乳白蚁属Coptotermes(Isoptera:Rhinotermitidae)检疫分子鉴定研究进展

白蚁是一类受到世界广泛关注的重要社会性昆虫,对人类生活、经济以及生态环境等有很大的影响,特别是乳白蚁属Coptotermes众多种类危害尤为严重。乳白蚁常随木质包装或原木远距离传播异地建群,其为害隐蔽、潜伏期长,一旦爆发则为害严重且难防治,因其种类多、形态趋同,同一巢群中有龄期不一的虫态和多种生物型,可用分类特征少,造成形态分类困难、人为分类现象普遍。近年来分子生物学技术的日益发展,使得白蚁的分类鉴定更加快速、灵敏和可靠,系统发育分析研究更为深入全面,遗传进化方面取得大量研究成果。本文对基于生物信息学的乳白蚁属检疫分类鉴定和系统发育研究方法进行了介绍和评述,并对DNA技术在乳白蚁属分类和进化研究中的应用进行了讨论。

黄瓜绿斑驳花叶病毒广东分离物的分子鉴定

采用RT-PCR方法,扩增并测定了黄瓜绿斑驳花叶病毒广东分离物(CGMMV-GD-GZ,CGMMV-GD-LZ,CGMMV-GD-LF)的外壳蛋白(coat protein,CP)和运动蛋白(movement protein,MP)基因序列。结果显示,CP基因序列全长486 bp,编码161个氨基酸;MP基因全长795 bp,编码264个氨基酸。CGMMV广东分离物与其他15个CGMMV分离物之间外壳蛋白基因核苷酸的同源性在90.9%～100%之间,运动蛋白核苷酸同源性为92.7%～100%;与同属其他13种病毒基因组核苷酸序列同源性分别仅为29.5%～56.2%和38.8%～61.8%。基于外壳蛋白和运动蛋白基因序列构建系统发育树显示,CGMMV不同分离物进化为亚洲和欧洲两大群体,3种CGMMV广东分离物与韩国、日本等亚洲分离物同源性极高,可能具有共同的侵染源。

RT-PCR法特异性快速检测黄瓜绿斑驳花叶病毒

根据黄瓜绿斑驳花叶病毒运动蛋白基因序列,设计并合成了特异性PCR检测引物,建立该病毒的快速检测方法。该方法可以从带毒叶片中扩增到约591 bp的片段,而TMV属其他9种病毒均无特异性扩增。本方法也适用于带毒种子的检测,具有准确、灵敏及时效性强等特点,为进出境植物检疫和农业安全生产提供可靠的技术支持。

苯并噻二唑对香蕉枯萎病的诱导抗性

采用含药培养基生长速率法测定苯并噻二唑(benzothiadiazole,BTH)对香蕉枯萎病菌4号生理小种(Fusarium oxysporumf.sp.cubense race 4,Foc 4)的室内毒力,结果表明BTH对Foc 4的EC50为929.9μg/mL,与杀菌剂多菌灵相比,其作用十分微弱。然后,在温室条件下,采用盆栽试验测定BTH对香蕉枯萎病的防治效果,结果表明BTH质量浓度为50μg/mL时的诱抗效果最好,防治效果可达到66.6%,且随着浓度的升高其防治效果逐渐降低。最后,在温室条件下测定BTH处理香蕉苗后,其体内6种防御酶活性的变化,结果表明BTH可以提高香蕉苗体内多种防御酶的活性。

基于形态与分子数据鉴定苹果异胫小卷蛾

采用DNA条形码技术,对珠海出入境检验检疫局从南非进口的鲜橙和鲜葡萄中截获的3头卷蛾幼虫进行分子鉴定,采用通用引物LCO1490/HCO2198对其线粒体COI基因的部分序列进行PCR扩增和测序,并与Gen Bank数据库和DNA条形码数据库BOLDSYSTEMS v3中的已知序列比对,结果与Gen Bank中20条苹果异胫小卷蛾的序列同源性达99%以上,与BOLDSYSTEMS v3中46条苹果异胫小卷蛾的序列同源性达99%。结合幼虫的形态特征,综合判定该幼虫为苹果异胫小卷蛾Thaumatotibia leucotreta。

