EB病毒A73基因多态性及其与鼻咽癌易感性的关系

背景与目的:EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)BamH Ⅰ-A右向转录物(BamH Ⅰ-A rightward transcripts,BARTs)可能与鼻咽癌的发生发展相关,而A73是BARTs家族的主要成员之一,该基因mRNA的表达水平在鼻咽癌组织中显著增高,提示A73参与鼻咽癌变过程。本研究旨在发现A73基因多态性及寻找与鼻咽癌易感性相关的多态性位点。方法:以从23例鼻咽癌组织和19例非鼻咽癌患者(鼻咽正常)的漱口水中提取的DNA为模板,巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增A73基因的所有外显子,直接测序并比对测序结果,寻找A73基因的多态性位点。随后在54例鼻咽癌成套标本(包括同一鼻咽癌患者的鼻咽癌组织、漱口水、外周血)和48例广东健康人的漱口水及51例健康人外周血中检测前面实验发现的高频变异点的分布情况,比较该位点在不同组织源性及鼻咽癌病例和健康对照之间的差异。所有测序序列均与B95.8细胞株序列比较。结果:在A73基因外显子区域共发现了3个多态性位点A157154C、G159188C、G159209C(与B95.8株序列比较),其中A157154C呈现高频变异。在外周血中,鼻咽癌患者A157154C的比例(52/54,96.29%)显著高于广东健康人(33/51,64.70%,P<0.001)。54例成套标本中13例该变异点的变化在同一鼻咽癌患者的鼻咽组织、漱口水和外周血中是不一致的。结论:A73基因A157154C的EBV亚型可能与鼻咽癌的发生发展相关。

Hsp90选择性抑制剂17-AAG诱导白血病细胞株凋亡的基因谱研究

目的:探讨热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂17-AAG对急性白血病细胞株HL-60和NB4细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。方法:应用CCK-8比色法观察17-AAG对HL-60和NB4细胞的生长抑制作用;用Annexin V/PI标记流式细胞术分析细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP的表达水平及其活化状态,采用实时定量PCR法检测17-AAG处理后NB4细胞的凋亡相关基因的mRNA变化。结果:17-AAG呈剂量依赖性抑制白血病细胞的生长。Annexin V测定、细胞周期分析和Caspase-3、PARP1的活化均表明17-AAG诱导白血病细胞的凋亡。实时荧光定量PCR分析发现,17-AAG处理后实验组和对照组相比有56个基因显著上调,23个基因显著下调。结论:17-AAG可诱导白血病细胞的凋亡,抑制细胞增殖。17-AAG处理白血病细胞后凋亡相关基因发生明显变化,激活凋亡信号通路可诱导细胞发生凋亡。

髓样相关蛋白MRP8/14在小鼠肺炎链球菌性脑膜炎脑损伤中的作用

细菌性脑膜炎是各种细菌侵入中枢神经系统引起的脑实质、脑膜或血管的中枢神经系统感染性疾病,而肺炎链球菌(Streptococcus Pneumoniae,SP)是目前细菌性脑膜炎最常见和最主要的致病菌之一.研究SP性脑膜炎脑损伤的发生发展机制可为寻求该疾病新的治疗手段提供初步的实验和理论依据.通过探讨髓样相关蛋白MRP8/14对小鼠脑组织中IgG,Albumin,NSE,caspase3的影响,探讨MRP8/14在小鼠肺炎链球菌性脑膜炎脑损伤中的作用.将48只1. 5~2个月健康雄性BALB/C小鼠随机分为四组:磷酸缓冲盐溶液对照组(PBS组)、MRP8/14蛋白组(MRP8/14组)、肺炎链球菌组(SP组)、肺炎链球菌+MRP8/14蛋白组(SP+MRP8/14组),每组12只;经侧脑室穿刺分别注入PBS、MRP8/14蛋白、SP混悬液、SP+MRP8/14建立动物模型.注射后6,24,48 h对小鼠进行神经行为学评分和体质量的变化率测定;处死小鼠取脑,记录脑组织含水量变化;观察不同时间点小鼠脑组织中Nissl染色阳性细胞及其数量的改变;制备脑组织匀浆,采用ELISA法测定血脑屏障通透性指标IgG,Albumin水平;采用免疫组织化学方法检测脑组织中脑损伤标志物NSE、凋亡相关蛋白caspase3蛋白的表达.结果显示,侧脑室注射6,24,48 h后,SP组小鼠与PBS组相比神经行为学评分明显降低,脑组织含水量明显增加,Nissl染色阳性神经细胞数量减少,IgG和Albumin浓度明显增加,NSE阳性细胞数明显减少,caspase3表达明显升高;SP+MRP8/14组与SP组相比神经行为学评分降低,脑组织含水量增加,Nissl染色阳性神经细胞数量减少,IgG和Albumin浓度增加,NSE阳性细胞数减少,caspase3表达升高趋势更加明显.因此,在小鼠SP性脑膜炎模型中,髓样相关蛋白MRP8/14加剧了SP性脑膜炎小鼠的临床症状、脑水肿、脑组织神经元丢失及脑损伤.

