抗Nodal单克隆抗体的制备及夹心ELISA试剂盒的研制

利用Nodal成熟肽为抗原免疫小鼠,取其脾脏B淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA法、融合细胞有限稀释法克隆筛选出阳性单克隆杂交瘤细胞株,接种至小鼠腹腔,培养后抽取腹水并用饱和硫酸铵沉淀法初步纯化,从而获得抗Nodal单克隆抗体。该单克隆抗体经特异性验证实验后,与Nodal的多克隆抗体兔血清一道分别作为夹心ELISA检测试剂盒的上下层抗体使用,建立了以Nodal为抗原的夹心ELISA试剂盒的检测方法,并进行了对肿瘤细胞提取物、肿瘤小鼠血清的检测。该研究为该试剂盒在肿瘤诊断方面的应用奠定了基础。

稳定高表达和干扰Nodal基因黑色素瘤细胞株构建及EMT表型鉴定

目的:构建稳定过表达及稳定干扰Nodal的黑色素瘤细胞B16细胞株,并鉴定其EMT表型,用于研究Nodal诱导黑色素瘤EMT的现象及机理。方法:将过表达小鼠Nodal基因的质粒pL-tdTomatomNodal,及携带有干扰Nodal基因序列的shRNA质粒pGFP-V-RS-Nodal,分别转染B16细胞。通过抗性筛选富集,阳性克隆挑选及扩大培养,获得稳定转染细胞株B16/dT-mNodal及B16/sh-Nodal。通过实时荧光定量PCR和Western blot技术检测胞内Nodal的过表达及敲除情况和EMT标记物的表达情况。结果:两株细胞均构建成功,B16/dT-mNodal细胞株发出强烈红色荧光,胞内Nodal水平上调明显,并呈现间质细胞特性;B16/sh-Nodal细胞株发出强烈绿色荧光,胞内Nodal水平下调明显,并呈现上皮细胞特性。结论:成功构建稳定过表达Nodal及稳定干扰Nodal的B16细胞株,并构建Nodal影响B16细胞EMT过程的模型,为研究Nodal在黑色素瘤EMT过程中的作用提供了重要的实验工具。

Parkin调控凋亡、坏死性凋亡和焦亡的研究进展

细胞的死亡有多种形式,包括凋亡、坏死性凋亡、焦亡等,各具有独特的分子特征,发挥着不同的功能。近年来,对各种死亡形式的功能和机制研究不断深入,围绕着细胞死亡途径的特征分子及其调控取得重要进展。Parkin作为E3泛素连接酶,通过其对底物的泛素化修饰,而发挥多种生物学功能。除了其被熟知的介导线粒体自噬途径之外,近年的研究还发现Parkin通过直接泛素化修饰多种"死亡"特征分子调控细胞死亡进程和肿瘤的发生。该文综述了Parkin参与调控细胞死亡进程的作用和方式,对其以线粒体自噬依赖和非依赖的方式调控细胞死亡的机制深度解析,以揭示细胞死亡相关的分子生物学奥秘。