p53基因对HL-60细胞端粒酶活性和人端粒酶逆转录酶基因表达的影响

为了研究野生型 p53基因转染的HL 60细胞端粒酶活性和人端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因表达的变化 ,采用脂质体法将野生型 p53基因转染HL 60细胞 ,用TUNEL检测细胞凋亡 ,用端粒重复扩增法 (TRAP) 酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测端粒酶活性变化 ,以及用RT PCR方法检测hTERTmRNA表达的变化。结果显示 :转染野生型p53基因的HL 60细胞在 32 .5℃培养 2 4小时和 72小时后 ,凋亡率分别为 8.3 %和 2 1 .0 % ,hTERTmRNA和端粒酶活性分别下降至对照组的 68.4%和 55 .8%及 2 7.3 %和 8.9%。结论 :p53基因能下调HL 60细胞hTERTmRNA和端粒酶活性 。

单顺反子表达人GM-CSF和B7.1融合基因真核表达载体的构建和鉴定

目的 构建单顺反子表达人 GM- CSF和 B7.1融合基因真核表达载体。 方法 应用巨引物 PCR技术对 h GM- CSF基因 c DNA进行定点突变 ;应用 PCR重叠延伸法 ,将 h GM- CSF和 h B7.1基因的 c DNA编码序列通过一 linker序列拼接 ,构建 h GM- CSF与 h B7.1融合基因 h GM- B7.1,将其插入 pc DNA3真核表达载体 ,测定核苷酸序列。 结果 序列分析表明 :(1) h GM- CSF突变体基因 c DNA编码序列的 178位核苷酸由 C变为 A,其余核苷酸序列均未发生变化 ;(2 ) h GM- CSF、linker、h B7.1的连接顺序、方向及序列完全正确。 结论 构建 pc DNA3- h GM- B7.

初治急性白血病院内感染106例分析

急性白血病（ＡＬ）是一种弥漫性、进行性恶性增殖性疾病，由于患者自身免疫功能低下，加上反复的化疗致使机体免疫功能更加低下，故院内感染的发生率明显高于其它疾病。本文对我院１９９８年１月～１２月住院的１０６例初治ＡＬ患者院内感染情况进行分析，现报告如下。１...

维甲酸诱导HL-60细胞分化过程中端粒酶活性与hTERT,c-myc和bcl-2表达的研究

为了探讨全反式维甲酸 (ATRA)诱导HL 60细胞分化过程中端粒酶活性与hTERT ,c myc和bcl 2mRNA表达的变化规律及其意义 ,复制HL 60细胞的诱导分化模型 ,在分化前和分化过程中通过端粒重复序列扩增PCR ELISA方法测定端粒酶活性 ,采用RT PCR方法检测hTERT ,c myc和bcl 2mRNA表达水平。结果显示 ,在ATRA诱导HL 60细胞分化过程中 ,端粒酶活性水平逐渐下降 ,hTERTmRNA表达下调的同时c myc和bcl 2mRNA表达亦下调 ,且hTERTmRNA下调早于端粒酶活性水平下降。结论 :全反式维甲酸诱导的HL 60细胞分化过程与端粒酶活性降低和hTERT ,c myc及bcl