澳门地区孕妇B群链球菌筛查和新生儿早发型感染分析

目的了解澳门地区孕妇B群链球菌(GBS)定植、新生儿早发型B群链球菌感染(GBS-EONI)情况及其风险因素。方法研究采用回顾性资料分析,以目的性抽样方法选取2012至2017年于澳门地区政府医院妇产科门诊进行孕晚期GBS筛检的孕妇2 515名,调查孕妇GBS定植率。选取同年在政府医院出生的20 771名活产儿,收集其出生后7 d内血液、脑脊液和下呼吸道标本细菌培养结果,调查GBS-EONI发生率;再分析孕妇人口学特征、母婴围产期临床资料与GBS-EONI的关系。统计软件使用SPSS 20.0,统计方法以卡方分析和二元逻辑回归分析为主。结果孕妇GBS筛检阳性431例,孕妇阴道直肠GBS定植率为17.1%。培养确诊新生儿早发型GBS入侵性感染24例(感染率为1.2/1 000活产儿)。剖腹产(OR=0.353, 95%CI:0.139～0.897)和分娩时预防性使用抗生素(OR=0.108, 95%CI:0.024～0.482)为预防GBS-EONI发生的保护因素。结论澳门地区孕妇GBS定植状况与邻近地区接近,GBS-EONI发生率较高。可全面性推广孕晚期GBS筛检及产时预防性用药,以减少新生儿早发型GBS疾病的发生。

MiR-146a 在长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞光老化中作用机制的研究

目的：探讨长波紫外线（UVA）诱导人皮肤成纤维细胞（HSF）光老化中 miR-146a 的表达情况，以及上调 miR-146a 表达对其靶基因 Smad4及细胞光老化的影响。方法以10 J/cm2 UVA 照射 HSF （UVA 照射组），分别在0、3、7、14 d 提取 RNA，实时定量 PCR 检测 miR-146a 的表达量。通过慢病毒转染上调 miR-146a 的表达（miR-146a 过表达组），在7 d、14 d 后用荧光显微镜观察转染效率，并通过实时定量 PCR 验证细胞内miR-146a 表达量。空白对照组为正常培养的 HSF（不做任何处理），miR-146a 过表达组为慢病毒转染 HSF 后，再用 UVA 照射。MTT 法检测空白对照组、UVA 照射组、miR-146a 过表达组、miR-146a 过表达组细胞增殖吸光度（A 值），实时定量 PCR 检测各组细胞内老化相关基因 p53、p16和 p21 mRNA 的表达，Western 印迹法检测各组细胞内 Smad4蛋白表达。采用重复测量的方差分析、析因设计的方差分析进行统计学分析。结果重复测量的方差分析显示，随培养时间的延长，UVA 照射组和空白对照组 miR-146a 的表达量均逐渐下降（F =213.840， P 〈0.01）；UVA 照射组表达量低于空白对照组（F =52.55，P 〈0.01），且照射时间越长，下调越明显。慢病毒转染HSF 后，细胞内均有较高的荧光表达，miR-146a 过表达组在第7天（10.31±0.17）与第14天时（9.65±0.19）的miR-146a 表达量差异无统计学意义（P 〉0.05），但较空白对照组（分别为8.33±0.13和7.86±0.11）显著增高，组间差异有统计学意义（F =42.49，P 〈0.01）。析因设计的方差分析显示，UVA 照射对细胞增殖活性有抑制作用（P 〈0.01），UVA 照射组、UVA ＋ miR-146a 组细胞增殖均分别低于空白对照组、miR-146a 过表达组（P 〈0.01）；慢病毒转染上调 miR-146a 的表达对细胞增殖活性也有影响（P 〈0.01），但 miR-146a 过表达组与空白对照组差异无统计学意义（P 〉0.05），UVA ＋ miR-146a 组显著高于 UVA 照射组（P 〈0.01）。实时定量 PCR 和 Western 印迹法结果显示，UVA 照射可上调 p21、p53、p16 mRNA 的表达（均 P 〈0.01），同时对细胞内 Smad4蛋白表达有促进作用（P 〈0.01）；UVA 照射组、UVA ＋ miR-146a 组 p21、p53、p16 mRNA 和 Smad4蛋白表达均分别高于空白对照组、miR-146a 过表达组（均 P 〈0.01），而 miR-146a 过表达组与空白对照组相比差异均无统计学意义（均 P 〉0.05）， UVA ＋ miR-146a 组均显著低于 UVA 照射组（均 P 〈0.01）。结论在 UVA 诱导光老化的 HSF 中，miR-146a 的表达受到抑制，上调其表达能够抑制 Smad4的表达，促进光老化细胞增殖，起到抗细胞光老化的作用。