5种乳白蚁ITS序列及系统发育关系分析

对我国口岸截获的5种乳白蚁及黄胸散白蚁的ITS区基因序列进行克隆并测序,进行序列分析和构建系统发育树,探讨其系统发育关系。研究结果表明:乳白蚁rDNA-ITS基因序列长度约900 bp,CG碱基含量为62.3%,明显高于AT含量(37.7%)。同巢群3种不同品级的乳白蚁(工蚁、兵蚁、有翅成虫)ITS序列没有遗传分歧。乳白蚁属内不同种间的同源性为94.3%～98.7%,同种不同地理种群之间的同源性均大于99%。大家白蚁C.curvignathus和塞庞乳白蚁C.sepangensis关系最近,婆罗乳白蚁C.travians与其他种进化距离最远。

乳白蚁属Coptotermes分子分类研究进展

乳白蚁Coptotermes是危害林木和建筑的重要社会性昆虫,常随木质包装或原木远距离传播到异地建群,其为害隐蔽、潜伏期长,一旦爆发则为害严重且难防治。因其种类多、形态趋同,同一巢群中有龄期不一的虫态,可用分类特征少,造成形态分类困难、人为分类现象普遍。本文综述了世界乳白蚁属分子分类状况,阐述了近年来分子生物技术应用于乳白蚁属分类的研究进展,以期为基于分子手段对乳白蚁属种类修订及系统发育分析提供支持。

实时荧光PCR法特异性检测棉花曲叶病毒

根据棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl virus,CLCuV)运动蛋白基因序列特征,设计并合成了特异性Taqman探针和检测引物,建立该病毒的实时荧光PCR快速检测方法。结果表明:该方法可以特异性地从5个不同CLCuV分离物中扩增到荧光信号,而其他6种病毒均无扩增。建立的方法具有快速、准确、灵敏及简便等特点,可为进出境植物检疫和农业安全生产提供可靠的技术支持。

南昌地区柳圆叶甲生活史的研究

在实验室和野外条件下,对柳圆叶甲Plagiodera versicolora(Laicharting)的生物学特性进行了系统观察。在野外,越冬成虫于3月下旬至5月中旬陆续出土繁殖,一年能繁殖6～12代。该虫由于成虫产卵持续时间长,完成一个世代的时间短,因此世代重叠现象非常明显。11月上旬后羽化的成虫取食一段时间后蛰伏越冬。成虫产卵有一定的周期性,一般10d为一个周期,每天产卵最少1粒,最多65粒。寄主树叶老嫩程度和气候条件对各世代成虫的产卵具有显著的影响。

改良十六烷基三甲基溴化铵-磁珠核酸提取方法及在植物转基因检测中的应用

目的建立一种快速、高效、便捷的植物基因组DNA提取方法并运用于植物转基因检测。方法改良传统的十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium ammonium bromide,CTAB)方法,并结合磁珠吸附基因组DNA,配合核酸自动提取系统提取水稻和加工米粉中的核酸,荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测Bt63大米转基因成分,并与另外4种提取方法的结果进行对比,评价提取效果。结果 5种不同方法中CTAB-磁珠法提取的样品基因组DNA浓度和质量最佳,荧光PCR检测低浓度Bt63转基因成分(0.01%)的Ct值最小,检测结果最好。结论该方法可高效快速地提取植物核酸,在低含量的转基因成分检测中相比其他几种方法具有绝对优势。

麻头堆砂白蚁入侵我国的风险分析

采用定性方法对经济重要性入侵白蚁麻头堆砂白蚁在我国的入侵风险进行了分析。结果得出麻头堆砂白蚁传入我国并定殖危害的总体风险很高,属于高风险入侵生物,据此提出风险管理方案,以期将风险降至最低。

警惕芡欧鼠尾草入侵

芡欧鼠尾草(Salvia hispanic L.)为一年生草本植物,广泛分布于南美、澳大利亚等地区,中国目前没有分布记录。芡欧鼠尾草的种子具有很强繁殖能力,一旦入侵极易形成优势种群,与本地种竞争,严重破坏生态平衡。本文介绍了芡欧鼠尾草的分布、形态特征、生物学特性及传入定殖的风险,为芡欧鼠尾草的鉴定识别提供参考。

西洋参实时荧光定量PCR快速鉴别方法的建立

基于ITS2片段序列特征,该研究设计了西洋参的特异性引物、探针,通过条件的优化建立了西洋参的实时荧光定量PCR快速鉴别方法。利用该方法对43个中药材样本进行了验证,结果能准确地鉴别出43个药材样本中的22个西洋参,并且灵敏度高,检测限可达到1×10-4ng。该方法具有准确、快捷、灵敏的特点,可对西洋参及其加工产品进行准确的鉴别和检测,应用前景广阔。