ZnPcS_2P_2介导的光动力疗法联合mGM-CSF、mB7.1基因修饰的瘤苗治疗小鼠淋巴瘤

目的研究两亲性酞菁锌光敏剂ZnPcS2P2介导的光动力疗法(ZnPc-PDT)联合GM-CSF、B7.1基因修饰的EL-4细胞,对小鼠淋巴瘤的抑制作用。方法应用反复多次转染的方法,分别将逆转录病毒pLXSN、pLXSNmGM-CSF、pLXS-NmB7.1导入EL-4细胞,分别命名为EL-4/pLXSN、EL-4/GM和EL-4/B7。进行ZnPc-PDT时,经荷瘤小鼠的尾静脉注射ZnPcS2P2,4h后局部用波长670nm的激光照射瘤体;光源为670nm的半导体激光仪。将40只荷瘤小鼠分为5组,每组8只,即对照组(不做任何处理)、EL-4/B7+EL-4/GM对照组、ZnPc-PDT对照组、ZnPc-PDT+EL-4/pLXSN对照组、ZnPc-PDT+EL-4/B7+EL-4/GM实验组。隔天测量瘤块的大小,观察荷瘤小鼠淋巴瘤的生长情况,并计算瘤块的相对体积(RTV)。观察荷瘤小鼠的生存期及瘤组织的病理学改变。结果实验组的生存率高于各个对照组(P<0.01)。Zn-Pc-PDT组小鼠的生存期略高于EL-4/B7+EL-4/GM组(P=0.01)。结论mB7.1、mGM-CSF基因修饰的瘤苗可显著增强ZnPc-PDT的抗肿瘤效应。

TGF-β_1和/或TNF-α反义PS-ODNS对造血干/祖细胞体外扩增的作用

目的 :研究TGF - β1和 /或TNF -α反义硫代寡核苷酸 (PS -ODNS)对造血干 /祖细胞体外扩增的调节作用。方法 :采用免疫磁珠分离技术从新鲜脐带血中分离CD3 4 + 细胞 ,用淋巴细胞分离液从骨髓血中分离单个核细胞 ,应用液体培养及造血祖细胞集落分析检测TGF - β1和 /或TNF -α反义PS -ODNS对CD3 4 + 细胞数及多向性造血祖细胞 (CFU -mix)、粒 -单祖细胞 (CFU -GM)、红系祖细胞 (BFU -E和CFU -E)集落数的影响。结果 :培养体系中加入TGF - β1反义PS -ODNS后CD3 4 + 细胞数、CFU -mix、CFU -GM、BFU -E和CFU -E集落数分别是对照组 (仅加细胞因子组 )的 4、2 6、2 7、1 8、2 1倍 ;加入TNF -α反义PS -ODNS后CD3 4 + 细胞数、CFU -mix、CFU -GM、BFU -E和CFU -E集落数分别是对照组的 4、2 9、2 6、1 7、1 8倍 ;同时加入TGF - β1和TNF -α反义PS -ODNS后CD3 4 + 细胞数、CFU -mix、CFU -GM、BFU -E和CFU -E集落数分别是对照组的 5 3、2 1、2 7、1 9、1 8倍。结论 :采用反义PS -ODNS阻断内源性TGF - β1和TNF -α是造血干 /祖细胞体外扩增的有效措施之一。

水流动力学注射PD-L1质粒在清髓预处理小鼠移植模型中的表达

目的:建立水流动力学法表达PD-L1质粒小鼠模型并探讨清髓预处理对其表达的影响。方法:利用质粒扩增提取,应用尾静脉水流动力学注射法、门静脉胶原酶灌流分离肝细胞技术、RT-PCR、流式细胞术及ELISA法检测PD-L1的表达和功能;利用动物模型了解化疗清髓或放射清髓对水流动力学注射PD-L1质粒表达的影响。结果:通过尾静脉大体积快速注射PD-L1质粒,在注射后8 h出现PD-L1 mRNA和蛋白的表达,24 h达峰值,7 d后回归基线;血清PD-L1在注射后24 h就达到了100μg/ml左右,7 d后达峰值,21 d内均保持高表达,1个月后回归基线;水流动力学注射所表达的PD-L1功能与文献报道一致;在各个时间点放/化疗清髓组与未预处理且转染的对照组相比PD-L1表达并无显著性差别;通过该方法注射表达PD-L1的小鼠移植后存活率高于对照组(P<0.05)。结论:小鼠清髓预处理对水流动力学注射PD-L1表达并无影响,注射PD-L1质粒可有效应用于小鼠造血干细胞移植模型中。

临床医师期待的检验“大神”

