤患者25例（LAAO组）.术后患者使用双抗血小板（阿司匹林＋氯吡格雷）至少3个月,在第3个月时根据经食管超声心动图（TEE）检查结果调整抗栓治疗,将双抗血小板改为单抗血小板药物治疗.同期选择25例使用华法林抗凝预防血栓栓塞事件的非瓣膜性房颤患者作为对照组（华法林组）.口服华法林,将国际标准化比值（INR）控制在2.0～3.0.均于患者出院后1、3、6、12个月进行随访,观察两组在随访期间预防血栓栓塞事件的安全性和有效性.结果 ①安全性比较：LAAO组手术成功率为100％,围术期有1例发生血栓栓塞事件,无大出血、死亡、器械栓塞等并发症.随访1年内2组均无心脏压塞、器械相关的栓塞、死亡等不良事件发生.LAAO组随访1年内有3例出血事件,华法林组有10例（P＞0.05）.但LAAO组在随访3个月后无出血事件,而华法林组有6例出血事件（P＜0.05）.②有效性比较：随访1年内,LAAO组与华法林组均无血栓栓塞事件发生.结论 本研究初步提示中国房颤患者行LAAO预防血栓栓塞安全、有效,可减少3个月后出血事件.