“三新三提”凝聚发展新动力

为深化“两学一做”学习教育成果,加快推进简阳全面融入成都同城同质同域发展,今年10月,简阳市启动为期3个月的“新起点、新征程、新目标,提素质、提能力、提形象”大讨论,同步设置征文比赛、普通话演讲比赛、辩论赛、“金点子”征集等活动,组织全市党员、干部重点围绕融入大成都后“怎么看、怎么办、怎么干、怎么提”四大问题开展讨论,着力引导广大党员干部进一步统一思想、提振信心、鼓足干劲,为“建设天府新区、冲刺全省十强、迈向全国百强,奋力打造成都市经济发展新兴增长极”凝聚正能量、增添新动力.

发热伴血小板减少综合征病毒温度敏感性研究

目的研究发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)对温度的敏感性,为SFTSV的消毒和实验室生物安全防护提供依据。方法将SFTSV细胞培养上清液分装到250μL的PCR管中,100μL/管,分别放置在4℃冰箱,以及25℃、37℃、39℃、56℃、70℃金属浴中,处理预定时间后,再将其感染Vero细胞,采用间接免疫荧光法测定病毒滴度。结果随温度的升高,病毒滴度下降速度加快,在4℃、25℃、37℃和39℃放置24 h后病毒滴度由10^(7.25)/100μL分别下降到10^(7.00)/100μL、10^(6.75)/100μL、10^(6.50)/100μL和10^(5.00)/100μL。同一温度,随放置时间的延长,病毒滴度下降趋势也愈加明显,SFTSV在4℃、25℃、37℃放置72 h后,病毒滴度由10^(7.25)/100μL分别下降到10^(6.63)/100μL、10^(6.50)/100μL和10^(3.38)/100μL。SFTSV在39℃放置72 h失去感染性,在56℃作用180 min或70℃放置5 min即被灭活。结论SFTSV 70℃放置5 min即被灭活,但其在4℃和25℃条件下放置3 d,病毒滴度变化不明显,实验室和医务人员应重视个人防护和对被SFTSV污染过的物品的消毒。

中国部分地区发热伴血小板减少综合征病毒M片段分子流行病学研究

目的研究中国地区发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus, SFTSV)分离株已上传至GenBank序列中M片段基本特征及该病毒的遗传和进化规律。方法从GenBank中获取2020年6月25日前分离于中国的SFTSV毒株M片段全序,利用BioEdit软件进行多序列比对,MEGA5.0软件构建系统发生树,比较不同型别及不同来源SFTSV核苷酸和氨基酸的同源性。结果在GenBank数据库收集到203株中国地区发热伴血小板减少综合征病毒分离株的M片段全序,其中分离于人的毒株185株,占总毒株的91.1%,分离于蜱的毒株共11株,占总毒株的5.4%,分离于其他动物如羊、鼠、刺猬的共5株,占总毒株的3.5%。系统发生树分析显示中国地区流行优势株为C2基因亚型,占总毒株的42.4%,核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为96.4%~100.0%和94 .5%~100.0%。人源毒株与动物分离株同源性极高,核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为92.5%~100.0%和92.0%~100.0%。结论对分离自中国的发热伴血小板减少综合征病毒分离株优势株为C2型,且存在着多种型别的共循环。SFTSV可能有从C型向J型进行适应性转换的可能。

肠道病毒71型EGFP标记重组病毒的构建与拯救

目的构建并拯救增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标记的EGFP-EV-A71重组病毒。方法利用重叠PCR技术,以pMD19T-SDLY107全长质粒为模板,将2A蛋白酶识别序列加入到结构蛋白VP4的5′端;以pEGFP-N1质粒作为模板,扩增获得EGFP目的片段,将其插入到上述重组质粒中,得到重组质粒pMD19T-107-EGFP。经酶切和体外转录后,转染横纹肌细胞肉瘤(RD),拯救获得重组病毒EGFP-EV-A71。采用Karber法计算细胞培养半数感染量(CCID50)以测定病毒滴度。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同时间点的病毒复制水平,并绘制病毒复制曲线,比较重组病毒与母本病毒的复制力有无差异。乳酸脱氢酶(LDH)和细胞增殖(CCK-8)实验分别测定被感染细胞的细胞损伤率和存活率。结果包含EGFP的重组EV-A71感染性cDNA克隆被成功构建;转染RD细胞后,出现典型的细胞病变并且表达出较强的绿色荧光;重组病毒与母本病毒具有相似的复制动力学特征和致细胞病变效应。结论成功拯救了EGFP标记的重组病毒EGFP-EV-A71。