随着医学的快速发展,实验室诊断的重要性日趋显著,已逐渐成为临床诊断、治疗、预后判断及公共卫生必不可少的手段。临床疾病的常规诊疗离不开医学检验,疑难杂症的诊治更需依靠检验"大神"显身手。临床医学的关键技术突破,有赖于检验医学作支撑。检验技术的飞速发展,促进精准医学计划在临床领域有序实施。临床医学的进步高度依赖检验医学发展,临床医师需要检验"大神"的保驾护航。

急性白血病原代细胞TGF-βⅡ型受体同种型的发现及其临床意义

转化生长因子β(TGF-β)及其受体的基因突变已被证实在肿瘤形成中具有重要的作用,在许多肿瘤中都发现有TGF-βⅡ型受体(TβR-Ⅱ)表达异常或表达缺失。为了了解急性白血病患者TβR-Ⅱ基因是否存在异常,本研究应用大范围RT-PCR的方法分段扩增急性白血病原代细胞TβR-Ⅱ的编码序列,并结合序列测定技术,分别对6例急性白血病患者以及11例正常人TβR-Ⅱ的编码序列进行突变检测。全部患者经骨髓细胞形态检查符合FAB诊断标准且骨髓原始细胞≥90%。肝素抗凝骨髓4-5ml,分离单个核细胞,用TRIZOL试剂提取总RNA,反转录后行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物。回收目的片段,克隆到PGEM-T载体,进行序列的测定。结果显示:在检测的病人中有2例病人中存在TβR-Ⅱ的同种型,而此2例病人临床预后不良。结论:部分白血病病人存在TβR-Ⅱ的同种型,而且该同种型可能与预后有关。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂增强三氧化二砷对U266细胞株的抗肿瘤作用机制研究

目的通过研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(SAHA)、三氧化二砷(ATO)及其联合应用对U266细胞增殖和凋亡的影响,探讨药物的联合应用及其相互作用可能的机制。方法采用CCK-8法检测SAHA、ATO单用或联合应用对U266细胞增殖抑制作用; Annexin-VFITC/PI双染流式细胞术、AO/EB荧光染色法检测细胞凋亡; Western blot方法检测细胞死亡过程中Acetyl-Histone H3、Acetyl-Histone H4、Akt、P53等相关蛋白的变化。结果 SAHA和ATO可明显抑制U266细胞增殖,且具有时间和剂量依赖性。两药联合对U266细胞的增殖抑制具有相加作用。SAHA和ATO诱导U266细胞凋亡呈剂量依赖性。SAHA 2μmol/L、ATO 16μmol/L以及SAHA 2μmol/L与ATO 16μmol/L联合作用后48 h,U266细胞凋亡率分别为(17. 90±2. 60)%、(26. 45±4. 95)%和(81. 60±4. 20)%。两药联用组细胞的凋亡率较单药组均明显升高(P <0. 01),以晚期凋亡为主。Western blot结果显示,SAHA单药组及联用组AcetylHistone H3和H4蛋白表达水平显著上调;联用组P53蛋白表达下调;各药物组Akt蛋白表达水平未见明显改变。结论 SAHA、ATO对U266细胞均具有抑制增殖及诱导凋亡的作用,其效果呈时间-剂量依赖性。将SAHA与ATO联用可明显抑制U266细胞的增殖,降低P53表达水平,明显提高U266细胞凋亡率。其作用的机制可能与上调AcetylHistone H3蛋白、Acetyl-Histone H4蛋白表达水平有关。

泰能治疗免疫功能低下患者合并严重感染的临床观察

泰能(美国默沙东药厂)是β-内酰胺类抗生素,它抗G^+、G^-需氧菌、也抗厌氧菌、是个广谱抗生素。近年来我们使用泰能治疗免疫功能低下患者合并严重感染30例,收到良好效果,现报告如下。临床资料 1.病例选择本组观察30例均为住院患者,男21例,女9例,平均年龄38.9岁(14～63岁)。均经临床及实验室检查确定为合并严重感染。

