冬凌草素通过抑制NLRP3炎症小体形成减轻蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤

目的本研究探讨冬凌草素对蛛网膜下腔出血后NLRP3炎症小体形成的影响。方法采用蛛网膜下腔出血模型,检测蛛网膜下腔出血后神经功能评分和脑水肿情况;Western blot检测NLRP3炎症小体相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达情况;TUNEL染色考察神经元凋亡的发生;免疫荧光方法检测小胶质细胞的激活情况。结果冬凌草素能够显著改善神经功能和脑水肿的发生;并且能够有效的抑制NLRP3炎症小体的形成,抑制神经元细胞的凋亡。结论冬凌草素能够抑制NLRP3炎症小体的形成和神经元细胞凋亡,改善蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤。

GPR30激活通过抑制NLRP3炎症小体形成改善蛛网膜下腔出血后早期脑损伤

目的探讨GPR30激活对蛛网膜下腔出血的影响及其对NLRP3炎性小体形成的影响。方法采用SD大鼠随机分成三组:假手术组、SAH模型组和SAH模型+GPR30激活剂G1组,每组24只,颈内动脉穿刺法构建SAH模型。SAH 24 h小时后进行神经功能评分;检测脑水肿和Evans Blue渗出率;并利用Western blot和ELISA方法检测NLRP3、ASC、caspase1、IL-1β和IL-18的表达水平;TUNEL染色观察蛛网膜下腔出血后神经元的凋亡情况。结果GPR30激活能够降低NLRP3、caspase1、ASC、IL-1β和IL-18的表达(P<0.05),减少神经元凋亡。结论GPR30激活能够抑制NLRP3炎症小体的形成和神经元凋亡而改善蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤。

染料木黄酮通过SIRT1/p53信号通路对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的作用

目的探讨染料木黄酮(genistein)对蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤(EBI)的影响和作用机制。方法选取成年雄性C57BL/6J小鼠156只,采用血管内穿刺的方法建立小鼠SAH模型。预实验:选取72只小鼠,设置两个时间点24、72 h,每个时间点36只。将每个时间点的小鼠随机分为6组:假手术组(Sham)、模型组(SAH)、溶剂组(SAH+Vehicle)、低剂量组(genistein 5 mg/kg)、中剂量组(genistein 15 mg/kg)、高剂量组(genistein 30 mg/kg),每组6只,分别对SAH后24、72 h的SAH分级、神经功能、脑水含量进行评估,确定药物最佳注射剂量。先选取54只小鼠随机分为3组:假手术组(Sham)、模型组(SAH)、模型+染料木黄酮组(SAH+genistein),每组18只。采用伊文思蓝检测血脑屏障通透性,Tunel染色观察神经元凋亡的情况,Western blot检测凋亡相关蛋白、血脑屏障相关蛋白的表达。而后选取30只小鼠随机分为5组:假手术组(Sham)、溶剂组(SAH+Vehicle)、模型+染料木黄酮组(SAH+genistein)、模型+染料木黄酮+溶剂组(SAH+genistein+DMSO)、模型+染料木黄酮+抑制剂组(SAH+genistein+Sirtinol),每组6只。采用Western blot检测SIRT1、p53、AC p53的蛋白表达水平。结果(1)SAH后24、72 h,中、高剂量组的出血量评分和脑水含量较溶剂组均明显下降,Garcia评分和平衡木实验评分均明显升高,其中中剂量组的作用最为显著,因此选用染料木黄酮15 mg/kg进行后续实验。(2)SAH后24 h,与模型组比较,模型+染料木黄酮组的伊文思蓝渗出量降低,ZO-1、Occludin和Claudin-5蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。Tunel染色和Western blot检测结果显示,与模型组比较,模型+染料木黄酮组神经元凋亡率降低,凋亡蛋白Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Bax表达减少,抗凋亡蛋白Bcl-2增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)SAH后24 h,与溶剂组比较,模型+染料木黄酮组SIRT1蛋白表达显著增加,p53、AC p53蛋白表达均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型+染料木黄酮+溶剂组相比,模型+染料木黄酮+抑制剂组的SIRT1蛋白表达显著下降,p53、AC p53蛋白表达显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论染料木黄酮可以通过SIRT1/p53信号通路,减轻脑水肿和神经元凋亡的作用,改善小鼠SAH后的EBI,对SAH具有显著的治疗意义。

七叶皂苷钠通过调节Keap1/Nrf2/HO-1信号通路抑制神经元细胞凋亡改善蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤

