旋毛虫Ts-DNaseⅡ-7蛋白对Caco-2肠上皮细胞屏障的影响

为了探索旋毛虫成虫期核酸酶家族Ts-DNaseⅡ-7蛋白对Caco-2肠上皮细胞屏障模型的作用及机制,本研究采用Transwell细胞培养板构建Caco-2肠上皮细胞屏障,当跨膜电阻值(TEER)达到400Ω·cm^(2)即判定肠上皮屏障模型构建成功。将试验组分为对照组(control)、PBS组、Ts-DNaseⅡ-7组(5μg/m L)、阳性对照LPS组(15μg/m L),作用48 h后,检测跨上皮电阻值(TEER)和对FITC的通透性;Western-blot和荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞Claudin 1、Occludin和ZO-1的蛋白表达水平和m RNA表达水平;通过细胞免疫荧光观察各组紧密连接蛋白的分布情况。结果,与对照组相比,Ts-DNaseⅡ-7组在第48小时TEER值降低,FITC的通透性增加;Claudin 1、Occludin和ZO-1的蛋白及m RNA的表达水平降低;免疫荧光试验可见细胞间的网状结构荧光不连续。结果表明,旋毛虫成虫期Ts-DNaseⅡ-7蛋白可破坏肠上皮细胞的物理屏障,有助于旋毛虫实现顺利寄生。