基于rDNA ITS序列的苹果异胫小卷蛾的分子鉴定

本文首次测定了苹果异胫小卷蛾(Thaumatotibia leucotreta)、坚果异胫小卷蛾(Thaumatotibia batrachopa)、苹果蠹蛾(Cydia pomonella)、梨小食心虫(Grapholita molesta)等8种卷蛾的r DNA ITS的序列,以探索苹果异胫小卷蛾的分子鉴定方法。8种卷蛾的ITS1和ITS2区序列变异较大,其中ITS1区所分析307个位点中可变位点达到212个,ITS2区则在分析的203个位点中可变位点达到151个。根据8种卷蛾ITS区序列差异,设计了针对苹果异胫小卷蛾的特异性引物,应用特异性引物对样品进行PCR扩增,扩增产物经凝胶电泳分析,结果表明只有苹果异胫小卷蛾的样品有目的 DNA扩增条带,其余卷蛾无扩增条带。灵敏度试验结果显示,最低检测限量可达0.01 ng/μL。因此,采用本文设计的ITS区特异性引物可以对苹果异胫小卷蛾进行快速分子鉴定。

从南非啤梨上截获暗色粉蚧

2014年7月,珠海出入境检验检疫局从南非啤梨上截获暗色粉蚧(Pseudococcus viburni(Signoret))。笔者详细介绍了该虫的地理分布、寄主范围、形态特征等。应用DNA条形码技术扩增了该虫的COI基因片段,通过Gen Bank和BOLDSYSTEMS v3数据库比对分析,结果显示,与Gen Bank上的4条暗色粉蚧序列99%以上一致,与BOLDSYSTEMS v3上的8条暗色粉蚧序列99%以上一致。

珠海口岸首次截获南非石竹卷蛾

2015年1月珠海出入境检验检疫局首次从鲜葡萄中截获我国进口南非鲜食苹果议定书中关注的检疫性有害生物——南非石竹卷蛾(Epichoristodes acerbella),本文对该虫的寄主、分布及形态特征进行了详细描述。文中应用DNA条形码技术扩增了该虫的线粒体COI基因的部分序列,并与Genbank数据库和DNA条形码数据库BOLDSYSTEMS v3中已知序列比对,结果与Genbank中2条南非石竹卷蛾序列98%以上一致;与BOLDSYSTEMS v3数据库中10条南非石竹卷蛾序列98%以上一致。

珠海局全国首次截获重要害虫酸豆黑脉斑螟

2013年3月珠海出入境检验检疫局拱北办从澳门进境旅客携带的酸豆(Tamarindus indica)中截获了酸豆黑脉斑螟(Mussidia pectinicornella),这是我国口岸首次截获该种有害生物。本文对酸豆黑脉斑螟的寄主、分布及成虫形态特征进行了描述,并对其DNA条形码鉴定方法进行了介绍。

从南非鲜橙上截获重要害虫坚果异胫小卷蛾

坚果异胫小卷蛾是南非果树上重要经济害虫。珠海检验检疫局曾在南非鲜橙中截获过该虫。本文对坚果异胫小卷蛾的分布、寄主及成虫形态特征进行了描述,并分析了该虫的DNA条形码检测方法。通过GenBank数据库比对分析,邻接法构建的系统发育树及BOLD数据库查询比对,可最终确定所截获害虫为坚果异胫小卷蛾。

珠海口岸全国首次截获重要害虫鳄梨织蛾

2018年1月珠海检验检疫局首次从旅客携带的厄瓜多尔鳄梨中截获我国进口墨西哥、秘鲁鳄梨议定书中关注的检疫性有害生物——鳄梨织蛾(Stenoma catenifer),本文对该虫的寄主、分布及形态特征进行了详细描述。文中应用DNA条形码技术扩增了该虫的线粒体COⅠ序列,通过GenBank数据库比对分析,邻接法构建的系统发育树及BOLD数据库查询比对。结果与GenBank数据库中2条及BOLD数据库中11条鳄梨织蛾序列97%以上一致;构建的系统发育树显示截获样品与鳄梨织蛾聚为一支。因此,综合形态和分子数据确定所截获的有害生物为鳄梨织蛾。

检疫性害虫石榴螟的危害及鉴定

石榴螟(Ectomyelois ceratoniae(Zeller))是一种严重危害石榴、柑橘、枣椰子等植物的重要害虫。本文介绍了该虫的寄主、危害、形态特征及生物学特性等内容,并与近缘种番荔枝螟做了鉴定比较。该虫在我国尚未有分布报道,应加强检验检疫措施,以防止其入侵我国。