视网膜干细胞体外诱导分化为神经节细胞的初步研究

目的探讨诱导视网膜干细胞（retinal stem cell，RSC）分化为视网膜神经节细胞（retinal ganglion cell，RGC）的体外培养方法，提供视神经损伤后细胞移植治疗所需的种子细胞。方法悬浮培养胎龄14dLE大鼠来源的RSC，传2代流式细胞仪和免疫荧光鉴定后，用5％血清、BDNF、DAPT、DAPT联合BDNF4组不同方式诱导14d。流式细胞仪行成熟RGC特异性标志物thyl．1鉴定，并对DAPT联合BDNF组不同诱导时间点行RGC相关标志物math5、bm3b、thyl．1和神经干细胞标志物nestin、ki67表达的鉴定。结果传2代的RSCsnestin、ehx10、ki67表达强阳性，部分细胞math5表达阳性；5％血清、BDNF、DAPT、DAPT联合BDNF组诱导RSCs14d后thy1．1阳性率分别为（11．38±1．58）％、（19．10±2．29）％、（23．90±1．09）％、（31．31±2．98）％，两两比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。DAPT联合BDNF组诱导3～5d后部分细胞nestin、ki67、bm3b、math5均阳性表达。结论使用DAPT联合BDNF诱导，可以提高RSCs在体外分化成RGCs的比率，并且诱导3～5d后，RGCs相关标志物出现，细胞仍具有一定增殖能力。

视神经损伤后SDF-1及其受体CXCR4在大鼠视网膜中的分布和表达规律

目的观察Long Evans大鼠视神经损伤后不同时间基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)及其受体CXCR4在视网膜中的分布及表达变化。方法将21只成年Long Evans大鼠分为正常组和视神经损伤后1、3、5、7、15 d及30 d组,每组3只,采用免疫荧光染色和免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠视网膜SDF-1、CXCR4的分布及表达变化。结果免疫荧光染色发现视神经钳夹伤大鼠SDF-1主要定位表达于视网膜内、外界膜之间的星形胶质细胞及Müller细胞,并与GFAP共表达,SDF-1阳性细胞数量随视神经损伤时间延长先增多后减少,伤后5 d达高峰。CXCR4主要表达于视网膜神经节细胞层、外核层及内核层;Western blot证实视网膜SDF-1的水平随视神经损伤出现先升高后降低的趋势,与正常组相比,视神经损伤组第1、3、5、7天水平显著升高(P<0.05)。而CXCR4的表达在视神经损伤后各时间点无明显改变(P>0.05)。结论视神经损伤后,视网膜星形胶质细胞及Müller细胞中的SDF-1表达先增强后减弱,且与视神经损伤后胶质活化相关。

α晶体蛋白对活化视网膜小胶质细胞iNOS生物活性的影响

目的观察仪晶体蛋白对脂多糖（LPS）诱导活化的视网膜小胶质细胞增生及iNOS生物学活性的影响。方法以离体培养的小胶质细胞为对象，经细胞免疫荧光及流式细胞仪鉴定纯度，用不同浓度LPS和α晶体蛋白干预，MTT法检测α晶体蛋白对视网膜活化小胶质细胞活力的影响；RT—PCR法测定NO浓度，观察小胶质细胞分泌iNOS的表达变化。结果原代培养的小胶质细胞经GSA—IB4免疫组化鉴定及CD11b流式细胞仪鉴定纯度分别达到94．15％和93．34％，10^-4g／Ld晶体蛋白可以抑制10^-6g／LLPS对视网膜小胶质细胞的活力（P〈0．01）；联合用药组iNOS蛋白质量浓度及mRNA表达量明显降低（P〈0．05）。结论在病理情况下，仪晶体蛋白可以通过抑制小胶质细胞产生NO、iNOS，减轻其对视神经损伤后视网膜神经节细胞（retinal ganglial cells，RGCs）的损害。