抑制鹿源多药耐药结核菌中药的筛选

为了筛选对鹿源多药耐药结核菌有效的中药耐药抑制剂,通过MABA法检测24种中药的水和乙醇提取物对多药耐药结核菌及标准菌H37Rv的体外抗菌效果,将筛选出的抗菌效果好的黄连醇提物和黄连水提物采用紫外分光光度法进行活性成分含量测定,同时以MABA法与标准品比较体外抗结核菌活性。结果显示,黄连、独活和侧柏叶有明显的抗结核活性,其中黄连水粗提物和乙醇粗提物效果最佳,测得它们活性成分即总生物碱含量分别为22.74%和35.23%,并显示二者与小檗碱的体外抗结核作用相同。

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的亚细胞定位研究

为深入研究牛病毒性腹泻病毒E_2蛋白的生物学功能,了解其在哺乳动物细胞中的亚细胞定位情况,采用RT-PCR扩增牛病毒性腹泻病毒Changchun184株E_2基因,将其克隆至真核表达载体pc DNA3.1/V5His A中,并进行酶切鉴定和测序分析,将构建的重组质粒pc DNA3.1/V5His A-E_2经脂质体介导转染至MDBK细胞。继续培养48h后,在激光共聚焦显微镜下观察E_2蛋白在细胞中的亚细胞定位情况。结果表明,E_2蛋白在细胞核与细胞质中均有表达,且绿色荧光呈点状均匀分布。该研究为进一步研究牛病毒性腹泻病毒E_2蛋白的相关功能奠定了基础。

布鲁菌真核表达载体pVAX1-L7/L12-Omp31的构建及鉴定

根据Gen Bank中的布鲁菌核糖体蛋白L7/L12和外膜蛋白Omp31的基因序列设计引物,用重叠延伸PCR方法扩增融合基因,将基因克隆至p VAX1载体,构建p VAX1-L7/L12-Omp31重组质粒。采用脂质体转染的方法,将融合质粒转入Vero细胞中,用间接免疫荧光法和Western blotting检测转染后细胞外源基因的表达情况。结果显示:转染48 h后,融合基因蛋白在细胞内高效表达,为研究融合质粒在布鲁氏菌病动物模型中的免疫效果奠定了基础。