白血病细胞端粒酶活性的研究

目的 :研究白血病细胞端粒酶活性表达及其意义。方法 :采用 PCR- EL ISA半定量方法测定端粒酶活性。结果 :6 8.6 % (5 9/ 86 )急性白血病 (AL )患者和 80 % (12 / 15 )慢性粒细胞白血病急性变 (CML - BP)患者表达高端粒酶活性 ;而慢性粒细胞白血病慢性期 (CML - CP)患者 ,无一例表达高端粒酶活性。急性淋巴细胞白血病患者端粒酶活性高于急性髓性白血病患者 ,CML - BP端粒酶活性高于 CML - CP,而 CML - CP端粒酶活性则低于正常对照组。 AL端粒酶活性水平与患者的性别、年龄无关 ,也与治疗后缓解率无关。结论 :激活或上调端粒酶活性在大多数 AL发生和慢性粒细胞白血病急性变过程中起着重要作用 ;端粒酶活性测定可鉴别 CML - BP与 CML - CP;

应用白消安联合氟达拉滨预处理方案建立小鼠半相合骨髓移植移植物抗宿主病模型

HLA半相合异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）已成为治愈恶性血液病的重要手段[1].但是其移植物抗宿主病（GVHD）的发生率高,是引起移植相关死亡的主要原因之一.目前GVHD的小鼠模型绝大部分是以全身照射（TBI）为预处理方案,而且多数是MHC完全不相合的移植模型,不能很好地模拟临床半相合骨髓移植（BMT）实际状况.

p53基因诱导白血病细胞凋亡的机制研究

目的 探讨p5 3基因诱导白血病细胞凋亡过程中内源性TGF β1 、TNF α、端粒酶活性、Bcl 2表达的改变及其意义。方法 利用脂质体将温敏型p5 3基因 [pN5 3cG(Val135 ) ]导入p5 3基因缺失的白血病细胞系HL 6 0、K5 6 2细胞 ,经G4 18筛选 ,获得稳定表达P5 3蛋白的抗性克隆细胞HL 6 0pN5 3cG ,K5 6 2 pN5 3cG细胞。采用缺口末端标记法、片段化DNA分析、RT PCR、定量PCR、ELISA、PCR ELISA、流式细胞术等方法检测外源性p5 3基因诱导白血病细胞凋亡过程中TGF β1 、TNF α、bcl 2、端粒酶反转录酶 (hTERT)mRNA表达变化、细胞上清TGF β1 水平和端粒酶活性及TGF β1 、TNF α反义PS ODNS对白血病细胞凋亡和Bcl 2蛋白表达的影响。结果 ①外源性野生型p5 3基因诱导细胞凋亡过程中内源性TGF β1 和TNF αmRNA表达上调 ,bcl 2及hTERTmRNA表达下调 ,细胞培养上清TGF β1 蛋白水平明显升高 ,端粒酶活性水平下降 ;②TGF β1 、TNF α反义PS ODNS能够明显抑制野生型p5 3基因诱导细胞凋亡的发生 ,并使细胞bcl 2mRNA及蛋白表达恢复到处理前的水平。结论 p5 3基因诱导白血病细胞凋亡可通过上调内源性TGF β1 和TNF α水平 ,下调hTERTmRNA表达及端粒酶活性 ,抑制bcl 2基因表达而发挥作用。

非血缘脐血移植治疗成年人恶性血液病的展望

近年来,非血缘脐血移植(UCBT)治疗成年人恶性血液病取得较多进展.UCBT治疗急性白血病的疗效与单倍体移植、非血缘骨髓移植、外周血干细胞移植的疗效相当,成为治疗恶性血液病的重要选择.单份UCBT的优势在于移植物抗宿主病(GVHD)发生率低且易于控制,保留有较好的移植物抗肿瘤(GVT)效应,并且患者接受治疗后生活质量较好.而UCBT的劣势在于其脐血干细胞数量少(尤其对于成年患者),因此其植入率低、植入较慢、免疫重建慢、移植早期感染发生风险高.改善UCBT的植入率低、免疫重建慢等问题,可以提高UCBT治疗成年人恶性血液病的疗效,丰富造血干细胞移植的供源.本文对今后UCBT治疗成年人恶性血液病,主要在解决UCBT植入问题、免疫重建问题、脐血人类白细胞抗原(HLA)配型等方面进行展望.