【目的】探讨七叶皂苷钠对小鼠蛛网膜下腔出血的治疗作用及机制。【方法】将C57BL/6J小鼠随机随机分为3组,包括假手术组(32只)、模型组(48只)、七叶皂苷钠组(38只)。模型组、七叶皂苷钠组小鼠采用颈内动脉穿刺法建立蛛网膜下腔出血模型。假手术组除不刺穿颈内动脉外接受相同的手术。造模结束1 h后,七叶皂苷钠组小鼠给予一次性腹腔注射七叶皂苷钠2.8 mg/kg,假手术组和模型组小鼠给予一次性腹腔注射等体积生理盐水。观察其蛛网膜下腔出血评分,神经功能及血脑屏障变化情况;原位末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)标记(TUNEL)染色/神经元核抗原(NeuN)/免疫荧光染色法观察神经元凋亡的变化;蛋白免疫印迹法检测脑组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达的变化。【结果】与假手术组比较,模型组SAH评分增加,Garcia评分和平衡木测试评分降低,脑含水量、伊文思蓝渗出量增加,脑组织Keap1蛋白表达水平降低,而Nrf2、HO-1蛋白表达水平升高(均P<0.05)。与模型组比较,七叶皂苷钠组SAH评分降低,Garcia评分和平衡木测试评分升高,脑含水量、伊文思蓝渗出量减少,脑组织Keap1蛋白表达水平升高,而Nrf2、HO-1蛋白表达水平降低(均P<0.05)。【结论】七叶皂苷钠可通过调节Keap1/Nrf2/HO-1信号通路抑制神经元细胞凋亡改善小鼠蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤。

黄腐酚对蛛网膜下腔出血后神经炎症影响及机制研究

目的探讨黄腐酚(XN)对蛛网膜下腔出血(SAH)后神经炎症的影响及其可能的机制。方法选取120只SPF级雄性KM小鼠纳入本研究。随机将KM小鼠分为假手术(Sham)组(n=24)、SAH组(n=24)、XN 10 mg/kg组(n=24)、XN 25 mg/kg组(n=24)、XN 50 mg/kg组(n=24)。运用颈内动脉线穿刺法构建SAH模型,SAH 24 h后,进行脑水肿检测及神经功能评分。利用TUNEL染色观察SAH后神经细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测TLR4、p-IκBα、p65 NF-κB、白细胞介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达水平。结果SAH组Sugawara评分高于XN 50 mg/kg组,平衡木试验评分低于XN 50 mg/kg组,改良Garcia评分低于XN 25 mg/kg组、XN 50 mg/kg组,脑组织含水量高于XN 25 mg/kg组、XN 50 mg/kg组,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光检测细胞凋亡结果发现,SAH处理后神经元细胞凋亡增加,XN处理后神经元细胞凋亡减少,XN 50 mg/kg组效果最优。SAH组TLR4、IκBα、NF-κB、TNF-α、IL-1β蛋白表达水平明显高于XN 10 mg/kg组、XN 25 mg/kg组、XN 50 mg/kg组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论XN可以通过抑制TLR4表达进而下调IκBα及NF-κB的磷酸化,降低NF-κB的活化,抑制SAH后的神经炎症反应,减轻神经损伤,起到保护神经的作用。

无创脑电磁扰动在蛛网膜下腔出血术后脱水治疗中的应用研究

目的研究无创脑电磁扰动在蛛网膜下腔出血(SAH)后脑水肿程度的检测作用以及对脱水药物使用的指导作用。方法选取北部战区总医院神经外科自2019年6月至2020年6月行手术治疗的SAH患者56例。患者术后每日在甘露醇使用前和使用后2 h进行电磁扰动检测,记录DC值,比较术后1~7 d甘露醇使用前后DC值差异,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估术后第5天的DC值对过早减量/停药的预测效力。结果术后1~7 d,每日使用甘露醇之前DC值随时间增加逐渐减少,且使用甘露醇后2 h的DC值均小于使用甘露醇之前,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman分析结果显示,DC值与时间成负相关关系(r=-0.720,P<0.001)。术后1~7 d的甘露醇使用前后DC值差值比较,差异均无统计学意义(F=0.948,P=0.422)。每日甘露醇使用之前DC值均与颅内压成正相关(P<0.05)。术后第5天DC值判断过早的甘露醇减量/停药,曲线下面积为0.79(95%CI:0.59~0.99),最佳DC值截断点为131,敏感度为87.5%,特异度为50%。结论无创电磁扰动技术可以观察SAH后脑水肿以及脱水治疗的变化过程,并且可以为脱水治疗提供依据。DC值可能成为SAH后脱水治疗效果的评价方式,为患者带来益处。