构建干扰RhoA的短发夹RNA真核表达载体

目的利用pGenesil-1质粒构建针对RhoA的短发夹RNA(shRNA)表达载体。方法设计2个shRNA结构的互补DNA序列,经退火成双链,胶回收酶切pGenesil-1大片段,T4DNALigase连接酶切大片段和DNA序列,得到质粒pGenesil-1-RhoA1和pGenesil-1-RhoA2.转化感受态细胞DH5a,扩增,提取重组质粒进行酶切鉴定。结果成功构建靶向RhoA的shRNA重组质粒载体.酶切鉴定和测序分析重组质粒,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,经酶切凝胶电泳证实载体构建成功。结论表达靶向RhoA的shRNA表达框成功构建在重组质粒载体上。

肝癌细胞中RhoA小干扰RNA载体的构建与鉴定

目的构建靶向 RhoA 基因的 RNA 干扰(RNAi)载体。方法根据人 RhoA 基因序列设计两条短双链,人工合成后,连接到真核表达载体 Pgenesil-1中,构成 Pgenesil-1-siRhoA1、Pgene-sil-1-siRhoA2两个重组质粒,转入人肝癌细胞(HEPG2)中,Western blot 方法检测 RhoA-siRNA 对 RhoA表达的抑制效果,确定一个重组质粒进行下一步研究。结果两质粒都有沉默 RhoA 基因的作用,Pgen-esil-1-siRhoA1重组质粒作用更强烈一些,使用 Pgenesil-1-siRhoA1质粒进行下一步研究。结论 Pgen-esil-1-siRhoA 重组质粒的成功构建,为研究 RhoA 与肝细胞癌侵袭转移的关系提供实验模型。