微芯片电泳技术鉴定金银花和山银花

目的利用微芯片电泳技术对金银花和不同基原山银花进行鉴定。方法根据忍冬科植物的基因序列变异位点分别设计出金银花和山银花的特异性聚合酶链式反应(PCR)引物,运用等位基因特异聚合酶链式反应(AS-PCR),对各药材的DNA进行特异性扩增,并应用全自动微芯片电泳技术对扩增产物进行分析。结果使用金银花PCR引物时,金银花可扩增出约468 bp的特征性DNA片段,而不同基原的山银花几乎没有该片段;使用山银花PCR引物时,不同基原的山银花均扩增出约331 bp的特征性DNA片段,而金银花几乎没有该片段。结论本方法可对金银花和不同基原的山银花进行快速准确的鉴定,为中药DNA分子鉴定技术的拓展应用提供参考。

挂羊头只能卖羊肉——以基因检测技术解读食品的物种

“民以食为天”，食品安全问题关系着困计民生。随着物质生活的提高，人们对于食品的口感、营养性和安全性提出了更高的要求。进行食品物种的测定，是保证食品口感、营养性和安全性的重要手段。

微芯片电泳仪定量测定混合肉中各肉成分

目的基于微芯片电泳仪开发一种鉴定混合肉的定量方法。方法采用商品化试剂盒对不同比例混合的牛肉和猪肉进行处理,无需精制DNA,直接进行PCR过程。全自动的微芯片电泳仪,不仅可以测量DNA/RNA的片段长度,且采用了内标物和样品的同时出峰,通过两者峰面积的比值,可以测量出样品出峰片段的相应浓度。本文使用微芯片电泳仪测定不同比例混合的猪肉和牛肉目标PCR产物片段的长度和浓度,制作标准曲线。结果在猪肉和牛肉混合肉样品中检测到相应的目标PCR产物,并且两种肉的PCR目标产物浓度和样品的质量呈大致的线性关系。结论使用本方法可以实现混合肉中各成分的定量检测,为肉类掺假的鉴定提供了一种有力的分析手段。

注射用黄芪多糖相对分子质量测定方法的比较及研究

采用不同的方法对注射用黄芪多糖相对分子质量进行测定与比较。以SHODEX GS-620为色谱分离柱,右旋糖酐葡聚糖作为对照品,采用高效凝胶渗透色谱-示差检测器(GPC-RI)测定注射用黄芪多糖的重均分子量(M_w)。同时采用多角度激光光散射法(MALLS)及基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)对其相对分子质量进行测定。GPC-RI法测得注射用黄芪多糖依次呈现4个色谱峰,其M_w分别为:138万, 23.1万, 1.8万, 480; MALLS法测得3个信号较强的色谱峰,其M_w分别为:114.8万, 18万, 4.3万; MALDI-TOF-MS法测得在15.5万和1.8万有较强的信号,并获得黄芪多糖的糖残基单元为己糖。通过3种方法的测定与相互验证,初步确定了注射用黄芪多糖各分离峰的M_w,同时获取了部分黄芪多糖单元结构信息。最终经过普适校正后的GPC-RI法可应用于黄芪多糖的M_w测定。在研究中3种方法各有其优势,采用相互比较和验证的方式测定中药多糖可获得更为准确的结果。

微芯片电泳结合多重PCR法在中药材水蛭品种特异性鉴定中的应用

目的:通过特异性引物的聚合酶链式反应(PCR)法结合微芯片电泳检测的方法,特异性鉴别宽体金线蛭、日本医蛭、菲牛蛭3种水蛭品种。方法:针对宽体金线蛭、日本医蛭、菲牛蛭3个品种的线粒体同源序列,设计区分正伪品水蛭以及分别鉴定3个品种水蛭样品的特异性引物;通过PCR和微芯片电泳检测的方法验证所设计引物的特异性;将验证得到的特异性引物进行整合,建立3个品种的特异性引物用于三重PCR的方法。结果:确定了用于区分宽体金线蛭、日本医蛭、菲牛蛭3个品种中正伪品的特异性引物KA;确定了宽体金线蛭特异性引物KT,日本医蛭特异性引物RI,菲牛蛭特异性引物FN;建立了3种特异性引物进行三重PCR鉴别3个品种水蛭药材的方法。结论:通过特异性引物结合三重PCR的方法,可以同步鉴定宽体金线蛭、日本医蛭、菲牛蛭的人为预混样品,鉴定结果准确,且用于三重PCR的特异性引物不存在引物之间相互结合或非特异性扩增的现象。