肿瘤相关性巨噬细胞通过TNF-α/B7H3调节人膀胱癌细胞增殖的研究

目的探讨肿瘤相关性巨噬细胞对人膀胱癌细胞增殖的影响及机制。方法通过佛波酯(PMA)、细菌内毒素(LPS)、干扰素-γ(IFN-γ)刺激人单核白血病细胞系THP-1,建立肿瘤相关性巨噬细胞(TAM)模型。TAM模型与人膀胱癌细胞(T24、5637细胞系)在体外共培养,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测TAM培养液上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化采用CCK8法检测TAM上清液和TAM上清液联合TNF-α中和抗体阿达木单抗处理后人膀胱癌细胞的增殖情况;采用蛋白质印迹法检测人膀胱癌细胞,细胞与TAM和TAM联合阿达木单抗共培养后B7H3的表达。使用CCK8法检测B7H3基因过表达及干扰的人膀胱癌细胞系的增殖情况。结果80 ng/mlPMA联合20 ng/mlINF-γ可诱导THP-1细胞分化为TAM,其细胞表面标志物CD68表达率为(41.2±6.7)%。将TAM与T24及5637细胞共培养72 h后,细胞相对增殖率[(125.4±3.9)%和(191.4±13.4)%]较对照组(均为100%)明显升高(P<0.05)。ELISA检测TAM与T24及5637细胞共培养上清液中TNF-α明显升高[(279.5±12.1)pg/ml和(17.4±3.2)pg/ml](P<0.001),同时细胞内B7H3的表达量较对照组明显升高。使用阿达木单抗处理共培养上清液72 h后,ELISA检测上清液中TNF-α明显下降(40.5±2.2)pg/ml,B7H3的表达量较对照组也明显下降,T24及5637细胞相对增殖率([108.8±6.0)%和(98.4±9.0)%]较共培养组([136.6±7.3)%和(131.4±0.4)%]明显下降(P<0.01)。B7H3基因过表达组T24及5637细胞相对增殖率[(129.7±11.5)%和(125.7±6.7)%]较空载体转染组[(102.8±5.4)%和(91.9±13.7)%]显著增加(P<0.05),而B7H3基因干扰组细胞相对增殖率[(82.6±4.5)%和(73.5±9.1)%]较空载体转染组显著降低(P<0.05)。结论TA M通过分泌TNF-α诱导膀胱癌细胞内B7H3蛋白的表达上调,从而促进膀胱癌细胞的增殖。

肿瘤相关巨噬细胞对肾癌细胞增殖的影响及其相关机制

目的探讨肿瘤相关巨噬细胞对肾癌细胞增殖的影响及其相关机制。方法通过十四烷酰佛波醇乙酸酯(PMA)、细菌内毒素(LPS)、干扰素-γ(IFN-γ)刺激人单核细胞白血病细胞系THP-1,建立肿瘤相关巨噬细胞(TAM)模型。TAM模型与肾癌细胞(ACHN、786-O细胞)在体外共培养,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测TAM培养上清液细胞因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的变化;采用MTT法检测TAM上清和TAM上清联合IL-6中和抗体托珠单抗处理后肾癌细胞增殖情况;采用蛋白质印迹法检测肾癌细胞与TAM和TAM联合托珠单抗共培养后乳酸脱氢酶A(LDHA)的表达。使用TAM上清液培养LDHA基因过表达及干扰的肾癌细胞(ACHN、786-O细胞),采用MTT法检测细胞增殖情况,并计算相对增殖率。结果80 ng/ml PMA联合20 ng/ml LPS、20 ng/ml IFN-γ可诱导THP-1细胞分化成TAM,其细胞表面标志物CD68表达率为(36.2±4.5)%。将TAM与ACHN细胞共培养,ELISA检测结果提示上清中IL-6水平较ACHN细胞单独培养明显升高[(138.0±12.4)pg/ml与(19.7±4.9)pg/ml],TNF-α[(122.5±14.2)pg/ml与(12.6±2.3)pg/ml]和IL-1β水平[(89.2±6.4)pg/ml与(69.2±3.5)pg/ml]也明显升高(均P<0.01)。TAM与786-O细胞共培养较786-O细胞单独培养的上清中细胞因子IL-6[(119.2±14.8)pg/ml与(17.1±3.3)pg/ml]、TNF-α[(122.6±14.4)pg/ml与(45.7±7.2)pg/ml]和IL-1β水平[(95.1±11.8)pg/ml与(88.2±12.7)pg/ml]均明显升高(P<0.01)。使用TAM上清处理ACHN、786-O细胞72h后,细胞相对增殖率[(128.6±21.4)%和(124.2±19.7)%]较对照组(均为100.0%)明显升高(P<0.05),同时细胞内LDHA蛋白表达量也较对照组明显升高;使用TAM上清联合托珠单抗处理ACHN、786-O细胞72h后,细胞相对增殖率[(76.5±13.7)%和(74.8±12.5)%]较对照组(均为100.0%)明显降低(P<0.05),同时细胞内LDHA蛋白表达量也显著降低。LDHA基因过表达组ACHN、786-O细胞相对增殖率[(121.5±17.2)%和(122.7±21.6)%]较空载体转染组[(93.3±10.7)%和(89.8±11.2)%]显著增加(P<0.05),而LDHA基因干扰组细胞相对增殖率[(61.4±11.2)%和(58.0±10.6)%]较空载体转染组显著降低(P<0.05)。结论TAM通过分泌IL-6,诱导肾癌细胞内LDHA蛋白表达上调,促进肾癌细胞增殖。

肿瘤相关性巨噬细胞诱导膀胱癌细胞对吉西他滨耐药的实验研究

目的探讨肿瘤相关巨噬细胞(TAM)在膀胱癌细胞对吉西他滨耐药中的作用和耐药机制。方法通过佛波酯、白细胞介素4、白细胞介素13刺激人单核细胞白血病细胞系THP-1, 建立TAM模型。运用免疫荧光技术检测TAM表面分子CD206的表达;使用MTT比色法检测吉西他滨对TAM/膀胱癌T24、5637细胞共培养组和空白对照组的杀伤情况。运用Western blot法检测TAM上清及TAM上清联合吉西他滨处理前后T24、5637细胞内p-STAT3、LDHA的表达。使用MTT比色法检测吉西他滨对野生型及LDHA过表达的T24、5637细胞的杀伤情况。结果 TAM模型建立成功后其表面因子CD206表达明显增加, TAM与膀胱癌细胞共培养可明显削弱吉西他滨对膀胱癌细胞的杀伤, 同时明显上调p-STAT3、LDHA的表达(P<0.05)。吉西他滨处理后, LDHA基因过表达组肿瘤细胞增殖较野生型对照组明显增加(P<0.05)。结论 TAM通过上调膀胱癌细胞表达p-STAT3蛋白来促进肿瘤细胞内LDHA蛋白的表达, 从而诱导膀胱癌细胞对吉西他滨耐药。