皮肤共生菌调节机体免疫应答的研究进展

皮肤是人体最大的器官，也是机体防御外部环境有害物质入侵的第一道防线。皮肤除了由角质形成细胞形成的物理屏障外，还能分泌抗菌肽、活性氧和游离脂肪酸等，对入侵皮肤表皮的病原微生物起直接杀伤作用，是人体先天免疫的重要组成部分。在皮肤表面生存着大量的微生物，包括细菌、真菌、病毒、衣原体和某些原虫，这些微生物对人体的免疫应答至关重要，

核转运信号蛋白1选择性抑制剂KPT-330诱导白血病细胞凋亡的分子机制

目的探讨核转运信号蛋白1（CRM1）选择性抑制剂KPT－330对急性白血病细胞凋亡的诱导作用及可能的分子机制。方法白血病细胞株[人急性早幼粒白血病细胞（NB4）、人慢性粒细胞白血病细胞（K562）、人急性早幼粒白血病细胞（HL－60）]分为对照组（不予KPT－330处理）和KPT－330处理组（予终浓度0.01、0.10、0.20、0.50、1.00、5.00、10.00 μmol/L KPT－330孵育细胞）。应用细胞计数试剂盒（CCK－8）比色法观察KPT－330对白血病细胞的生长抑制作用；应用荧光显微镜观察KPT－330诱发白血病细胞形态的变化；应用Annexin V/PI标记流式细胞术分析KPT－330诱发的细胞凋亡；Western blot检测CRM1表达量及凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶－9 （Caspase－9）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase－3）、DNA修复酶（poly ADP－ribose polymerase，PARP）的表达水平和活化状态；基因芯片分析KPT－330对急性白血病细胞基因表达谱及长链非编码RNA（lncRNA）表达谱的影响。 结果KPT－330呈剂量依赖性抑制白血病细胞的生长，并使CRM1表达下调；与对照组相比，实验组细胞出现了明显的形态异常，较低浓度的KPT－330（0.2 μmol/L和1.0 μmol/L）即可导致白血病细胞的明显凋亡，0.2 μmol/L KPT－330 24 h处理组NB4、K562、HL－60细胞凋亡率（%）分别为（4.95±0.21）%、（14.05±0.07）%、（4.95±0.63）%；0.20 μmol/L KPT－330 48 h处理组（6.10±0.56）%、（20.75±0.21）%、（5.85±0.07）%; 1.00 μmol/L KPT－330 24 h处理组（41.15±0.21）%、（35.45±0.35）%、（15.65±0.07）%；1.00 μmol/L KPT－330 48 h处理组（52.45±0.35）%、（47.45±2.47）%、（16.80±1.98）%，与对照组[24 h NB4、K562、HL－60：（3.30±0.28）%、（9.50±0.56）%、（2.00±0.14）%；48 h NB4、K562、HL－60：（3.70±0.14）%、（3.50±0.28）%、（2.15±0.21）%]比较差异均有统计学意义（均P〈0.05）。在多种白血病细胞中均出现G2期细胞显著减少，以及subG1期细胞的增加，活化型Caspase－3、Caspase－9和PARP蛋白表达水平增加。基因芯片分析表明KPT－330诱导白血病细胞凋亡可能与Toll样受体（TLR）信号及谷胱甘肽代谢信号通路等密切相关。 结论CRM1抑制剂KPT－330可显著抑制白血病细胞增殖，促进细胞凋亡。KPT－330诱导白血病细胞凋亡可能与TLR信号以及谷胱甘肽代谢信号通路等相关。