TCR Vβ亚家族分析法识别小鼠亚临床MHC 缺失诱导的移植物抗宿主病

目的：研究T细胞抗原受体（ TCR） Vβ亚家族分析法用于亚临床主要组织相容性复合体（MHC）缺失相关的移植物抗宿主病（GVHD）的检测。方法 BALB／c小鼠给予9．5 Gy（950 rad）全身放射，放射后回输T细胞去除的C57BL／6或DBA／2骨髓细胞。将小鼠分为两组：WT组：回输来自野生型骨髓细胞106个／只；MHC－／－组：回输来自MHCⅡ类分子缺失的骨髓细胞106个／只。移植后观察小鼠GVHD典型症状，病理切片确诊GVHD。结果典型的MHCⅡ类分子缺失相关的GVHD可以在异基因（H-2b→H-2d）C57BL／6动物模型中诱导。在DBA ／2模型，MHCⅡ类分子缺失诱导的是亚临床的GVHD。 TCR Vβ亚家族分析提示TCR Vβ6与病理符合度好，可识别该模型亚临床GVHD。结论利用TCR Vβ亚家族分析法发现TCR Vβ6升高可作为识别小鼠亚临床MHC缺失诱导的移植物抗宿主病的指标。

伊马替尼联合其他化疗方案治疗Ph^+急性淋巴细胞白血病

目的探讨伊马替尼(商品名:格列卫)联合其他化疗方案治疗Ph^+急性淋巴细胞白血病(ALL)的疗效和并发症。方法回顾性分析了6例住院Ph^+ALL患者的治疗情况。除1例单用VDLP方案诱导缓解治疗外,其余5例均采用伊马替尼联合其他化疗方案诱导缓解治疗。结果3例经伊马替尼联合其他化疗方案后获完全缓解(CR);1例获部分缓解(PR)。2例治疗后bcr-abl基因转阴性。化疗后都发生了不同程度的感染,以呼吸道和肛周感染为主。结论伊马替尼联合其他化疗方案治疗Ph(+)ALL有较高的缓解率,但缓解后治疗对长期生存同样重要。

造血干细胞移植治疗血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤临床分析

目的分析造血干细胞移植(HSCT)治疗血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)的临床疗效.方法回顾性分析2007年6月至2017年6月期间在国内八所医院接受HSCT的AITL患者.结果共有19例患者纳入本研究,其中男13例,女6例,中位年龄50(32~60)岁;自体造血干细胞移植(auto-HSCT)12例,异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)7例(均为同胞全相合供者,其中2例为auto-HSCT后复发患者).auto-HSCT组移植前疾病处于完全缓解(CR)、部分缓解(PR)状态者分别为5例、7例;allo-HSCT组患者移植前疾病处于PR、疾病进展(PD)状态者分别为2例、3例.失访2例(均为auto-HSCT组),中位随访时间46.5(1~100)个月.allo-HSCT组3例患者发生急性移植物抗宿主病(GVHD)(Ⅰ度2例,Ⅱ度1例),5例发生慢性GVHD(局限型2例,广泛型3例).auto-HSCT组死亡4例(原发病复发死亡3例),allo-HSCT组死亡3例(移植相关死亡2例,原发病复发死亡1例).auto-HSCT组(10例)、allo-HSCT组(7例)的3年总生存率分别为56%(95%CI 32%~100%)、57%(95%CI 30%~100%)(P=0.979);3年累积无进展生存率分别为34%(95%CI 14%~85%)、57%(95%CI 30%~100%)(P=0.451).结论 auto-HSCT和allo-HSCT均是AITL的有效治疗方法.